蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH),是常見的出血性腦卒中,具有較高的致死率和致殘率,極大地威脅著人類的健康。雖隨著外科干預(yù)治療手段的不斷進(jìn)步,SAH的預(yù)后有所改善,但目前仍缺乏有效的治療干預(yù)措施。SAH可引起原發(fā)性損傷和炎癥、水腫等繼發(fā)性損傷。近年有學(xué)者提出,SAH后72 h內(nèi)所引發(fā)的早期腦損傷(early brain injury,EBI)影響著SAH的預(yù)后與轉(zhuǎn)歸,而該觀點(diǎn)已在臨床及基礎(chǔ)研究中被證實(shí),其中炎癥反應(yīng)可能是造成神經(jīng)元受損的重要因素。SAH后可迅速發(fā)生炎癥反應(yīng),主要涉及小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞激活、外周炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并伴隨大量炎癥因子產(chǎn)生。由于涉及的神經(jīng)細(xì)胞及細(xì)胞因子彼此相互調(diào)節(jié),又有各自發(fā)揮著的作用,因此研究SAH后神經(jīng)炎癥有助于了解SAH后疾病的發(fā)展和指導(dǎo)治療方案的制定。在既往的研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(translocator protein,TSPO)可以調(diào)控炎癥細(xì)胞的激活,進(jìn)而影響炎癥反應(yīng)進(jìn)程。TSPO為既往外周苯二氮卓受體中的一個(gè)亞單位結(jié)構(gòu),廣泛分布于機(jī)體組織中。TSPO的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)主要位于線粒體外膜上,少部分位于核周和細(xì)胞表面,在細(xì)胞的多種生理過程中發(fā)揮著重要作用。既往發(fā)現(xiàn),當(dāng)腦組織暴露于一系列病理環(huán)境時(shí),TSPO表達(dá)量將會(huì)明顯上調(diào),而這種現(xiàn)象已在多種疾病模型中證實(shí)。因此,大量學(xué)者將TSPO作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中炎癥反應(yīng)的標(biāo)志物,并通過分子影像學(xué)技術(shù)對(duì)其進(jìn)行研究。同時(shí)TSPO及其配體在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療中顯示出了極大的潛能,然而目前SAH后TSPO表達(dá)及配體的相關(guān)研究卻非常缺乏。此外,TSPO參與了多種生理過程,其中最為重要的是膽固醇物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn),作為該過程的限速步驟,可顯著調(diào)節(jié)神經(jīng)類固醇的合成。既往研究證實(shí),TSPO與特異性配體結(jié)合后,能夠促進(jìn)神經(jīng)類固醇生成、緩解神經(jīng)性疼痛和減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng),因此被認(rèn)為是一種潛在的治療靶點(diǎn)。Ro5-4864(7-chloro-5-4-Chlorophenyl-1,3-dihydro-1-methyl-2-H-1,4-benzod-iazepin-2)是苯二氮卓類藥物的衍生物,已在多種神經(jīng)毒性病理實(shí)驗(yàn)中證實(shí)可通過調(diào)節(jié)神經(jīng)類固醇激素的合成,進(jìn)而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,但目前對(duì)于SAH后Ro5-4864是否能影響炎癥反應(yīng)及可能的機(jī)制尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究通過建立了小鼠實(shí)驗(yàn)性SAH動(dòng)物模型,第一部分將探索TSPO在SAH后的表達(dá)情況,第二部分將初步研究TSPO的配體Ro5-4864對(duì)SAH后炎癥反應(yīng)的影響,為臨床治療SAH提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。一、TSPO在SAH后早期表達(dá)情況的初步研究目的:評(píng)估SAH后早期腦組織中TSPO的表達(dá)情況及其與EBI的關(guān)系。方法:將44只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分成Sham組和SAH組,通過血管內(nèi)穿刺法構(gòu)建SAH模型,采用改良加西亞評(píng)分對(duì)小鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)定,以western blot技術(shù)檢測(cè)SAH后腦組織TSPO表達(dá)情況,結(jié)合正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層顯像(positron emission tomography-computed tomography,PET-CT)和免疫熒光評(píng)價(jià)TSPO空間表達(dá)情況。結(jié)果:SAH組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯低于Sham組;western blot提示腦組織中TSPO從6 h開始逐漸升高,并在48 h達(dá)到峰值,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),72 h仍高于Sham組。PET-CT提示SAH后小鼠腦組織示蹤劑攝取量較Sham組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫熒光提示出血側(cè)頂葉皮層、海馬區(qū)和基底皮層均有TSPO表達(dá)增加。相關(guān)性分析提示神經(jīng)功能評(píng)分與TSPO表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.6156,P0.01)。結(jié)論:TSPO在SAH后表達(dá)廣泛增加,并呈現(xiàn)時(shí)間依賴性,可能與早期腦損傷的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。二、Ro5-4864對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中炎癥反應(yīng)的影響目的:通過構(gòu)建小鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,觀察小鼠神經(jīng)功能缺損情況,初步探討Ro5-4864對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中炎癥反應(yīng)的影響。方法:將27只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(Sham組)、蛛網(wǎng)膜下腔出血組(SAH+DMSO組)和蛛網(wǎng)膜下腔出血藥物治療組(SAH+Ro5-4864組)。SAH+Ro5-4864組在建立模型后30min完成首次給藥,通過腹腔注射Ro5-4864(5 mg/kg,1%DMSO生理鹽水),建模后24 h再次給藥,Sham組和SAH+DMSO組給予等體積1%DMSO生理鹽水作為對(duì)照。記錄建立模型前后各組小鼠體重及神經(jīng)功能評(píng)分;干濕重法測(cè)量腦組織含水量情況;實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA測(cè)定TNF-α、IL-1β的表達(dá)情況。結(jié)果:SAH可導(dǎo)致小鼠體重減輕,引起神經(jīng)炎癥反應(yīng)及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能障礙。Ro5-4864緩解了SAH后小鼠體重的丟失,減少了腦組織含水量和降低了TNF-α的表達(dá),一定程度地促進(jìn)了神經(jīng)功能恢復(fù),但不能減少IL-1β的表達(dá)。結(jié)論:TSPO配體Ro5-4864具有一定的神經(jīng)保護(hù)功能,可緩解小鼠SAH后體重下降和腦組織炎癥因子升高水平,并改善小鼠神經(jīng)功能缺損,為臨床對(duì)SAH后的綜合治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R743.35
【部分圖文】：

圖 1 SAH 模型建立示意圖[20]Fig 1 Schematic diagram of SAH model. 神經(jīng)功能評(píng)分Sham 組和 SAH 組小鼠均依照預(yù)定時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，評(píng)分統(tǒng)

圖 2 小鼠神經(jīng)功能評(píng)分表[21]Fig 2 The neurological evaluation score..3 蛋白質(zhì)電泳.3.1 獲取小鼠腦組織

小鼠腦組織情況
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本文編號(hào)：2878526