目的:血腦屏障（blood-brain barrier,BBB）是腦內(nèi)一種生理性屏障,能夠調(diào)節(jié)離子和分子進(jìn)出腦實(shí)質(zhì),維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的穩(wěn)定。BBB主要是由腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（brain microvascular endothelial cells,BMECs）、基底膜、星型膠質(zhì)細(xì)胞的偽足以及周細(xì)胞組成。BMECs是構(gòu)成血腦屏障的主要組成細(xì)胞,區(qū)別于其它組織的內(nèi)皮細(xì)胞,BMECs具有緊密連接、黏附連接及低水平的胞吞胞吐的特性,這些特性限制了血液中小分子通過跨細(xì)胞和細(xì)胞間的運(yùn)輸穿過BBB進(jìn)入腦內(nèi)。BMECs膜表面也具有多種底物特異性的運(yùn)輸系統(tǒng),能夠轉(zhuǎn)運(yùn)離子,細(xì)胞代謝產(chǎn)物和特異性小分子。例如,定位于BMECs腔面的鈉鉀泵（也稱Na⁺/K⁺-ATP酶）可以調(diào)節(jié)細(xì)胞中的鈉離子進(jìn)入腦間隙液中,同時(shí)將腦內(nèi)鉀離子泵入細(xì)胞中。P190是一種分子量為190KD的跨膜蛋白,最初發(fā)現(xiàn)其存在于有髓神經(jīng)纖維郎飛節(jié)的節(jié)旁區(qū)。本實(shí)驗(yàn)室前期工作首次發(fā)現(xiàn),P190在人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HBMEC）的血管腔面表達(dá),作為受體參與細(xì)菌侵襲并穿過BBB導(dǎo)致新生兒細(xì)菌性腦膜炎發(fā)生（Nat... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

ATP1B3全長(zhǎng)及糖基化位點(diǎn)突變的引物設(shè)計(jì)原理和位點(diǎn)位置圖

中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文3 結(jié)果190-C 末端結(jié)構(gòu)域（P190C）能夠與 ATP1B3 相結(jié)合 2 所示：經(jīng)體外翻譯（TNT）得到帶有 His 標(biāo)簽的 ATP1B3 和外純化的帶有 GST 標(biāo)簽的 P190 C 末端結(jié)構(gòu)域融合蛋白孵育），GST-pull down 實(shí)驗(yàn)分析蛋白間的相互作用。結(jié)果顯示 P ATP1B3 之間存在相互作用（圖 2 *所示位置）；而 HBMEC 表e β1（ATP1B1）不能夠與 P190 C 末端結(jié)構(gòu)域結(jié)合。以上結(jié)果構(gòu)域與 ATP1B3 的結(jié)合是特異性的。

圖 3：免疫熒光檢測(cè) HBMEC 細(xì)胞內(nèi) P190 與 ATP1B3 的分布情況。培養(yǎng)好HBMEC 經(jīng)甲醛固定后，利用 anti-P190 和 anti-ATP1B3 抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，熒光二抗（紅色是 P190,綠色是 ATP1B3）和 DAPI 復(fù)染后，激光共聚焦顯微鏡 Z軸連續(xù)掃描獲得圖像，分析兩種蛋白的在 HBMEC 中的分布情況；散點(diǎn)圖和共定位系數(shù)分析兩蛋白的共定位。標(biāo)尺：20μm。3.3 P190 定位在 HBMEC 的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上HBMEC 中，利用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)示蹤劑標(biāo)記細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，免疫熒光檢測(cè) P190 在細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的分布情況，結(jié)果如圖 4 所示：HBMEC 中 P190 與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的示蹤劑存在共定位（黃色顯示區(qū)域），說明 P190 主要分布在細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2940066