發(fā)布時間：2017-04-06 20:23

  本文關鍵詞：膠質瘤TJ905干細胞Livin-ShRNA裸鼠皮下種植瘤模型的建立及其對Caspase-3,7的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討膠質瘤TJ905細胞及其干細胞穩(wěn)轉基因Livin短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA,sh RNA)皮下種植瘤模型的建立及其對Caspase3,7 m RNA表達的影響。內容:從膠質瘤TJ905細胞中分離膠質瘤干細胞并進行鑒定,分別用Livin-sh RNA和Negative-sh RNA(陰性sh RNA)慢病毒重組質粒轉染膠質瘤TJ905細胞及其干細胞,建立相應的裸鼠皮下種植瘤模型,通過Cell Counting Kit-8(CCK-8)、流式細胞術(Flow Cytometry,FCM)、RT-PCR等技術檢測Livin-sh RNA對膠質瘤TJ905細胞及其干細胞皮下種植瘤模型建立及Caspase3,7 m RNA表達的影響。方法:使用無血清培養(yǎng)法聯(lián)合免疫磁珠法分選膠質瘤TJ905干細胞,并將分選后的細胞通過血清誘導分化、免疫熒光染色(Nestin、GFAP、β-tubulin)進行鑒定,分別將Livin-sh RNA和Negative-sh RNA慢病毒重組質粒轉入膠質瘤TJ905細胞及其干細胞內,RT-PCR檢測轉染效率,建立穩(wěn)轉細胞株;根據(jù)細胞是否轉染及其所轉染質粒類型,將實驗分為A組(轉染Livin-sh RNA的膠質瘤TJ905細胞組)、B組(轉染Negative-sh RNA的膠質瘤TJ905細胞組)、C組(未轉染的膠質瘤TJ905細胞組)、D組(轉染Livin-sh RNA的膠質瘤TJ905干細胞組)、E組(轉染Negative-sh RNA的膠質瘤TJ905干細胞組)、F組(未轉染的膠質瘤TJ905干細胞組);CCK-8檢測各組細胞增殖變化規(guī)律;FCM檢測各組細胞周期變化情況;RT-PCR技術檢測各組Caspase-3、Caspase-7 m RNA表達情況;建立相應的裸鼠皮下種植瘤模型,觀察其成瘤特性,并檢測相應腫瘤模型內Caspase-3、Caspase-7 m RNA表達情況。結果:1、膠質瘤TJ905細胞中含有少量的膠質瘤干細胞,其比例約為0.64%-0.91%;2、A組、B組、D組、E組Livin m RNA的相對表達量(相對于C組及F組)分別為0.117±0.017、0.996±0.025、0.193±0.014、1.003±0.033,A組、B組及D組、E組之間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);說明Livin-sh RNA可以明顯抑制膠質瘤TJ905細胞及其干細胞Livin m RNA的表達;3、CCK-8結果顯示,轉染48h后A組、B組、C組的吸光度分別為0.828±0.031、1.377±0.026、1.437±0.027,轉染72h后A組、B組、C組的吸光度分別為0.896±0.029、1.533±0.035、1.602±0.031,A組與B、C兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明Livin-sh RNA可抑制膠質瘤TJ905細胞的增殖;4、FCM結果顯示,A組、B組、C組G0/G1期細胞百分比分別為68.68±2.01、63.14±1.39、62.97±1.79,A組與B、C兩組之間的差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);D組、E組、F組S期細胞百分比分別為35.42±2.18、30.33±1.75、30.57±1.49,D組與E、F兩組之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);說明Livin-sh RNA可阻滯膠質瘤TJ905細胞于G0/G1期,阻滯膠質瘤TJ905干細胞于S期;5、F組的成瘤率為100%,C組的成瘤率為37.5%,兩組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明膠質瘤TJ905干細胞比膠質瘤TJ905細胞有更強的致瘤性;A組與B組的成瘤率無明顯差異,但其腫瘤體積明顯降低,D組與E組的成瘤率及腫瘤體積均無明顯差異,說明Livin-sh RNA對膠質瘤TJ905細胞及其干細胞的致瘤性無明顯影響,但可使膠質瘤TJ905細胞的增殖速度減慢;6、A組、B組、D組、E組Caspase-3 m RNA的相對表達量(相對于C組及F組)分別為5.163±0.364、1.009±0.038、4.076±0.043、1.116±0.031,A組、B組及D組、E組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);A組、B組、D組、E組Caspase-7m RNA的相對表達量(相對于C組及F組)分別為3.067±0.157、1.039±0.022、2.993±0.109、1.045±0.046,A組、B組及D組、E組之間差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);說明Livin-sh RNA可誘導膠質瘤TJ905細胞及其干細胞內Caspase-3、Caspase-7 m RNA的表達。結論:膠質瘤TJ905細胞中含有少量膠質瘤干細胞;Livin-sh RNA能有效抑制膠質瘤TJ905細胞的增殖,促進凋亡相關基因的表達,但對其致瘤性無明顯影響;膠質瘤TJ905干細胞有更強的致瘤性和更強的惡性變;膠質瘤TJ905干細胞可能具有與膠質瘤TJ905細胞不同的凋亡途徑,因此積極尋找Livin基因相關協(xié)同基因作為膠質瘤治療的靶點才可能治愈膠質瘤。
【關鍵詞】：膠質瘤 膠質瘤干細胞 Livin 短發(fā)夾RNA 基因治療
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-11
• 前言11-17
• 研究現(xiàn)狀、成果11-16
• 研究目的、方法16-17
• 一、膠質瘤TJ905干細胞的分選與鑒定17-30
• 1.1 對象和方法17-20
• 1.1.1 實驗試劑17
• 1.1.2 實驗儀器17-18
• 1.1.3 細胞培養(yǎng)18
• 1.1.4 膠質瘤TJ905干細胞分選18-19
• 1.1.5 膠質瘤TJ905干細胞的免疫熒光染色19-20
• 1.2 結果20-24
• 1.2.1 CD133陽性細胞的分選20
• 1.2.2 膠質瘤TJ905干細胞的鑒定20-24
• 1.3 討論24-29
• 1.3.1 膠質瘤細胞與膠質瘤干細胞24-27
• 1.3.2 膠質瘤干細胞的鑒定27-29
• 1.4 小結29-30
• 二、Livin-shRNA轉染與細胞增殖活性檢測30-49
• 2.1 對象和方法30-35
• 2.1.1 實驗試劑30
• 2.1.2 實驗儀器30-31
• 2.1.3 實驗分組31
• 2.1.4 轉染方法31-32
• 2.1.5 RT-PCR檢測轉染效率32-33
• 2.1.6 CCK-8 檢測細胞增殖活性33-34
• 2.1.7 流式細胞術檢測細胞周期改變34
• 2.1.8 RT-PCR檢測細胞內Caspase3、Caspase7 mRNA的變化34-35
• 2.1.9 統(tǒng)計學處理35
• 2.2 結果35-41
• 2.2.1 Livin-shRNA對Livin mRNA表達的影響35
• 2.2.2 Livin-shRNA對細胞增殖的影響35-36
• 2.2.3 Livin-shRNA對細胞周期的影響36-37
• 2.2.4 Livin-shRNA對Caspase3、Caspase7 m RNA表達的影響37-41
• 2.3 討論41-48
• 2.3.1 RNA干擾技術與病毒載體41-43
• 2.3.2 Livin基因與細胞凋亡43-46
• 2.3.3 Livin基因與細胞周期46-48
• 2.4 小結48-49
• 三、裸鼠皮下種植瘤的建立與體內增殖活性檢測49-63
• 3.1 對象和方法49-52
• 3.1.1 實驗試劑和材料49
• 3.1.2 皮下種植瘤的建立49-50
• 3.1.3 種植瘤的病理學檢測50-51
• 3.1.4 RT-PCR檢測Livin、Caspase3和Caspase7 mRNA的表達51-52
• 3.2 結果52-59
• 3.2.1 膠質瘤TJ905細胞種植瘤模型的建立及病理學特點52-54
• 3.2.2 Livin-shRNA對膠質瘤TJ905細胞種植瘤模型的影響54
• 3.2.3 Livin-shRNA對Livin、Caspase3和Caspase7 mRNA的影響54-59
• 3.3 討論59-62
• 3.4 小結62-63
• 結論63-64
• 參考文獻64-71
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明71-72
• 綜述 膠質瘤干細胞的研究現(xiàn)狀72-83
• 綜述參考文獻79-83
• 致謝83

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馮嵩;膠質瘤TJ905干細胞Livin-ShRNA裸鼠皮下種植瘤模型的建立及其對Caspase-3,7的影響[D];天津醫(yī)科大學;2015年

  本文關鍵詞：膠質瘤TJ905干細胞Livin-ShRNA裸鼠皮下種植瘤模型的建立及其對Caspase-3,7的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：289627