目的糖尿病足作為糖尿病患者最常見并發(fā)癥之一,嚴(yán)重影響患者生存和生活質(zhì)量。糖尿病足是全世界范圍內(nèi)導(dǎo)致非創(chuàng)傷性截肢的首要原因,但由于其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,迄今仍缺乏有效的治療方法。因此,探討糖尿病足的危險因素、尋求新的防治策略具有重要的理論及臨床意義。糖尿病足潰瘍發(fā)病的病因?qū)W基礎(chǔ)主要是下肢血管病變和周圍神經(jīng)病變,而DPN目前尚缺乏有效的預(yù)警指標(biāo)。本課題擬探討血清維生素D水平與DPN的關(guān)系及其作為DPN早期預(yù)警指標(biāo)的價值。除了糖尿病足危險因素的預(yù)警,還需要尋求糖尿病足潰瘍愈合的新途徑。低溫大氣壓等離子體(CAP)是一種特殊的氣體物質(zhì),包含多種活性物質(zhì),其在生物治療領(lǐng)域的應(yīng)用成為新興研究領(lǐng)域。除了血清標(biāo)志物,我們進(jìn)一步研究了CAP對雄性db/db糖尿病小鼠皮膚傷口愈合影響及其中可能涉及的關(guān)鍵通路與靶點蛋白。本課題旨在通過預(yù)警與治療兩方面探索改善糖尿病足風(fēng)險早期識別與足潰瘍治療的新方法。方法入選2型糖尿病患者861例,根據(jù)糖尿病控制與并發(fā)癥研究(DCCT)標(biāo)準(zhǔn),評估患者臨床癥狀、體征、測定震動感覺閾值及肌電圖,根據(jù)結(jié)果將患者分為3組:無神經(jīng)病變對照組組,疑似DPN組(具有DPN臨床表現(xiàn)或神經(jīng)電生理檢查異�；颊�)和確診DPN組(具有DPN臨床表現(xiàn)和神經(jīng)電生理檢查異常患者)。維生素D缺乏定義為血清25-羥基維生素D水平低于20 ng/m L。收集患者各項臨床信息、生化指標(biāo)結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。糖尿病足傷口研究選用8周齡db/db小鼠,建立2型糖尿病背部皮膚傷口模型,分別予以CAP照射180s/d/只,90s/d/只及對照氣吹治療(每組n=10),連續(xù)15天。觀察三組小鼠傷口愈合情況,留血樣測定小鼠肝腎功能水平,取皮膚組織觀察傷口結(jié)構(gòu)病理變化,分離提取蛋白和m RNA,利用Western Blot和Real-time PCR方法測定傷口愈合慢性炎癥、氧化應(yīng)激和血管新生信號通路相關(guān)蛋白和m RNA表達(dá)情況。結(jié)果DPN組患者血清25-羥基維生素D水平(15.59±7.68 ng/m L)顯著低于對照組(18.35±6.60 ng/m L)和癥狀組(17.66±7.50 ng/m L)(p0.01)。較無病變組與疑似組,確診組具有顯著升高的維生素D缺乏率(80%vs.61.7%,64.5%)(P0.01)。在排除性別、年齡、病程、血糖指標(biāo)、腎功能指標(biāo)等所有因素的影響后,維生素D缺乏增加患糖尿病周圍神經(jīng)病變的相對危險度(95%可信區(qū)間)為2.59(1.48–4.53);多元Logistic回歸顯示維生素D缺乏是糖尿病周圍神經(jīng)病變(β=0.88,P0.01)的獨立危險因素。受試者工作特征曲線(ROC曲線)提示,當(dāng)血清25-羥基維生素D水平低于16.01ng/ml時,患糖尿病周圍神經(jīng)病變的可能性將升高近2倍。糖尿病傷口研究中,我們發(fā)現(xiàn)CAP180s、90s治療組小鼠傷口愈合速度(0.36±0.09cm2/d;0.32±0.12cm2/d)均顯著快于對照組小鼠(0.28±0.11cm2/d,P均0.01)。傷口皮膚HE染色病理觀察及免疫組化、免疫熒光結(jié)果顯示,CAP治療組傷口周圍皮膚炎癥細(xì)胞浸潤顯著減少,血管新生增強(qiáng)。Western blot結(jié)果顯示,CAP治療后傷口組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和轉(zhuǎn)化生長因子-?(TGF-β)表達(dá)增加,白介素-6(IL-6),腫瘤壞死因子(TNF-α),誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(i NOS)和超氧化物歧化酶(SOD)表達(dá)減少。Real-time PCR測定上述蛋白m RNA結(jié)果與此一致(P均0.01)。同時,CAP治療組小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT),谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST),尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平與對照組無顯著差異。結(jié)論維生素D缺乏是2型糖尿病周圍神經(jīng)病變的獨立危險因素,血清25-羥基維生素D水平低于16.01ng/ml提示患周圍神經(jīng)病變的風(fēng)險倍增。低溫大氣壓等離子體能夠通過抑制炎癥,增強(qiáng)血管、組織新生加快糖尿病小鼠皮膚傷口的愈合,同時對肝腎沒有副作用。
【學(xué)位單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R587.2;R747.9
【部分圖文】：

表 1-5 DPN 影響因素的多元逐步回歸分析Table 1-4 Multiple logistic regression: independent factors of DPNSE Wald pVDD 0.88 0.32 7.72 < 0.01Age 0.06 0.02 12.21 < 0.01Diabetes duration 0.04 0.02 4.03 0.04注：VDD：維生素 D 缺乏5. 不同血清維生素 D 水平 DPN 患病率的比較根據(jù)患者血清25(OH)D水平將患者分為3組：對照組(>30ng/ml, n=51)，VDI組(20~30ng/ml, n=250)和VDD組(<20ng/ml, n=560)。比較3組患者DPN癥狀及DPN發(fā)生比例，結(jié)果顯示VDD、VDI組患者DPN癥狀(20.7%; 17.6 %vs. 16.3%)及DPN發(fā)生率(12.8%; 9.8% vs. 2.1%)均顯著高于對照組(P均< 0.05)。同時VDD組患者DPN癥狀、DPN發(fā)生率也較VDI組患者顯著升高(P均< 0.05)。（圖 1-1）。由此我們可以看出，DPN患病率隨著維生素D水平的降低而升高。

Figure 1-1. Prevalence of signs of DPN and DPN among patients with different 25(OH)D levels.*p < 0.05, ** p < 0.01 vs. Patient with 25(OH)D >30ng/ml; #p < 0.05 vs. Patient with 25(OH)D20~30ng/ml. DPN：糖尿病周圍神經(jīng)病變6. 血清 25(OH)D 水平預(yù)警 DPN 的 ROC 分析前面的研究結(jié)果提示DPN患者血清25(OH)D水平顯著低于其他組患者，同時維生素D缺乏更是DPN發(fā)生的獨立危險因素。為了驗證血清25(OH)D能否作為提示DPN的臨床指標(biāo)，我們利用受試者工作特征（ROC）曲線，分別以DPN及DPN癥狀為因變量，以血清25(OH)D水平為自變量進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，提示出現(xiàn)DPN癥狀的血清25(OH)D的最佳切點值為17.22ng/ml (AUC：0.583; 95% CI,0.645–0.763; 約登指數(shù)：0.305; 敏感度，61.8%; 特異度，68.6%)。提示DPN患病的最佳血清25(OH)D切點為16.01ng/ml (AUC：0.614; 95% CI, 0.553-0.675; 約登指數(shù)：0.22; 敏感度，66.73%; 特異度，55.72%)（圖 1-2）。

圖 2-1. 國內(nèi)自制低溫大氣壓等離子發(fā)射設(shè)備Figure 2-1. CAP equipment材料與方法1. 實驗材料與主要儀器1.1. 實驗動物1.11 動物來源及飼養(yǎng)SPF 級別 db/db (+/+) C57/BL/KsJ 雄性小鼠 30 只購自南京大學(xué)模式動物有限責(zé)任公司。小鼠飼養(yǎng)于上海市第六人民醫(yī)院動物房，使用普通小鼠飼料喂養(yǎng)，飲用自來水。動物房溫度控制在 25℃左右，并使用 12 h 光照周期以模擬小鼠正常晝夜生理規(guī)律。1.12 小鼠背部皮膚傷口模型的建立使用小動物麻醉機(jī)，小鼠吸入異氟醚、空氣的混合氣體持續(xù)麻醉，俯臥位固定，背部剃毛后，使用脫毛膏脫去殘留毛發(fā)，清洗殘余脫毛膏以免損傷皮膚。使用皮膚打孔器(Integra Miltex , USA)在完全暴露的小鼠背部剪下皮膚，制作
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2872716