錳通過BNIP3介導(dǎo)的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)多巴胺能神經(jīng)元線粒體自噬
發(fā)布時(shí)間：2020-12-14 04:15
目的探討線粒體自噬受體蛋白BNIP3是否通過調(diào)節(jié)ROS生成介導(dǎo)MnCl2誘導(dǎo)具有多巴胺能作用的SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞發(fā)生線粒體自噬。方法⑴.細(xì)胞毒性檢測(cè):取對(duì)數(shù)生長期的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞,使用細(xì)胞增殖/毒性檢測(cè)試劑盒CCK-8檢測(cè)不同時(shí)間及不同濃度MnCl2作用下SH-SY5Y細(xì)胞的細(xì)胞活力;使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MnCl2作用下SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位改變情況。⑵.MnCl2誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞線粒體自噬檢測(cè):經(jīng)MnCl2處理24h后采用蛋白免疫印記法檢測(cè)線粒體自噬受體蛋白BNIP3、線粒體外膜標(biāo)記蛋白TOMM20的表達(dá)量及自噬標(biāo)記蛋白LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)化情況;應(yīng)用透射電子顯微鏡直接觀察MnCl2作用下SH-SY5Y細(xì)胞的線粒體形態(tài)改變情況及線粒體自噬是否發(fā)生;應(yīng)用自噬抑制劑3-MA反證MnCl2作用下SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)線粒體自噬體是否形成;使用熒光共聚焦顯微鏡檢測(cè)MnCl2
【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)
【文章頁數(shù)】：78 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
哺乳動(dòng)物中線粒體自噬的相關(guān)調(diào)控通路Figure1：Mitophagyassociatedregulatorypathwayinanimals
2作用后 SH-SY5Y 的細(xì)胞活性，結(jié)果表明，與 control 組相比，不同濃度 MnCl2作用 12 小時(shí)對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的抑制作用無明顯差別，P＞0.05，而不同濃度作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 及 48h 后，其活性均隨 MnCl2濃度逐漸加大而明顯降低，均 P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 2A），24 小時(shí)及 48 小時(shí)的IC50 分別為 585.31±139.77μmol/L、345.91±273.18μmol/L，結(jié)合以上數(shù)據(jù)，除特殊情況外，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將以 0、200、400、800μmol/L 或單獨(dú)以 400μmol/L干預(yù) 24h 進(jìn)行機(jī)制研究。此外，為了進(jìn)一步了解 MnCl2對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的毒性作用，我們通過 JC-1 試劑盒對(duì)細(xì)胞凋亡早期的標(biāo)志性事件:線粒體膜電位進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng) 200、400、800μmol/L MnCl2干預(yù) 24 小時(shí)后，control 組及各組線粒體膜電位分別為 1.00±0.02、0.60±0.03、0.23±0.03、0.14±0.01，P＜0.01 或 P＜0.05（圖 2B），說明 MnCl2可致線粒體損傷并誘導(dǎo) SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生凋亡。
2作用后 SH-SY5Y 的細(xì)胞活性，結(jié)果表明，與 control 組相比，不同濃度 MnCl2作用 12 小時(shí)對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的抑制作用無明顯差別，P＞0.05，而不同濃度作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 及 48h 后，其活性均隨 MnCl2濃度逐漸加大而明顯降低，均 P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 2A），24 小時(shí)及 48 小時(shí)的IC50 分別為 585.31±139.77μmol/L、345.91±273.18μmol/L，結(jié)合以上數(shù)據(jù)，除特殊情況外，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將以 0、200、400、800μmol/L 或單獨(dú)以 400μmol/L干預(yù) 24h 進(jìn)行機(jī)制研究。此外，為了進(jìn)一步了解 MnCl2對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的毒性作用，我們通過 JC-1 試劑盒對(duì)細(xì)胞凋亡早期的標(biāo)志性事件:線粒體膜電位進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng) 200、400、800μmol/L MnCl2干預(yù) 24 小時(shí)后，control 組及各組線粒體膜電位分別為 1.00±0.02、0.60±0.03、0.23±0.03、0.14±0.01，P＜0.01 或 P＜0.05（圖 2B），說明 MnCl2可致線粒體損傷并誘導(dǎo) SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生凋亡。
本文編號(hào)：2915791
【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)
【文章頁數(shù)】：78 頁
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
哺乳動(dòng)物中線粒體自噬的相關(guān)調(diào)控通路Figure1：Mitophagyassociatedregulatorypathwayinanimals
2作用后 SH-SY5Y 的細(xì)胞活性，結(jié)果表明，與 control 組相比，不同濃度 MnCl2作用 12 小時(shí)對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的抑制作用無明顯差別，P＞0.05，而不同濃度作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 及 48h 后，其活性均隨 MnCl2濃度逐漸加大而明顯降低，均 P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 2A），24 小時(shí)及 48 小時(shí)的IC50 分別為 585.31±139.77μmol/L、345.91±273.18μmol/L，結(jié)合以上數(shù)據(jù)，除特殊情況外，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將以 0、200、400、800μmol/L 或單獨(dú)以 400μmol/L干預(yù) 24h 進(jìn)行機(jī)制研究。此外，為了進(jìn)一步了解 MnCl2對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的毒性作用，我們通過 JC-1 試劑盒對(duì)細(xì)胞凋亡早期的標(biāo)志性事件:線粒體膜電位進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng) 200、400、800μmol/L MnCl2干預(yù) 24 小時(shí)后，control 組及各組線粒體膜電位分別為 1.00±0.02、0.60±0.03、0.23±0.03、0.14±0.01，P＜0.01 或 P＜0.05（圖 2B），說明 MnCl2可致線粒體損傷并誘導(dǎo) SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生凋亡。
2作用后 SH-SY5Y 的細(xì)胞活性，結(jié)果表明，與 control 組相比，不同濃度 MnCl2作用 12 小時(shí)對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的抑制作用無明顯差別，P＞0.05，而不同濃度作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 24h 及 48h 后，其活性均隨 MnCl2濃度逐漸加大而明顯降低，均 P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 2A），24 小時(shí)及 48 小時(shí)的IC50 分別為 585.31±139.77μmol/L、345.91±273.18μmol/L，結(jié)合以上數(shù)據(jù)，除特殊情況外，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將以 0、200、400、800μmol/L 或單獨(dú)以 400μmol/L干預(yù) 24h 進(jìn)行機(jī)制研究。此外，為了進(jìn)一步了解 MnCl2對(duì) SH-SY5Y 細(xì)胞的毒性作用，我們通過 JC-1 試劑盒對(duì)細(xì)胞凋亡早期的標(biāo)志性事件:線粒體膜電位進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng) 200、400、800μmol/L MnCl2干預(yù) 24 小時(shí)后，control 組及各組線粒體膜電位分別為 1.00±0.02、0.60±0.03、0.23±0.03、0.14±0.01，P＜0.01 或 P＜0.05（圖 2B），說明 MnCl2可致線粒體損傷并誘導(dǎo) SH-SY5Y細(xì)胞發(fā)生凋亡。
本文編號(hào)：2915791
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