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MIR137對細胞自噬的調控作用及機制研究

發(fā)布時間:2017-04-07 07:18

  本文關鍵詞:MIR137對細胞自噬的調控作用及機制研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。


【摘要】:目的探討MIR137對細胞自噬的調控作用及調控機制。方法(1)慢病毒、拮抗劑轉染調控U87細胞中MIR137的表達水平,RT-PCR檢測轉染效果。(2)D-hank's液處理細胞以誘發(fā)自噬,熒光顯微鏡下統(tǒng)計各組細胞GFP-LC3 Ⅱ陽性率,western blot定量分析各組細胞自噬標記蛋白LC3 Ⅱ和SQSTM1的表達量,評估MIR137對自噬水平的影響。(3)RT-PCR、western blot定量分析ATG7基因的mRNA和蛋白表達量,評估MIR137對ATG7表達量的影響。(4)重組ATG7質粒分別與MIR137高表達慢病毒和拮抗劑共轉染,增加各組細胞中ATG7的表達水平,RT-PCR檢測轉染效果。(5)Dhank's液作為饑餓誘導劑誘發(fā)細胞自噬,western blot定量分析各組細胞自噬標記蛋白LC3 Ⅱ和SQSTM1的表達量,評估ATG7對自噬水平的影響。(6)MTT分析MIR137高表達對阿霉素化療效果的影響。結果(1)慢病毒和拮抗劑轉染組MIR137表達量分別為2.53±0.14和0.39±0.06,較對照組分別存在上調和下調;(2)饑餓誘導可增加U87細胞的自噬活動,但對MIR137的表達無明顯影響。(3)與對照組相比,慢病毒組和拮抗劑組LC3 Ⅱ蛋白的表達量分別為0.75±0.12和4.65±0.13,分別存在下調和上調,SQSTM1蛋白的表達量分別為0.94±0.15和0.24±0.03,分別存在上調和下調。(4)慢病毒組和拮抗劑組ATG7基因表達量分比為0.26±0.07、1.53⒈0.06,較對照組(0.99±0.01)分別存在下調和上調。(5)慢病毒組、ATG7質粒+慢病毒組、ATG7質粒+對照組中ATG7基因的表達量分別為1.01±0.01、1.72±0.12、3.56q±0.71;慢病毒組、ATG7質粒+慢病毒組中LC3Ⅱ蛋白的表達分別為0.76±0.10、1.64±0.44。(6)兩組細胞的存活率均隨藥物濃度的增加而降低;相同條件下,慢病毒組的細胞存活率較對照組降低。結論MIR137可通過調控ATG7的表達,進而抑制饑餓誘導的自噬活動;MIR137可增加U87細胞對阿霉素的化療敏感性。
【關鍵詞】:膠質瘤 microR-137 自噬 阿霉素
【學位授予單位】:重慶醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2015
【分類號】:R739.41
【目錄】:
  • 英漢縮略詞對照5-7
  • 中文摘要7-9
  • 英文摘要9-11
  • 前言11-12
  • 1 材料與方法12-18
  • 2 結果18-22
  • 3 討論22-25
  • 全文結論25-26
  • 參考文獻26-31
  • 文獻綜述:miRNA對自噬的調控作用31-40
  • 參考文獻35-40
  • 致謝40-41
  • 攻讀研究生學位期間發(fā)表的論文41

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本文編號:289933


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