目的觀察電針、電針結(jié)合腦內(nèi)注射血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)法對腦缺血后再灌注損傷(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(endoplasmic reticulum stress,ERS)相關(guān)蛋白——激活轉(zhuǎn)錄因子6(Activating Transcription Factor 6,ATF6)、肌醇依賴酶1(inositol-requiring enzyme,IRE1)、X盒結(jié)合蛋白1(X-box-binding protein 1,XBP1)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose regulated p rotein 78,GRP78)的影響,探討電針結(jié)合腦內(nèi)注射VEGF法對CIRI的修復(fù)作用。方法將雄性SD大鼠68只,隨機(jī)分為假手術(shù)組(J)、模型組(M)、電針組(EA)、腦內(nèi)注射VEGF組(VEGF)、電針結(jié)合腦內(nèi)注射VEGF組(EA+VEGF),其中假手術(shù)組8只,其余各組每組15只,用線栓法對模型組、電針組、腦內(nèi)注射VEGF組、電針結(jié)合腦內(nèi)注射VEGF組實(shí)施MCAO造模。假手術(shù)組只做手術(shù),不插線栓。電針組及電針+VEGF組大鼠于造模完成24 h后,針刺“百會(huì)”、左側(cè)“曲池”及“足三里”,行電針干預(yù)治療,一日一次,30分鐘每次,共治療14天。治療同時(shí)將模型組、假手術(shù)組、VEGF組進(jìn)行相同時(shí)間固定,但不針刺。VEGF組及電針+VEGF組大鼠于造模完成24小時(shí)后,向側(cè)腦室內(nèi)一次性注入10μl VEGF(0.025μg/μl)。干預(yù)14天后,檢測各組大鼠神經(jīng)功能評分(mNSS);使用尼氏染色法對大鼠CIRI區(qū)域的腦組織進(jìn)行觀察;用Western blot法測定大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78蛋白含量;用RT-PCR法測定大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 mRNA的含量。結(jié)果模型組大鼠mNSS評分相比假手術(shù)組有顯著升高(P0.05);電針組、VEGF組、電針+VEGF組mNSS評分相比模型組均有顯著降低(P0.05);電針+VEGF組mNSS評分,相比于電針組、VEGF組有著顯著降低(P0.05)。與假手術(shù)組比較,模型組尼氏小體數(shù)低于假手術(shù)組(p0.05);與模型組比較,電針組、VEGF組、電針+VEGF組尼氏小體數(shù)均高于模型組(P0.05);電針+VEGF組尼氏小體數(shù)相比于電針組、VEGF組,明顯升高(P0.05)。模型組大鼠的ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78含量相比假手術(shù)組均有所升高(P0.05);電針組、VEGF組、電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量均明顯低于模型組(P0.05),GRP78蛋白的含量則明顯高于模型組(P0.05);電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量相比于電針組、VEGF組,其含量明顯有所降低(P0.05),GRP78蛋白含量則有明顯升高(P0.05)。模型組大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 mRNA含量相比于假手術(shù)組,均有所升高(P0.05);電針組、VEGF組、電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP mRNA含量相比于與模型組,均有所降低(P0.05),GRP78 mRNA含量則有所升高(P0.05);電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP mRNA含量相比于電針組、VEGF組,均有所降低(P0.05),GRP78 mRNA含量則有所升高(P0.05)。結(jié)論電針結(jié)合腦內(nèi)注射VEGF可促進(jìn)CIRI組織修復(fù),這種機(jī)制可能是通過下調(diào)ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量,上調(diào)GRP78蛋白含量所實(shí)現(xiàn)的,且其效果比單純使用電針法、腦內(nèi)注射VEGF法更具優(yōu)勢。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

圖 2 各組尼氏染色單位面積內(nèi)尼氏小體數(shù)目Fig 2 Nissl staining of Nissl's body number per unit area of SD rat of thM , EA ,VEGF and EA+VEGF groups P <0.05，與假手術(shù)組比較；▲P <0.05，與模型組比較；★P <0.05，比較；☆P <0.05，與腦內(nèi)注射 VEGF 組比較。ment: P <0.05, vs the J group; ▲P <0.05, vs the model group; ★P the EA group; ☆P <0.05, vs the VEGF group.3 Western blot 法測定蛋白 ATF6、IRE1、XBP1、CHGRP78 的含量結(jié)果如圖 3 及表 5 所示，模型組 ERS 相關(guān)蛋白 ATF6、IRE1、CHOP、XBP1、G均高于假手術(shù)組（P<0.05）；電針組、腦內(nèi)注射 VEGF 組、電針+腦內(nèi)

3 各組 SD 大鼠 ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 蛋白含量的比較（ x ± s,N=8）Fig 3 Comparison of expression levels of collagen type II、DDR2 and MMProteins in among SD rat of the J, M , EA ,VEGF and EA+VEGF groups( x ± s, N=8) 5 各組 SD 大鼠 ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 蛋白含量的比較( x ± s, N=8) 5 Comparison of expression levels of ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRProteins in among SD rat of the J, M , EA ,VEGF and EA+VEGF groups( x ± s, N=8)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)是細(xì)胞本身的一種自我保護(hù)機(jī)制，受多種信號反應(yīng)通路系統(tǒng)及基因的表達(dá)調(diào)控[39]。GRP78 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白，其在對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)調(diào)控中有較為重要的作用。生理情況下，GRP78 以共價(jià)鍵與新生多肽短暫結(jié)合，發(fā)生解離后，能夠促使蛋白質(zhì)進(jìn)行正常折疊。如圖 4 所示，當(dāng)無 ERS 時(shí)， GRP78 與 ATF6、IRE1 相結(jié)合。發(fā)生 ERS 時(shí)，未折疊蛋白的堆積促使 GRP78 從 ATF6、IRE1 蛋白上解離，從而可以去結(jié)合未折疊蛋白，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)恢復(fù)其正常功能。GRP78 發(fā)生解離后，ATF6 通路及 IRE1 通路均被活化，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。正常生理狀態(tài)下 ATF6 酶原 ATF6p90 存儲(chǔ)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，當(dāng)發(fā)生 ERS 后，ATF6p90 轉(zhuǎn)入高爾基體內(nèi)發(fā)生水解，指導(dǎo) XBP1 以及相關(guān)促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊所需蛋白、酶的合成表達(dá)，從而啟動(dòng)細(xì)胞凋亡途徑[40-41]。當(dāng) IRE1被活化后，能夠使 XBP1mRNA 發(fā)生裂解，生成 XBP1。同時(shí)，XBP1 也是 IRE1信號途徑的標(biāo)志物。IRE1 通路及 ATF6 通路活化都均能誘導(dǎo) CHOP 生成，啟動(dòng)細(xì)胞凋亡[42-43]。
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本文編號：2880931