目的:1、收集臨床45例WHO分級不同的腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤標(biāo)本并使用甲基化特異性PCR法（MSP法）檢測miR-147啟動(dòng)子區(qū)是否發(fā)生甲基化及其與臨床病理特征的關(guān)系。2、使用不同濃度的5’aza-dC培養(yǎng)液培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87細(xì)胞,通過亞硫酸氫鹽修飾后PCR法（BSP法）明確各組中miR-147啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度及細(xì)胞增殖狀態(tài)。3、明確miR-147啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度是否與細(xì)胞增殖有關(guān)。方法:第一部分:使用MSP法檢測收集到的膠質(zhì)瘤患者標(biāo)本中miR-147啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。第二部分:配制不同濃度5’aza-dC（0umol/L、4umol/L及16umol/L）培養(yǎng)液培養(yǎng)U87細(xì)胞,將0umol/L組作為空白組,其余2組為實(shí)驗(yàn)組。培養(yǎng)24h后使用BSP法檢測各組中miR-147啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平并計(jì)算每組甲基化率,培養(yǎng)72h后觀察細(xì)胞增殖狀態(tài),并記錄細(xì)胞數(shù)目。第三部分:計(jì)算實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞受抑制程度。結(jié)果:1、使用MSP法對45例不同分級的膠質(zhì)瘤標(biāo)本進(jìn)行miR-147啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測,發(fā)現(xiàn)共有30例膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本miR-147啟動(dòng)子區(qū)存在甲基化,甲基化與膠質(zhì)瘤患者的性別... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因序列B:修飾后模式序列

圖 4 測序結(jié)果7 測序后不同分組中 miR-147 啟動(dòng)子區(qū)甲基化率（見圖 5）本次檢測序列長度為 198bp，共發(fā)現(xiàn) 9 個(gè) CG 位點(diǎn)，以下為每個(gè) CG 位點(diǎn)甲基化果。其中空白組發(fā)生甲基化的位點(diǎn)有 5 個(gè)，第 1、2、4、5 以及第 9 位點(diǎn)，甲基化分別為 100%、40%、40%、20%、60%；4umol/L 組發(fā)生甲基化的位點(diǎn)有 3 個(gè)，分別第 1、2、4 位點(diǎn)，甲 基化率分別為 100%、40%、20%；16umol 組發(fā)生甲基化的位有 2 個(gè)，分別是第 1、4 位點(diǎn)，甲基化率分別為 40%、20%�？偧谆蕿椋嚎瞻诪� 14.6%，4umol/L 組為 8.9%，16umol/L 組為 3.4%。

圖 3 電泳結(jié)果2.6 測序結(jié)果（見圖 4）發(fā)生甲基化的 CG 位點(diǎn)保持不變，未發(fā)生甲基化的 CG 位點(diǎn) C 堿基則變?yōu)?T 圖 4 測序結(jié)果2.7 測序后不同分組中 miR-147 啟動(dòng)子區(qū)甲基化率（見圖 5）本次檢測序列長度為 198bp，共發(fā)現(xiàn) 9 個(gè) CG 位點(diǎn)，以下為每個(gè) CG 位點(diǎn)甲結(jié)果。其中空白組發(fā)生甲基化的位點(diǎn)有 5 個(gè)，第 1、2、4、5 以及第 9 位點(diǎn)，甲率分別為 100%、40%、40%、20%、60%；4umol/L 組發(fā)生甲基化的位點(diǎn)有 3 個(gè)，

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2928590