背景腦膠質(zhì)瘤是腦部具有高度侵襲性的惡性腫瘤,該原發(fā)性腦腫瘤會(huì)嚴(yán)重破壞神經(jīng)系統(tǒng),預(yù)后極差。目前,腦膠質(zhì)瘤以綜合治療為主,其中膠質(zhì)母細(xì)胞瘤單純手術(shù)治療并不能給患者帶來(lái)生存獲益,而多項(xiàng)臨床研究已證實(shí)放療有助于延長(zhǎng)該惡性腫瘤的生存期,如生存期會(huì)延長(zhǎng)6~8個(gè)月。盡管放療在包括腦膠質(zhì)瘤在內(nèi)的腦腫瘤治療中具有重要意義,但大多數(shù)接受放療者會(huì)于原發(fā)灶附近復(fù)發(fā),嚴(yán)重影響生存質(zhì)量。因此腦膠質(zhì)瘤的研究熱點(diǎn)多集中在探討提高腦膠質(zhì)瘤治療效果的細(xì)胞分子機(jī)制。癌癥的發(fā)生發(fā)展涉及多個(gè)基因多個(gè)環(huán)節(jié),其中抑癌基因表觀遺傳沉默導(dǎo)致的功能抑制在該過(guò)程發(fā)揮重要作用,如細(xì)胞增殖、凋亡、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及DNA修復(fù)凋亡過(guò)程。表觀遺傳沉默是腦膠質(zhì)瘤研究的有力切入點(diǎn)。DNA甲基化在表觀遺傳沉默中較為常見(jiàn),多種酶參與了甲基化的調(diào)節(jié)過(guò)程,其中DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)是負(fù)責(zé)建立和維護(hù)DNA甲基化的關(guān)鍵酶。UHRF1(ubiquitin-like wih PHD and ring finger domains1,泛素樣含PHD和環(huán)指域1)是目前DNA甲基化過(guò)程研究較多的蛋白,在多種惡性腫瘤中表達(dá)失調(diào),該因子可與半甲基化的DNA結(jié)合,被證實(shí)在甲基化維持中發(fā)揮重要作用,如UHRF1可誘導(dǎo)DNMT和蛋白脫乙�；刚心贾罝NA。新近研究表明UHFR1是一個(gè)重要的致癌基因,可在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中來(lái)調(diào)節(jié)基因表達(dá)和染色質(zhì)修飾。盡管UHRF1在DNA甲基化所必須的因子,但目前其在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)模式尚不清楚,具體的作用方式也罕見(jiàn)報(bào)道。故本研究首先采用實(shí)時(shí)定量PCR(QPCR)檢測(cè)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中的UHRF1 mRNA水平,進(jìn)一步分析該基因表達(dá)與腦膠質(zhì)瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系,同時(shí)在腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞中通過(guò)外源基因干擾手段來(lái)沉默UHRF1表達(dá),來(lái)評(píng)價(jià)該蛋白對(duì)U251細(xì)胞增殖凋亡的影響,為揭示腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制及靶向治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。目的1.確定腦膠質(zhì)瘤組織中UHRF1表達(dá)是否異常和具體表達(dá)模式。2.分析UHRF1水平與腦膠質(zhì)瘤臨床病理參數(shù)的關(guān)系,進(jìn)一步確定UHRF1是否參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。3.在體外沉默UHRF1表達(dá)對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和凋亡的影響。方法收集本院2014年1月至2016年12月經(jīng)手術(shù)切除的腦膠質(zhì)瘤組織44例及37例正常腦組織,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QPCR)檢測(cè)以上組織中的UHRF1 mRNA水平,分析腦膠質(zhì)瘤組織UHRF1 mRNA水平與腦膠質(zhì)瘤主要臨床病理學(xué)參數(shù)(年齡、性別、病理類型、分化程度、病理分級(jí)、瘤周水腫和浸潤(rùn)深度)的關(guān)系;采用受試者工作特征曲線(ROC)分析組織UHRF1 mRNA從正常腦組織區(qū)分腦膠質(zhì)瘤的效能及腦膠質(zhì)瘤不同臨床病理參數(shù)的效能。采用脂質(zhì)Attractene reagent法將靶向沉默UHRF1表達(dá)的短發(fā)夾RNA(shRNA)載體LV-UHRF1-shRNA及陰性對(duì)照載體LV-scramble-shRNA分別轉(zhuǎn)染至U251細(xì)胞(LV-UHRF1-shRNA組和LV-scramble-shRNA組),以僅轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體的細(xì)胞為對(duì)照組;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QPCR)檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染48 h后的UHRF1 mRNA水平,采用MTT法檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染24、48、72 h的增殖情況,BrdU染色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染12、24、48、72 h后的BrdU陽(yáng)性率,Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染48、72 h后的凋亡率,Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染72 h后的凋亡相關(guān)蛋白(Bax、Caspase-3和Bcl-2)水平。結(jié)果1.QPCR檢測(cè)37例正常腦組織和44例腦膠質(zhì)瘤組織中的UHRF1 mRNA水平發(fā)現(xiàn),腦膠質(zhì)瘤組織的UHRF1 mRNA水平為2.668± 1.856,高于正常腦組織的1.217±0.741,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。UHRF1mRNA水平從正常腦組織中區(qū)分腦膠質(zhì)瘤組織的曲線下面積(AUC)為0.735[95%CI:0.628~0.843,P0.001],以2.895為截?cái)嘀禃r(shí)約登指數(shù)最高為0.386,靈敏度為38.64%,特異度為100.00%。2.UHRF1 mRNA水平與年齡、性別、病理類型及瘤周水腫無(wú)關(guān)(P0.05),與分化程度、病理分級(jí)和浸潤(rùn)深度有關(guān)(P0.05),其中低分化的UHRF1 mRNA水平為3.526± 1.736,高于高、中分化的2.075±1.726,病理分期Ⅲ、Ⅳ期的UHRF1 mRNA 水平為 3.182± 1.759,高于 Ⅰ、Ⅱ 期的 1.993± 1.803,浸潤(rùn)深度1/2 的 UHRF1mRNA 水平 3.562±1.903,高于≤ 1/2 的 2.106±1.618,以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.以腦膠質(zhì)瘤組織UHRF1 mRNA水平的均值(2.668)為界值將44例患者分為低表達(dá)組25例和高表達(dá)組19例。本研究分析UHRF1 mRNA水平分布與年齡、性別、病理類型、分化程度、病理分級(jí)、瘤周水腫和浸潤(rùn)深度的關(guān)系,結(jié)果顯示UHRF1 mRNA水平分布與年齡、性別、病理類型及瘤周水腫無(wú)關(guān)(P0.05),與分化程度、病理分級(jí)和浸潤(rùn)深度有關(guān)(P0.05),其中低分化的UHRF1高表達(dá)率為66.67%(12/18),高于高、中分化的26.92%(7/26),病理分期Ⅲ、Ⅳ期的UHRF1高表達(dá)率為56.00%(14/25),高于Ⅰ、Ⅱ期的26.32%(5/19),浸潤(rùn)深度1/2 的 UHRF1 高表達(dá)率為 64.71%(11/17),高于≤ 1/2 的 29.63%(8/27),以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.QPCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染48 h后各組的UHRF1 mRNA水平發(fā)現(xiàn),LV-UHRF1-shRNA組的UHRF1 mRNA水平為0.309±0.073,對(duì)照組的UHRF1 mRNA水平為1.098±0.136,LV-scramble-shRNA 組的 UHRF1 mRNA 水平為 1.127 ± 0.193,LV-UHRF1-shRNA 組的 UHRF1 mRNA 水平均低于對(duì)照組和 LV-scramble-shRNA 組(P0.05),對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組UHRF1 mRNA水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.采用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染0、24、48、72 h后三組U251細(xì)胞的增殖水平,結(jié)果顯示與對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組相比,LV-UHRF1-shRNA組在以上時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞增殖率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組以上時(shí)間點(diǎn)增殖率的差異無(wú)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.采用BrdU染色法檢測(cè)轉(zhuǎn)染12、24、48、72 h后三組U251細(xì)胞的BrdU陽(yáng)性率,結(jié)果顯示與對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組相比,LV-UHRF1-shRNA組在以上時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞BrdU陽(yáng)性率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組以上時(shí)間點(diǎn)BrdU陽(yáng)性率的差異無(wú)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。7.采用Annexin V-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染72 h后三組U251細(xì)胞的凋亡率,結(jié)果顯示對(duì)照組、LV-scramble-shRNA組和LV-UHRF1-shRNA組的凋亡率分別為(7.73±0.66)%、(7.86±0.59)%和(25.71±1.87)%,LV-UHRF1-shRNA組的凋亡率高于對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組凋亡率的差異無(wú)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8.采用Western blotting檢測(cè)染72 h后三組U251細(xì)胞的凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示與對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組相比,LV-UHRF1-shRNA組的Bax、Caspase-3水平升高,而B(niǎo)cl-2水平降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);對(duì)照組和LV-scramble-shRNA組凋亡相關(guān)蛋白水平的差異無(wú)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論1.腦膠質(zhì)瘤組織中UHRF1水平異常升高,且對(duì)腦膠質(zhì)瘤的診斷有較好的效能。2.UHRF1表達(dá)升高參與了腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展。3.沉默UHRF1表達(dá)可抑制腦膠質(zhì)瘤的增殖并誘導(dǎo)凋亡。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.41
【部分圖文】：

病理分期ＩＩＩ、ＩＶ期的ＵＨＲＦｌｍＲＮＡ水平為３．１８２±１．７５９，高于Ｉ、ＩＩ期的??１．９９３±丨．８０３，浸潤(rùn)深度＞１／２?的?ＵＨＲＦ１?ｍＲＮＡ?水平?３．５６２±１．９０３，高于￡１／２?的??２．１０６土?１．６１８，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。見(jiàn)表２、圖２。??Ａ?８１?Ｂ?８－Ｊ?０?８－，??￥？．?．．．?％，－?■■■?％，．?■??１－?？?／?％－?？？?：?１－?＼?■??［?Ｈ?ＬＬ?？？?■：??Ｘ?２－?■■■■?Ｉ?Ｊ－?＊？？？？？?Ｉ?２＇?？？？＊?■■■■■??〇?”？?〇Ｊ?＊?〇?？秦???Ｓ５０歲?＞５０歲?女?男?Ｒ達(dá)Ｅ）編鼴琀?星形齩換編鼴癟??Ｄ?８＊｜?Ｅ?８－｜?Ｆ?８－??？?■■?％，．?．．．?．．．??＜?？參魯?■■■?＜?？？?？?＜?參參參?■■??ｉ?．?？?ｃ?．?？?■■■?ａ?４．?？？?■??Ｅ?４＇?＿?Ｅ?＊■?■?Ｅ?４．?？??〇Ｊ＿?，??〇Ｊ＿?；??〇Ｊ?＾＾—??￡．中?ｆｔ?ｉ、ｎ?ｍ、ｉｖ?ｆｔ度?中？鑫度??Ｇ?８－??５?６－?？

的ＵＨＲＦ１高表達(dá)率為５６．００％?（１４／２５），高于Ｉ、ＩＩ期的２６．３２％?（５／１９），浸潤(rùn)??深度＞１／２?的?ＵＨＲＦ１?高表達(dá)率為?６４．７１％?（１１／１７），高于￡１／２?的?２９．６３％?（８／２７），??以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇５）。見(jiàn)表３、圖３。??Ａ?８１?Ｂ?＊－｜?Ｃ?？－｜??Ｂ－???＜＊－??５?丁?￣１￣￣?ｉ?丁?￣１￣?ｉ?￣１￣?，丁??Ｃ??１??ｕ；?Ｃ??？２－?????｜?２－?????｜?２－?????Ｄ?■?—?Ｊ?Ｉ?Ｌ?Ｉ?］?Ｉ?■?Ｉ?■?Ｉ?Ｄ??????Ｊ?—Ｌ－?＼?Ｊ?—＿ｊ＿?Ｊ?＿Ｌ?—Ｌ－??〇?Ｓ５０歲?＞５０歲?女?宄?Ｒｆｉ母編ｆｔ＊?１形？達(dá)編跑＊??Ｄ?Ｅ?＊１?Ｆ?＊■??Ｍ－?Ｗ－??＊?６．?—Ｔ—?—ｒ－?＊?Ｓ－?—Ｔ—?＊?？■?—ｆ－??ｌ?丨丁?ｌ?Ｔ?￣１￣?＾?￣１￣｜?丁????１?心??塋?２－????Ｉ?空?２－?Ｌ?Ｊ?塋?２－??????＼?ｔ＝＾ｉ?ＪＴ?＼?Ｌｚｒ＾?ｔ＾ｄ??＾?寘．中?ｆｔ?°?ｉ?．?ｎ?ｍ、ｉｖ?°?ｆｉ度?中、鑫癀??Ｇ?？？??ｗ－??＊６．?——?￣｜￣??ｂ－??＜１ｆ２?＞１ｆ２??Ａ：年

０．５７７￣０．８９２，?Ｐ＝０．００８］和?０．７３６［９５％ＣＩ：?０．５８１?？０．８９２，?Ｐ＝０．００９］，約登指數(shù)為?０．４３６、??０．５２４?和?０．４３１，敏感度為?６６．６７％、８４．００％和?７６．４７％，特異度為?７６．９２％、６８．４２％??和６６．６７％。見(jiàn)表４、圖４。??ａ?，００１?－―＾?ｂ?，０〇ｉ?ｃ?，Ｍｉ?ｐｚｒ－??《ｙ?ｉ?ｔ?＊°?｜—??１?？．?１?？■?Ｊ／?１?？■?，＿Ｉ??５?—ｒ－１?／?５?ｒ－ｉ—＾?Ｓ?Ｊ??２０－?２０－??０－Ｕ—￣Ｉ?．?．?．?１?〇４＾???１?．?．?ｏ－ｌ￣?，?，?，???０?２０?４０?６０?８０?１００?０?２０?４０?６０?８０?１００?０?２０?４０?ＳＯ?８０?１００??１００％?－?Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ＾
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杜權(quán);俞文華;董曉巧;朱強(qiáng);車志豪;王昊;楊定博;沈永鋒;江力;;腦膠質(zhì)瘤組織時(shí)鐘基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)及意義[J];浙江醫(yī)學(xué);2017年18期

2 陳巖;倪朝輝;趙剛;;腦膠質(zhì)瘤組織中內(nèi)皮抑素的表達(dá)及其與血管形成的關(guān)系[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2012年01期

3 林樹(shù)楷;李鋼;周奮;劉仲海;隋建美;;腦膠質(zhì)瘤組織中l(wèi)ncRNA-LINC01116的表達(dá)變化及其意義[J];山東醫(yī)藥;2018年27期

4 陳龍;王文華;朱勝?gòu)?qiáng);金雪剛;譚衛(wèi)國(guó);張勇;;PTEN與VEGF在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2009年02期

5 逄小紅,湯吉帥,韓新華,葛兆茹;人腦膠質(zhì)瘤組織中微血管密度的臨床意義[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年04期

6 白慶嶺;胡長(zhǎng)偉;彭營(yíng)影;姚玉芳;王希瑞;趙志煌;韓永剛;;腦膠質(zhì)瘤組織中白細(xì)胞介素-24、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及其臨床意義[J];寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2018年06期

7 楊海峰;黃淑紅;;腦膠質(zhì)瘤組織中酪氨酸激酶受體B表達(dá)及其與病理分級(jí)的關(guān)系[J];山東醫(yī)藥;2017年02期

8 韓小輝;連亞軍;;B細(xì)胞易位基因1在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2017年08期

9 權(quán)俊杰;屈建強(qiáng);周樂(lè);;肝細(xì)胞再生磷酸因子-1在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響[J];河北醫(yī)學(xué);2017年05期

10 郭穎;曲彥明;韓松;鐘潔;于春江;李俊發(fā);;血管細(xì)胞黏附分子-1蛋白在人腦膠質(zhì)瘤組織內(nèi)表達(dá)改變及其臨床意義[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年12期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 檀增憲;ARID1A在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2016年

2 秦曉勇;長(zhǎng)鏈非編碼RNA-TSLC1-AS1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及功能研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張勇;腦膠質(zhì)瘤組織中UHRF1表達(dá)及對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的影響研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

2 陳昊;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞和負(fù)性共刺激分子PD-L1在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及其意義[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 韓小輝;B細(xì)胞易位基因1在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)及意義[D];鄭州大學(xué);2016年

4 王博;Sox2和0ct4在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2015年

5 王偉;人腦膠質(zhì)瘤組織中腫瘤干細(xì)胞的分布特征[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

6 徐江龍;EGFR及EGFRVⅢ在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及裸鼠原位移植瘤模型的建立[D];河北大學(xué);2015年

7 崔勇;人腦膠質(zhì)瘤組織中EGFR、MMP-9、Ki67的表達(dá)及意義[D];河北大學(xué);2010年

8 周勁旭;高通量腦膠質(zhì)瘤組織芯片的制備和靶標(biāo)GOLPH3、BSP的功能研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

9 葉云;PDCD4基因在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及意義[D];蘇州大學(xué);2010年

10 王小強(qiáng);ILK、PKB在人腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究[D];蘭州大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2872619