本文關鍵詞：MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導神經細胞凋亡的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 在整體動物水平，研究MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注（MCAO/R）誘導神經細胞凋亡的影響及其機制。 方法： 1、慢病毒介導的MRTF-A（LV-MRTF-A）在大鼠腦皮層中表達的分布及時間相關性的研究：①30只SPF級SD大鼠隨機分為5組，以注射陰性慢病毒（NEG-LV）為對照組，其余4組分別腦室注射LV-MRTF-A1μl、2μl、4μl、5μl，于第5d取全腦做石蠟切片，用激光共聚焦顯微鏡觀察MRTF-A表達；②取腦室注射4μl LV-MRTF-A5d的腦組織，激光共聚焦顯微鏡觀察大鼠腦皮層不同部位MRTF-A表達；③36只SPF級SD大鼠隨機分為6組，腦室注射LV-MRTF-A后，分別于1d、3d、5d、7d、9d取全腦組織做石蠟切片，激光共聚焦顯微鏡觀察各組腦皮層中MRTF-A表達。 2、MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導的神經細胞凋亡的影響：84只SPF級SD大鼠隨機分成3組：對照組、模型組、實驗組。對照組與模型組分別腦室注射4μlNEG-LV；實驗組腦室注射4μl LV-MRTF-A。腦室注射4天后，實驗組與模型組分別構建缺血再灌注模型（MCAO2h/R24h、MCAO2h/R48h、MCAO2h/R72h），用Longa’s法進行神經功能評分；用TTC染色評價腦梗塞體積；用TUNEL法檢測細胞凋亡率。 3、MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導神經細胞凋亡作用機制：54只SPF級SD大鼠隨機分成3組：對照組、模型組、實驗組。對照組與模型組分別腦室注射4μl NEG-LV；實驗組腦室注射4μl LV-MRTF-A。腦室注射4天后，實驗組與模型組分別構建缺血再灌注模型（MCAO2h/R24h），用Real-time PCR檢測腦皮層中MRTF-A、caspase3及Mcl-1mRNA表達；用Western blot檢測腦皮層中MRTF-A、CC3及Mcl-1蛋白表達；用免疫熒光法檢測腦皮層細胞色素C、Apaf-1、CC3、Mcl-1表達。 結果： 1、LV-MRTF-A在大鼠腦皮層感染劑量研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射不同劑量LV-MRTF-A5d后，1μl和2μl組MRTF-A表達較低，與2μl組對比，4μl和5μl組MRTF-A表達明顯增加，且兩組表達無差異；LV-MRTF-A在大鼠腦皮層中分布研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射4μl LV-MRTF-A5d后，MRTF-A在腦皮層中廣泛表達，以注射點及其四周表達最高，注射點遠端表達量逐漸下降；LV-MRTF-A在大鼠腦皮層中感染時間研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射4μl LV-MRTF-A后，1d、3d有少量MRTF-A表達，5d、7d MRTF-A表達相比3d呈明顯上升趨勢，9d表達量相比7d降低。 2、MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導的神經細胞凋亡的影響研究發(fā)現(xiàn)：模型組神經功能評分及腦梗死體積與對照組相比有顯著性差異（P＜0.01），，實驗組神經功能評分及腦梗死體積與模型組的同一再灌注時間點組比較，均顯著減少，具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05或P＜0.01）；TUNEL法檢測神經細胞凋亡率表明，與對照組比較，模型組凋亡率明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），且隨著再灌注時間延長，凋亡率呈逐漸下降趨勢。實驗組與模型組的同一再灌注時間點對比，細胞凋亡率均顯著下降，且具有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。 3、MRTF-A抗大鼠腦缺血再灌注誘導凋亡的機制研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射4μlLV-MRTF-A后，大鼠腦皮層中MRTF-A mRNA及蛋白表達顯著上升。Real-timePCR結果顯示，與對照組比較，模型組caspase-3mRNA表達明顯增加，Mcl-1mRNA表達明顯下降（P＜0.01）。與模型組對比，實驗組caspase-3mRNA表達明顯下降，Mcl-1mRNA表達明顯增加（P＜0.01）。Western blot結果顯示，與對照組比較，模型組CC3蛋白表達明顯增加，Mcl-1蛋白表達明顯下降（P＜0.01）。與模型組對比，實驗組CC3蛋白表達明顯下降，Mcl-1蛋白表達明顯增加（P＜0.01）；激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)：MCAO2h/R24h誘導cyt C與Apaf-1高表達，且兩者表達交集區(qū)域范圍廣，CC3表達明顯增加，Mcl-1表達明顯下降。腦室注射MRTF-A后，cyt C與Apaf-1表達及交集區(qū)域均明顯減少；CC3表達明顯下降，Mcl-1表達明顯增加。 結論： 1、LV-MRTF-A最佳注射劑量為4μl，LV-MRTF-A最強表達時段為注射后第5d-7d，且以注射點為LV-MRTF-A最強表達區(qū)域并向皮層四周擴散表達。說明LV-MRTF-A能有效地感染大鼠腦皮層。 2、整體MCAO/R大鼠模型上，腦室注射LV-MRTF-A能夠明顯抑制腦缺血再灌注誘導的神經細胞凋亡，改善神經功能損傷，減少腦梗死體積，其機制可能與MRTF-A降低cytC與Apaf-1的表達及結合，以及下調促凋亡基因caspase3、CC3表達，上調抗凋亡靶基因Mcl-1的表達有關。
【關鍵詞】：慢病毒 MRTF-A 腦缺血再灌注損傷 凋亡
【學位授予單位】：武漢科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮寫對照表(Abbreviations)11-15
• 前言15-19
• 第一部分19-32
• 1.材料與儀器19-22
• 1.1 實驗動物及質粒19-20
• 1.2 心臟灌注試劑20-21
• 1.3 腦組織石蠟包埋及切片相關試劑21
• 1.4 熒光檢測相關試劑21-22
• 1.5 實驗儀器22
• 2 方法22-25
• 2.1 實驗設計22-23
• 2.2 慢病毒質粒的腦室注射23-24
• 2.3 心臟灌注24-25
• 2.4 石蠟切片的制作25
• 2.5 激光共聚焦顯微鏡檢測熒光表達25
• 2.6 統(tǒng)計學分析25
• 3 結果25-31
• 3.1 不同劑量 LV-MRTF-A 在大鼠腦皮層中表達25-27
• 3.2 LV-MRTF-A 在大鼠腦皮層中表達分布27-29
• 3.3 大鼠腦皮層中 LV-MRTF-A 表達時間相關性29-31
• 4.討論31-32
• 第二部分32-42
• 1 材料與儀器32-34
• 1.1 實驗動物分組及處理32
• 1.2 大鼠右側腦中動脈栓塞（MCAO）模型及心臟灌注相關試劑32-33
• 1.3 TTC 染色及 TUNEL 檢測相關試劑33
• 1.4 心臟灌注相關試劑33-34
• 1.5 石蠟包埋及切片相關試劑34
• 1.6 實驗儀器34
• 2 方法34-37
• 2.1 實驗動物分組及處理34-35
• 2.2 大鼠右側大腦中動脈阻塞（MCAO）/再灌注損傷模型制作[26]35
• 2.3 神經功能評分35
• 2.4 心臟灌注35
• 2.5 石蠟切片的制作35-36
• 2.6 TTC 染色36
• 2.7 TUNEL 法分析腦皮層神經細胞凋亡率（%）36
• 2.8 統(tǒng)計學分析36-37
• 3 結果37-41
• 3.1 MRTF-A 對大鼠腦神經功能及腦梗死體積的影響37-39
• 3.2 MRTF-A 對 MCAO/R 誘導的大鼠腦神經細胞凋亡的影響39-41
• 4 討論41-42
• 第三部分42-58
• 1 材料與儀器42-46
• 1.1 實驗動物42
• 1.2 大鼠 MCAO 造模及心臟灌注相關試劑42-43
• 1.3 Real-time PCR 相關檢測試劑43
• 1.4 western blot 相關試劑43-45
• 1.5 免疫熒光檢測相關試劑45
• 1.6 實驗儀器45-46
• 2 方法46-51
• 2.1 實驗動物分組及處理46
• 2.2 心臟灌注46-47
• 2.3 石蠟切片的制作47
• 2.4 大鼠右側大腦中動脈阻塞模型（MCAO）制作47
• 2.5 Real-time PCR 檢測47-49
• 2.6 Western blot 檢測49-50
• 2.7 免疫熒光檢測50
• 2.8 統(tǒng)計學分析50-51
• 3 結果51-56
• 3.1 MRTF-A 對凋亡相關基因 caspase3 、Mcl-1 mRNA 表達的影響51-52
• 3.2 MRTF-A 對凋亡相關基因 CC3 及 Mcl-1 蛋白表達影響52-53
• 3.3 MRTF-A 對 cytC、Apaf-1 、CC3 及 Mcl-1 的表達影響53-56
• 4 討論56-58
• 結論與展望58-59
• 參考文獻59-62
• 致謝62-63
• 綜述63-72
• 參考文獻67-72
• 附錄 1 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文72-73
• 附錄 2 攻讀碩士學位期間參加的科研項目73

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前3條

1 李志平;姜穩(wěn)妮;李波;;卒中后抑郁心理干預治療觀察[J];中國實用神經疾病雜志;2009年05期

2 施勤,劉繼明,張學光;細胞凋亡的線粒體調控與Bcl-2基因家族[J];上海免疫學雜志;2000年01期

3 王淑艷;張愚;;慢病毒載體的設計及應用進展[J];中國生物工程雜志;2006年11期

  本文關鍵詞：MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導神經細胞凋亡的影響及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：292067