本文關(guān)鍵詞：阿曼托雙黃酮對(duì)癲癇及認(rèn)知作用機(jī)制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：一、目的觀察阿曼托雙黃酮(Amentoflavone,AF)對(duì)匹羅卡品致癇大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響,探究其作用機(jī)制;研究阿曼托雙黃酮對(duì)大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的影響和對(duì)GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用。二、方法1.阿曼托雙黃酮對(duì)癲癇大鼠記憶損害的改善作用清潔級(jí)健康雄性SD大鼠36只,體質(zhì)量220~250g,隨機(jī)分為雙黃酮干預(yù)組、癲癇組、空白對(duì)照組,每組12只。雙黃酮干預(yù)組每日定時(shí)腹腔注射AF(25mg/kg),另兩組以等量生理鹽水腹腔注射,連續(xù)5d。第5天腹腔注射氯化鋰(127mg/kg),18h后雙黃酮干預(yù)組和癲癇組腹腔注射匹羅卡品(30mg/kg)。癲癇發(fā)作行為依據(jù)Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為6級(jí),大鼠出現(xiàn)連續(xù)3次Ⅳ級(jí)、Ⅴ級(jí)驚厥被認(rèn)為點(diǎn)燃成功。用Morris水迷宮測(cè)驗(yàn)大鼠學(xué)習(xí)記憶,通過找出水迷宮中隱藏平臺(tái)的逃逸潛伏時(shí)間和通過原平臺(tái)所在位置的次數(shù),評(píng)估大鼠學(xué)習(xí)記憶功能情況,觀察藥物干預(yù)對(duì)癲癇大鼠記憶損害的改善作用。2.阿曼托雙黃酮對(duì)海馬組織內(nèi)氧化應(yīng)激及膽堿能功能的影響水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)各組大鼠行斷頭取腦,用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)海馬組織乙酰膽堿含量,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定乙酰膽堿酯酶活性,用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA,用二硫代二硝基苯甲酸法測(cè)定GSH。觀察比較阿曼托雙黃酮干預(yù)對(duì)癲癇大鼠氧化應(yīng)激和膽堿能功能的影響,探究其改善記憶損傷的機(jī)制。3.阿曼托雙黃酮對(duì)4-氨基吡啶誘導(dǎo)的大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的影響選擇出生4-5周大的SD大鼠,麻醉后快速斷頭取腦,制備400um厚的島葉腦片,以37℃的人工腦脊液孵育1小時(shí),待神經(jīng)元穩(wěn)定后以用4-氨基吡啶外液持續(xù)灌流30-40min,誘發(fā)島葉神經(jīng)元癲癇樣放電。用全細(xì)胞膜片鉗電流鉗記錄模式,記錄4-氨基吡啶誘導(dǎo)的癲癇樣放電活動(dòng),再以不同劑量的阿曼托雙黃酮進(jìn)行干預(yù),觀察比較阿曼托雙黃酮干預(yù)后神經(jīng)元放電頻率和放電持續(xù)時(shí)間的變化,評(píng)價(jià)阿曼托雙黃酮對(duì)神經(jīng)元癲癇樣放電的影響。4.阿曼托雙黃酮對(duì)GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用制備腦片,選取形態(tài)良好的島葉神經(jīng)元,隨機(jī)分成Control組、GABA組和AF干預(yù)組。用全細(xì)胞膜片鉗電壓鉗記錄模式,以離子通道阻滯劑外液阻斷神經(jīng)元基本電活動(dòng)后用GABA外液誘發(fā)神經(jīng)元GABAR電流,再用不同濃度的阿曼托雙黃酮干預(yù),比較干預(yù)后GABAR電流的變化,評(píng)價(jià)阿曼托雙黃酮對(duì)GABAR電流的調(diào)節(jié)作用。5.統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以X±S表示,組間比較采用單因素方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三、結(jié)果1.Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)找出水迷宮中隱藏平臺(tái)的逃逸潛伏時(shí)間越短和通過原平臺(tái)所在位置的次數(shù)越多,分別表示大鼠的空間學(xué)習(xí)能力和空間記憶能力越強(qiáng),反之亦然。對(duì)比各組逃逸潛伏期,癲癇組較空白對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(P0.01);雙黃酮干預(yù)組比癲癇組顯著縮短(P0.01);通過原平臺(tái)所在位置次數(shù)比較,癲癇組比空白對(duì)照組顯著減少(P0.01);雙黃酮干預(yù)組比癲癇組顯著增加(P0.01)。2.海馬Ach E陽性神經(jīng)元表達(dá)免疫組織化學(xué)切片背景呈淺黃色,Ach E免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元呈不同程度的棕黃色�？瞻讓�(duì)照組、癲癇組、雙黃酮干預(yù)組CA3區(qū)Ach E免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元數(shù)分別為40.6±10.2、7.1±2.2、32.8±8.4。癲癇組CA3區(qū)Ach E免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量比空白對(duì)照組明顯減少,染色淺(P0.01);雙黃酮干預(yù)組CA3區(qū)Ach E免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞數(shù)量比癲癇組明顯增加,染色深(P0.01)。3.海馬Ach E活性濃度空白對(duì)照組、癲癇組、雙黃酮干預(yù)組Ach E活性濃度(U/L)分別為38.61±4.90、7.54±2.34、30.66±5.79。與空白對(duì)照組比,癲癇組海馬Ach E活性顯著降低(P0.01);與癲癇組比,雙黃酮干預(yù)組海馬Ach E活性顯著增加(P0.01)。4.MDA和GSH含量空白對(duì)照組、癲癇組、雙黃酮干預(yù)組MDA(nmol/mgprot)含量分別為4.10±0.42、9.50±1.11、5.25±0.98,GSH(mg/gprot)為5.20±0.53、2.81±0.31、6.08±0.54。相對(duì)于空白對(duì)照組,癲癇組大鼠MDA水平顯著增加(P0.01),GSH顯著減少(P0.01);相對(duì)于癲癇組,雙黃酮干預(yù)組MDA水平顯著減少(P0.01),GSH顯著增加(P0.01)。5.阿曼托雙黃酮對(duì)4-氨基吡啶誘導(dǎo)的大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的影響在全細(xì)胞電流鉗記錄模式下,Control組大鼠島葉神經(jīng)元呈現(xiàn)出單個(gè)偶發(fā)的去極化發(fā)放,這是大鼠島葉區(qū)神經(jīng)元的基本電生理活性,通過4-氨基吡啶外液持續(xù)灌流孵育大鼠島葉腦片30-40min后,神經(jīng)元逐漸出現(xiàn)穩(wěn)定的促發(fā)性癲癇樣放電。記錄結(jié)果顯示,經(jīng)過5ug/ml、10ug/ml和20ug/ml不同濃度的阿曼托雙黃酮干預(yù)后,島葉區(qū)神經(jīng)元促發(fā)性癲癇樣發(fā)電的持續(xù)時(shí)間和癲癇樣放電的發(fā)放間歇期沒有明顯的改變。用正常的人工腦脊液對(duì)島葉腦片進(jìn)行洗脫灌流,可見神經(jīng)元的癲癇樣放電次數(shù)逐漸減少,發(fā)放間歇期逐漸延長(zhǎng),并最終恢復(fù)到Control組的狀態(tài)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,各濃度阿曼托雙黃酮干預(yù)組均不能顯著減少島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的持續(xù)時(shí)間和放電頻率。6.阿曼托雙黃酮對(duì)GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用用濃度為20ug/ml的阿曼托雙黃酮外液對(duì)大鼠島葉腦片進(jìn)行灌流后,誘發(fā)出的GABAR通道電流與灌流GABA外液相比,其電流幅度沒有發(fā)生明顯的改變(圖2.1 AF組),實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明阿曼托雙黃酮對(duì)GABAR電流不產(chǎn)生效應(yīng)。四、結(jié)論1、阿曼托雙黃酮可以改善致癇大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能,通過提高海馬乙酰膽堿酯酶的活性,抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)。2、阿曼托雙黃酮對(duì)島葉神經(jīng)元的癲癇樣放電無明顯抑制作用。3、阿曼托雙黃酮對(duì)GABA誘發(fā)的島葉神經(jīng)元GABAR通道電流不產(chǎn)生調(diào)節(jié)效應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：阿曼托雙黃酮 癲癇 GABA受體電流 學(xué)習(xí)記憶 乙酰膽堿酯酶
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 中英文縮略詞表13-15
• 前言15-18
• 第一部分 阿曼托雙黃酮對(duì)癲癇大鼠記憶損害的改善作用18-26
• 材料和方法18-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-26
• 第二部分 阿曼托雙黃酮對(duì) 4-氨基吡啶誘導(dǎo)的大鼠島葉神經(jīng)元癲癇樣放電的作用26-33
• 材料和方法26-29
• 結(jié)果29-31
• 討論31-33
• 第三部分 阿曼托雙黃酮對(duì)島葉神經(jīng)元GABAR通道電流的調(diào)節(jié)作用33-39
• 材料和方法33-36
• 結(jié)果36-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 綜述45-62
• 綜述參考文獻(xiàn)55-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文63

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本文編號(hào)：292666