本文關(guān)鍵詞：阿曼托雙黃酮對癲癇及認(rèn)知作用機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、目的觀察阿曼托雙黃酮(Amentoflavone,AF)對匹羅卡品致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響,探究其作用機(jī)制;研究阿曼托雙黃酮對大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的影響和對GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用。二、方法1.阿曼托雙黃酮對癲癇大鼠記憶損害的改善作用清潔級健康雄性SD大鼠36只,體質(zhì)量220~250g,隨機(jī)分為雙黃酮干預(yù)組、癲癇組、空白對照組,每組12只。雙黃酮干預(yù)組每日定時腹腔注射AF(25mg/kg),另兩組以等量生理鹽水腹腔注射,連續(xù)5d。第5天腹腔注射氯化鋰(127mg/kg),18h后雙黃酮干預(yù)組和癲癇組腹腔注射匹羅卡品(30mg/kg)。癲癇發(fā)作行為依據(jù)Racine分級標(biāo)準(zhǔn)分為6級,大鼠出現(xiàn)連續(xù)3次Ⅳ級、Ⅴ級驚厥被認(rèn)為點燃成功。用Morris水迷宮測驗大鼠學(xué)習(xí)記憶,通過找出水迷宮中隱藏平臺的逃逸潛伏時間和通過原平臺所在位置的次數(shù),評估大鼠學(xué)習(xí)記憶功能情況,觀察藥物干預(yù)對癲癇大鼠記憶損害的改善作用。2.阿曼托雙黃酮對海馬組織內(nèi)氧化應(yīng)激及膽堿能功能的影響水迷宮行為學(xué)實驗結(jié)束后對各組大鼠行斷頭取腦,用免疫組織化學(xué)染色檢測海馬組織乙酰膽堿含量,酶聯(lián)免疫吸附測定乙酰膽堿酯酶活性,用硫代巴比妥酸法測定MDA,用二硫代二硝基苯甲酸法測定GSH。觀察比較阿曼托雙黃酮干預(yù)對癲癇大鼠氧化應(yīng)激和膽堿能功能的影響,探究其改善記憶損傷的機(jī)制。3.阿曼托雙黃酮對4-氨基吡啶誘導(dǎo)的大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的影響選擇出生4-5周大的SD大鼠,麻醉后快速斷頭取腦,制備400um厚的島葉腦片,以37℃的人工腦脊液孵育1小時,待神經(jīng)元穩(wěn)定后以用4-氨基吡啶外液持續(xù)灌流30-40min,誘發(fā)島葉神經(jīng)元癲癇樣放電。用全細(xì)胞膜片鉗電流鉗記錄模式,記錄4-氨基吡啶誘導(dǎo)的癲癇樣放電活動,再以不同劑量的阿曼托雙黃酮進(jìn)行干預(yù),觀察比較阿曼托雙黃酮干預(yù)后神經(jīng)元放電頻率和放電持續(xù)時間的變化,評價阿曼托雙黃酮對神經(jīng)元癲癇樣放電的影響。4.阿曼托雙黃酮對GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用制備腦片,選取形態(tài)良好的島葉神經(jīng)元,隨機(jī)分成Control組、GABA組和AF干預(yù)組。用全細(xì)胞膜片鉗電壓鉗記錄模式,以離子通道阻滯劑外液阻斷神經(jīng)元基本電活動后用GABA外液誘發(fā)神經(jīng)元GABAR電流,再用不同濃度的阿曼托雙黃酮干預(yù),比較干預(yù)后GABAR電流的變化,評價阿曼托雙黃酮對GABAR電流的調(diào)節(jié)作用。5.統(tǒng)計分析采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,實驗結(jié)果以X±S表示,組間比較采用單因素方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。三、結(jié)果1.Morris水迷宮實驗找出水迷宮中隱藏平臺的逃逸潛伏時間越短和通過原平臺所在位置的次數(shù)越多,分別表示大鼠的空間學(xué)習(xí)能力和空間記憶能力越強(qiáng),反之亦然。對比各組逃逸潛伏期,癲癇組較空白對照組顯著延長(P0.01);雙黃酮干預(yù)組比癲癇組顯著縮短(P0.01);通過原平臺所在位置次數(shù)比較,癲癇組比空白對照組顯著減少(P0.01);雙黃酮干預(yù)組比癲癇組顯著增加(P0.01)。2.海馬Ach E陽性神經(jīng)元表達(dá)免疫組織化學(xué)切片背景呈淺黃色,Ach E免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元呈不同程度的棕黃色�？瞻讓φ战M、癲癇組、雙黃酮干預(yù)組CA3區(qū)Ach E免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元數(shù)分別為40.6±10.2、7.1±2.2、32.8±8.4。癲癇組CA3區(qū)Ach E免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量比空白對照組明顯減少,染色淺(P0.01);雙黃酮干預(yù)組CA3區(qū)Ach E免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量比癲癇組明顯增加,染色深(P0.01)。3.海馬Ach E活性濃度空白對照組、癲癇組、雙黃酮干預(yù)組Ach E活性濃度(U/L)分別為38.61±4.90、7.54±2.34、30.66±5.79。與空白對照組比,癲癇組海馬Ach E活性顯著降低(P0.01);與癲癇組比,雙黃酮干預(yù)組海馬Ach E活性顯著增加(P0.01)。4.MDA和GSH含量空白對照組、癲癇組、雙黃酮干預(yù)組MDA(nmol/mgprot)含量分別為4.10±0.42、9.50±1.11、5.25±0.98,GSH(mg/gprot)為5.20±0.53、2.81±0.31、6.08±0.54。相對于空白對照組,癲癇組大鼠MDA水平顯著增加(P0.01),GSH顯著減少(P0.01);相對于癲癇組,雙黃酮干預(yù)組MDA水平顯著減少(P0.01),GSH顯著增加(P0.01)。5.阿曼托雙黃酮對4-氨基吡啶誘導(dǎo)的大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的影響在全細(xì)胞電流鉗記錄模式下,Control組大鼠島葉神經(jīng)元呈現(xiàn)出單個偶發(fā)的去極化發(fā)放,這是大鼠島葉區(qū)神經(jīng)元的基本電生理活性,通過4-氨基吡啶外液持續(xù)灌流孵育大鼠島葉腦片30-40min后,神經(jīng)元逐漸出現(xiàn)穩(wěn)定的促發(fā)性癲癇樣放電。記錄結(jié)果顯示,經(jīng)過5ug/ml、10ug/ml和20ug/ml不同濃度的阿曼托雙黃酮干預(yù)后,島葉區(qū)神經(jīng)元促發(fā)性癲癇樣發(fā)電的持續(xù)時間和癲癇樣放電的發(fā)放間歇期沒有明顯的改變。用正常的人工腦脊液對島葉腦片進(jìn)行洗脫灌流,可見神經(jīng)元的癲癇樣放電次數(shù)逐漸減少,發(fā)放間歇期逐漸延長,并最終恢復(fù)到Control組的狀態(tài)。統(tǒng)計結(jié)果顯示,各濃度阿曼托雙黃酮干預(yù)組均不能顯著減少島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的持續(xù)時間和放電頻率。6.阿曼托雙黃酮對GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用用濃度為20ug/ml的阿曼托雙黃酮外液對大鼠島葉腦片進(jìn)行灌流后,誘發(fā)出的GABAR通道電流與灌流GABA外液相比,其電流幅度沒有發(fā)生明顯的改變(圖2.1 AF組),實驗結(jié)果表明阿曼托雙黃酮對GABAR電流不產(chǎn)生效應(yīng)。四、結(jié)論1、阿曼托雙黃酮可以改善致癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能,通過提高海馬乙酰膽堿酯酶的活性,抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)。2、阿曼托雙黃酮對島葉神經(jīng)元的癲癇樣放電無明顯抑制作用。3、阿曼托雙黃酮對GABA誘發(fā)的島葉神經(jīng)元GABAR通道電流不產(chǎn)生調(diào)節(jié)效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：阿曼托雙黃酮 癲癇 GABA受體電流 學(xué)習(xí)記憶 乙酰膽堿酯酶
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 中英文縮略詞表13-15
• 前言15-18
• 第一部分 阿曼托雙黃酮對癲癇大鼠記憶損害的改善作用18-26
• 材料和方法18-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-26
• 第二部分 阿曼托雙黃酮對 4-氨基吡啶誘導(dǎo)的大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的作用26-33
• 材料和方法26-29
• 結(jié)果29-31
• 討論31-33
• 第三部分 阿曼托雙黃酮對島葉神經(jīng)元GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用33-39
• 材料和方法33-36
• 結(jié)果36-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述45-62
• 綜述參考文獻(xiàn)55-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

  本文關(guān)鍵詞：阿曼托雙黃酮對癲癇及認(rèn)知作用機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：292666