發(fā)布時間：2020-11-12 15:52

　　 目的觀察電針、電針結合腦內注射血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)法對腦缺血后再灌注損傷(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠內質網(wǎng)應激反應(endoplasmic reticulum stress,ERS)相關蛋白——激活轉錄因子6(Activating Transcription Factor 6,ATF6)、肌醇依賴酶1(inositol-requiring enzyme,IRE1)、X盒結合蛋白1(X-box-binding protein 1,XBP1)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、葡萄糖調節(jié)蛋白78(glucose regulated p rotein 78,GRP78)的影響,探討電針結合腦內注射VEGF法對CIRI的修復作用。方法將雄性SD大鼠68只,隨機分為假手術組(J)、模型組(M)、電針組(EA)、腦內注射VEGF組(VEGF)、電針結合腦內注射VEGF組(EA+VEGF),其中假手術組8只,其余各組每組15只,用線栓法對模型組、電針組、腦內注射VEGF組、電針結合腦內注射VEGF組實施MCAO造模。假手術組只做手術,不插線栓。電針組及電針+VEGF組大鼠于造模完成24 h后,針刺“百會”、左側“曲池”及“足三里”,行電針干預治療,一日一次,30分鐘每次,共治療14天。治療同時將模型組、假手術組、VEGF組進行相同時間固定,但不針刺。VEGF組及電針+VEGF組大鼠于造模完成24小時后,向側腦室內一次性注入10μl VEGF(0.025μg/μl)。干預14天后,檢測各組大鼠神經(jīng)功能評分(mNSS);使用尼氏染色法對大鼠CIRI區(qū)域的腦組織進行觀察;用Western blot法測定大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78蛋白含量;用RT-PCR法測定大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 mRNA的含量。結果模型組大鼠mNSS評分相比假手術組有顯著升高(P0.05);電針組、VEGF組、電針+VEGF組mNSS評分相比模型組均有顯著降低(P0.05);電針+VEGF組mNSS評分,相比于電針組、VEGF組有著顯著降低(P0.05)。與假手術組比較,模型組尼氏小體數(shù)低于假手術組(p0.05);與模型組比較,電針組、VEGF組、電針+VEGF組尼氏小體數(shù)均高于模型組(P0.05);電針+VEGF組尼氏小體數(shù)相比于電針組、VEGF組,明顯升高(P0.05)。模型組大鼠的ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78含量相比假手術組均有所升高(P0.05);電針組、VEGF組、電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量均明顯低于模型組(P0.05),GRP78蛋白的含量則明顯高于模型組(P0.05);電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量相比于電針組、VEGF組,其含量明顯有所降低(P0.05),GRP78蛋白含量則有明顯升高(P0.05)。模型組大鼠ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 mRNA含量相比于假手術組,均有所升高(P0.05);電針組、VEGF組、電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP mRNA含量相比于與模型組,均有所降低(P0.05),GRP78 mRNA含量則有所升高(P0.05);電針+VEGF組ATF6、IRE1、XBP1、CHOP mRNA含量相比于電針組、VEGF組,均有所降低(P0.05),GRP78 mRNA含量則有所升高(P0.05)。結論電針結合腦內注射VEGF可促進CIRI組織修復,這種機制可能是通過下調ATF6、IRE1、XBP1、CHOP蛋白含量,上調GRP78蛋白含量所實現(xiàn)的,且其效果比單純使用電針法、腦內注射VEGF法更具優(yōu)勢。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R743.3
【部分圖文】：

圖 2 各組尼氏染色單位面積內尼氏小體數(shù)目Fig 2 Nissl staining of Nissl's body number per unit area of SD rat of thM , EA ,VEGF and EA+VEGF groups P <0.05，與假手術組比較；▲P <0.05，與模型組比較；★P <0.05，比較；☆P <0.05，與腦內注射 VEGF 組比較。ment: P <0.05, vs the J group; ▲P <0.05, vs the model group; ★P the EA group; ☆P <0.05, vs the VEGF group.3 Western blot 法測定蛋白 ATF6、IRE1、XBP1、CHGRP78 的含量結果如圖 3 及表 5 所示，模型組 ERS 相關蛋白 ATF6、IRE1、CHOP、XBP1、G均高于假手術組（P<0.05）；電針組、腦內注射 VEGF 組、電針+腦內

3 各組 SD 大鼠 ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 蛋白含量的比較（ x ± s,N=8）Fig 3 Comparison of expression levels of collagen type II、DDR2 and MMProteins in among SD rat of the J, M , EA ,VEGF and EA+VEGF groups( x ± s, N=8) 5 各組 SD 大鼠 ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRP78 蛋白含量的比較( x ± s, N=8) 5 Comparison of expression levels of ATF6、IRE1、XBP1、CHOP、GRProteins in among SD rat of the J, M , EA ,VEGF and EA+VEGF groups( x ± s, N=8)

內質網(wǎng)應激反應是細胞本身的一種自我保護機制，受多種信號反應通路系統(tǒng)及基因的表達調控[39]。GRP78 內質網(wǎng)應激相關蛋白，其在對內質網(wǎng)應激反應調控中有較為重要的作用。生理情況下，GRP78 以共價鍵與新生多肽短暫結合，發(fā)生解離后，能夠促使蛋白質進行正常折疊。如圖 4 所示，當無 ERS 時， GRP78 與 ATF6、IRE1 相結合。發(fā)生 ERS 時，未折疊蛋白的堆積促使 GRP78 從 ATF6、IRE1 蛋白上解離，從而可以去結合未折疊蛋白，使內質網(wǎng)恢復其正常功能。GRP78 發(fā)生解離后，ATF6 通路及 IRE1 通路均被活化，并誘導細胞凋亡。正常生理狀態(tài)下 ATF6 酶原 ATF6p90 存儲于內質網(wǎng)中，當發(fā)生 ERS 后，ATF6p90 轉入高爾基體內發(fā)生水解，指導 XBP1 以及相關促進蛋白質折疊所需蛋白、酶的合成表達，從而啟動細胞凋亡途徑[40-41]。當 IRE1被活化后，能夠使 XBP1mRNA 發(fā)生裂解，生成 XBP1。同時，XBP1 也是 IRE1信號途徑的標志物。IRE1 通路及 ATF6 通路活化都均能誘導 CHOP 生成，啟動細胞凋亡[42-43]。
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本文編號：2880931