背景帕金森�。≒D）是全球散發(fā)的慢性神經(jīng)退行性疾病。其病因多樣,病理表現(xiàn)為腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。殘存細(xì)胞內(nèi)路易小體為該疾病典型病理表現(xiàn),始終為研究者重視。路易小體實(shí)際是神經(jīng)元出現(xiàn)蛋白代謝功能異常后,自噬溶酶體內(nèi)突觸核蛋白等物質(zhì)降解紊亂所遺留的一種特殊病理形式。細(xì)胞自噬的分子機(jī)制因與細(xì)胞的代謝、免疫、營(yíng)養(yǎng)、應(yīng)激及死亡等多種機(jī)制相關(guān)而備受關(guān)注。進(jìn)一步研究中我們發(fā)現(xiàn),因該疾病中多巴胺能神經(jīng)元的特殊性,進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的誘導(dǎo)劑在相應(yīng)細(xì)胞試驗(yàn)中較難復(fù)制出令人滿意的自噬細(xì)胞模型。方法及結(jié)果:本研究者通過(guò)文獻(xiàn)檢索,首先通過(guò)不同濃度魚藤酮對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞進(jìn)行不同時(shí)段誘導(dǎo)篩選,經(jīng)熒光染色后鏡下凋亡觀察、流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)定量、細(xì)胞活性試驗(yàn)（CCK8法）驗(yàn)證,自噬誘導(dǎo)后蛋白測(cè)定、熒光染色觀察、溶酶體抑制劑反向驗(yàn)證等多種實(shí)驗(yàn)手段,終選定以特定時(shí)長(zhǎng)特定濃度魚藤酮對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞誘導(dǎo),來(lái)進(jìn)行下一步以自噬為中心目的的帕金森病早期的細(xì)胞分子生物學(xué)研究。在該細(xì)胞模型的進(jìn)一步研究中,我們發(fā)現(xiàn)FOX03a蛋白作為一種復(fù)雜功能的轉(zhuǎn)錄因子,通過(guò)磷酸化能活動(dòng)所致漿核間移動(dòng)及轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng),調(diào)控下游因子在SH-SY5Y細(xì)胞的自... 

【文章來(lái)源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：129 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１細(xì)胞在２０Ｘ目鏡下?細(xì)胞在４０Ｘ目鏡下??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｕｎｄｅｒ?２０Ｘ?ｔｈｅ?ｃｅｌｌｓ?ｕｎｄｅｒ?４０Ｘ??

４）？加入５叫Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ，輕輕混勻。??５）．加入１００碘化丙啶染色液，輕輕混勻。??６）．室溫（２０－２５°Ｃ）避光孵育１０－２０分鐘，隨后置于冰浴中。使用鋁箔進(jìn)行避??。孵育過(guò)程中重懸細(xì)胞２－３次以改善染色效果。然后以同法處理同一樣本置??共熒光顯微鏡下檢測(cè)：經(jīng)ｌ〇〇〇ｇ離心５分鐘，收集細(xì)胞，用５０－１００４??ｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞，涂片后，熒光顯微鏡下觀察。??３．３隨即進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，Ａｎｎｅｘｉｎ?Ｖ－ＦＩＴＣ為綠色熒光，碘化丙啶（ＰＩ）??紅色焚光，??４試驗(yàn)結(jié)果：??４．１凋亡染色下鏡下直接觀察（因圖像素材過(guò)多，僅展示較典型圖像供觀者??行定性參考）??建模前，根據(jù)鏡下肉眼觀察，了解ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞在魚藤酮誘導(dǎo)下產(chǎn)生細(xì)??死亡。經(jīng)熒光凋亡雙染色試驗(yàn)，經(jīng)熒光共聚焦顯微鏡拍攝（圖２－２至圖２－６）??

對(duì)照組(DMS}24H流式細(xì)胞儀各項(xiàng)數(shù)據(jù)


本文編號(hào)：2908465