本文關(guān)鍵詞：MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 在整體動(dòng)物水平，研究MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注（MCAO/R）誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。 方法： 1、慢病毒介導(dǎo)的MRTF-A（LV-MRTF-A）在大鼠腦皮層中表達(dá)的分布及時(shí)間相關(guān)性的研究：①30只SPF級SD大鼠隨機(jī)分為5組，以注射陰性慢病毒（NEG-LV）為對照組，其余4組分別腦室注射LV-MRTF-A1μl、2μl、4μl、5μl，于第5d取全腦做石蠟切片，用激光共聚焦顯微鏡觀察MRTF-A表達(dá)；②取腦室注射4μl LV-MRTF-A5d的腦組織，激光共聚焦顯微鏡觀察大鼠腦皮層不同部位MRTF-A表達(dá)；③36只SPF級SD大鼠隨機(jī)分為6組，腦室注射LV-MRTF-A后，分別于1d、3d、5d、7d、9d取全腦組織做石蠟切片，激光共聚焦顯微鏡觀察各組腦皮層中MRTF-A表達(dá)。 2、MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響：84只SPF級SD大鼠隨機(jī)分成3組：對照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組。對照組與模型組分別腦室注射4μlNEG-LV；實(shí)驗(yàn)組腦室注射4μl LV-MRTF-A。腦室注射4天后，實(shí)驗(yàn)組與模型組分別構(gòu)建缺血再灌注模型（MCAO2h/R24h、MCAO2h/R48h、MCAO2h/R72h），用Longa’s法進(jìn)行神經(jīng)功能評分；用TTC染色評價(jià)腦梗塞體積；用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡率。 3、MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用機(jī)制：54只SPF級SD大鼠隨機(jī)分成3組：對照組、模型組、實(shí)驗(yàn)組。對照組與模型組分別腦室注射4μl NEG-LV；實(shí)驗(yàn)組腦室注射4μl LV-MRTF-A。腦室注射4天后，實(shí)驗(yàn)組與模型組分別構(gòu)建缺血再灌注模型（MCAO2h/R24h），用Real-time PCR檢測腦皮層中MRTF-A、caspase3及Mcl-1mRNA表達(dá)；用Western blot檢測腦皮層中MRTF-A、CC3及Mcl-1蛋白表達(dá)；用免疫熒光法檢測腦皮層細(xì)胞色素C、Apaf-1、CC3、Mcl-1表達(dá)。 結(jié)果： 1、LV-MRTF-A在大鼠腦皮層感染劑量研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射不同劑量LV-MRTF-A5d后，1μl和2μl組MRTF-A表達(dá)較低，與2μl組對比，4μl和5μl組MRTF-A表達(dá)明顯增加，且兩組表達(dá)無差異；LV-MRTF-A在大鼠腦皮層中分布研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射4μl LV-MRTF-A5d后，MRTF-A在腦皮層中廣泛表達(dá)，以注射點(diǎn)及其四周表達(dá)最高，注射點(diǎn)遠(yuǎn)端表達(dá)量逐漸下降；LV-MRTF-A在大鼠腦皮層中感染時(shí)間研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射4μl LV-MRTF-A后，1d、3d有少量MRTF-A表達(dá)，5d、7d MRTF-A表達(dá)相比3d呈明顯上升趨勢，9d表達(dá)量相比7d降低。 2、MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響研究發(fā)現(xiàn)：模型組神經(jīng)功能評分及腦梗死體積與對照組相比有顯著性差異（P＜0.01），，實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)功能評分及腦梗死體積與模型組的同一再灌注時(shí)間點(diǎn)組比較，均顯著減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05或P＜0.01）；TUNEL法檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡率表明，與對照組比較，模型組凋亡率明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），且隨著再灌注時(shí)間延長，凋亡率呈逐漸下降趨勢。實(shí)驗(yàn)組與模型組的同一再灌注時(shí)間點(diǎn)對比，細(xì)胞凋亡率均顯著下降，且具有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01）。 3、MRTF-A抗大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)：大鼠腦室注射4μlLV-MRTF-A后，大鼠腦皮層中MRTF-A mRNA及蛋白表達(dá)顯著上升。Real-timePCR結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組caspase-3mRNA表達(dá)明顯增加，Mcl-1mRNA表達(dá)明顯下降（P＜0.01）。與模型組對比，實(shí)驗(yàn)組caspase-3mRNA表達(dá)明顯下降，Mcl-1mRNA表達(dá)明顯增加（P＜0.01）。Western blot結(jié)果顯示，與對照組比較，模型組CC3蛋白表達(dá)明顯增加，Mcl-1蛋白表達(dá)明顯下降（P＜0.01）。與模型組對比，實(shí)驗(yàn)組CC3蛋白表達(dá)明顯下降，Mcl-1蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.01）；激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)：MCAO2h/R24h誘導(dǎo)cyt C與Apaf-1高表達(dá)，且兩者表達(dá)交集區(qū)域范圍廣，CC3表達(dá)明顯增加，Mcl-1表達(dá)明顯下降。腦室注射MRTF-A后，cyt C與Apaf-1表達(dá)及交集區(qū)域均明顯減少；CC3表達(dá)明顯下降，Mcl-1表達(dá)明顯增加。 結(jié)論： 1、LV-MRTF-A最佳注射劑量為4μl，LV-MRTF-A最強(qiáng)表達(dá)時(shí)段為注射后第5d-7d，且以注射點(diǎn)為LV-MRTF-A最強(qiáng)表達(dá)區(qū)域并向皮層四周擴(kuò)散表達(dá)。說明LV-MRTF-A能有效地感染大鼠腦皮層。 2、整體MCAO/R大鼠模型上，腦室注射LV-MRTF-A能夠明顯抑制腦缺血再灌注誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡，改善神經(jīng)功能損傷，減少腦梗死體積，其機(jī)制可能與MRTF-A降低cytC與Apaf-1的表達(dá)及結(jié)合，以及下調(diào)促凋亡基因caspase3、CC3表達(dá)，上調(diào)抗凋亡靶基因Mcl-1的表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：慢病毒 MRTF-A 腦缺血再灌注損傷 凋亡
【學(xué)位授予單位】：武漢科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.3
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文縮寫對照表(Abbreviations)11-15
• 前言15-19
• 第一部分19-32
• 1.材料與儀器19-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及質(zhì)粒19-20
• 1.2 心臟灌注試劑20-21
• 1.3 腦組織石蠟包埋及切片相關(guān)試劑21
• 1.4 熒光檢測相關(guān)試劑21-22
• 1.5 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2 方法22-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)22-23
• 2.2 慢病毒質(zhì)粒的腦室注射23-24
• 2.3 心臟灌注24-25
• 2.4 石蠟切片的制作25
• 2.5 激光共聚焦顯微鏡檢測熒光表達(dá)25
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25
• 3 結(jié)果25-31
• 3.1 不同劑量 LV-MRTF-A 在大鼠腦皮層中表達(dá)25-27
• 3.2 LV-MRTF-A 在大鼠腦皮層中表達(dá)分布27-29
• 3.3 大鼠腦皮層中 LV-MRTF-A 表達(dá)時(shí)間相關(guān)性29-31
• 4.討論31-32
• 第二部分32-42
• 1 材料與儀器32-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理32
• 1.2 大鼠右側(cè)腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）模型及心臟灌注相關(guān)試劑32-33
• 1.3 TTC 染色及 TUNEL 檢測相關(guān)試劑33
• 1.4 心臟灌注相關(guān)試劑33-34
• 1.5 石蠟包埋及切片相關(guān)試劑34
• 1.6 實(shí)驗(yàn)儀器34
• 2 方法34-37
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理34-35
• 2.2 大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞（MCAO）/再灌注損傷模型制作[26]35
• 2.3 神經(jīng)功能評分35
• 2.4 心臟灌注35
• 2.5 石蠟切片的制作35-36
• 2.6 TTC 染色36
• 2.7 TUNEL 法分析腦皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡率（%）36
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析36-37
• 3 結(jié)果37-41
• 3.1 MRTF-A 對大鼠腦神經(jīng)功能及腦梗死體積的影響37-39
• 3.2 MRTF-A 對 MCAO/R 誘導(dǎo)的大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響39-41
• 4 討論41-42
• 第三部分42-58
• 1 材料與儀器42-46
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物42
• 1.2 大鼠 MCAO 造模及心臟灌注相關(guān)試劑42-43
• 1.3 Real-time PCR 相關(guān)檢測試劑43
• 1.4 western blot 相關(guān)試劑43-45
• 1.5 免疫熒光檢測相關(guān)試劑45
• 1.6 實(shí)驗(yàn)儀器45-46
• 2 方法46-51
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理46
• 2.2 心臟灌注46-47
• 2.3 石蠟切片的制作47
• 2.4 大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞模型（MCAO）制作47
• 2.5 Real-time PCR 檢測47-49
• 2.6 Western blot 檢測49-50
• 2.7 免疫熒光檢測50
• 2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析50-51
• 3 結(jié)果51-56
• 3.1 MRTF-A 對凋亡相關(guān)基因 caspase3 、Mcl-1 mRNA 表達(dá)的影響51-52
• 3.2 MRTF-A 對凋亡相關(guān)基因 CC3 及 Mcl-1 蛋白表達(dá)影響52-53
• 3.3 MRTF-A 對 cytC、Apaf-1 、CC3 及 Mcl-1 的表達(dá)影響53-56
• 4 討論56-58
• 結(jié)論與展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62-63
• 綜述63-72
• 參考文獻(xiàn)67-72
• 附錄 1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文72-73
• 附錄 2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目73

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

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3 王淑艷;張愚;;慢病毒載體的設(shè)計(jì)及應(yīng)用進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2006年11期

  本文關(guān)鍵詞：MRTF-A對大鼠腦缺血再灌注誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：292067