發(fā)布時(shí)間：2020-11-03 15:31

　　 目的:神經(jīng)母細(xì)胞瘤(NB)MYCN擴(kuò)增與其快速進(jìn)展密切相關(guān),但促發(fā)MYCN擴(kuò)增機(jī)制尚未完全明確。本文以與MYCN位置鄰近的長(zhǎng)鏈非編碼基因(Long noncoding RNA,LncRNA)為切入點(diǎn),從細(xì)胞生物學(xué)功能角度明確AC142119.1對(duì)NB細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖等的影響;從分子機(jī)制水平初步探索AC142119.1調(diào)控MYCN啟動(dòng)子區(qū)組蛋白甲基化的具體分子機(jī)制。方法:借助LncRNA表達(dá)譜芯片檢測(cè)MYCN擴(kuò)增和非擴(kuò)增NB細(xì)胞系中差異表達(dá)LncRNAs,Real-time PCR和Western blot檢測(cè)NB細(xì)胞系中AC142119.1與MYCN的表達(dá),沉默和過(guò)表達(dá)AC142119.1后Real-time PCR和Western blot分析AC142119.1與MYCN的表達(dá)變化;CCK-8、ki-67免疫熒光、細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AC142119.1對(duì)NB細(xì)胞增殖的影響;FISH和胞質(zhì)胞核分離實(shí)驗(yàn)對(duì)AC142119.1進(jìn)行定位,cat RAPID網(wǎng)站預(yù)測(cè)AC142119.1與組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶結(jié)合能力,Ch IP-PCR檢測(cè)AC142119.1對(duì)MYCN啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白甲基化的調(diào)控作用。結(jié)果:根據(jù)基因芯片結(jié)果和生物信息學(xué)分析找到與MYCN位置鄰近差異倍數(shù)最大的LncRNA-AC142119.1,AC142119.1在MYCN高表達(dá)NB細(xì)胞系中的表達(dá)水平顯著高于MYCN低表達(dá)的NB細(xì)胞系,沉默和過(guò)表達(dá)AC142119.1后分別導(dǎo)致MYCN的表達(dá)下降和增加;CCK-8、ki-67實(shí)驗(yàn)表明AC142119.1可以促進(jìn)細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)證明AC142119.1可以減少細(xì)胞S期阻滯;FISH與胞質(zhì)胞核實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明AC142119.1定位于細(xì)胞核;catRAPID結(jié)果表明AC142119.1可能與組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶結(jié)合,CHIP-PCR證實(shí)沉默AC142119.1可以減少M(fèi)YCN啟動(dòng)子區(qū)組蛋白3賴氨酸27甲基化(H3K27me3)活性。結(jié)論:與MYCN位置鄰近的LncRNA-AC142119.1在MYCN高表達(dá)的NB細(xì)胞中高表達(dá),并促進(jìn)NB細(xì)胞增殖,同時(shí)AC142119.1可以調(diào)控MYCN表達(dá),其機(jī)制可能與調(diào)控MYCN啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白甲基化有關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.4
【部分圖文】：

16圖 1.1：MYCN 擴(kuò)增和非擴(kuò)增的 NB 細(xì)胞系中 LncRNA 表達(dá)譜差gure 1.1: Different LncRNA expression profiles between the MYCN-and non-amplified NB cell lines片結(jié)果驗(yàn)證擇 6 個(gè)差異表達(dá)的 LncRNAs，通過(guò) Real-time PCR 分別在細(xì)胞中驗(yàn)證其表達(dá)，結(jié)果與基因芯片結(jié)果一致（圖 1.2）。說(shuō)

圖 1.2：基因表達(dá)譜芯片的驗(yàn)證 1.2: Validation of LncRNA microarray data by Rea分析與 MYCN 位置鄰近的差異 LncRN片，與 MYCN（chr2: 15940438-15947007）位RNAs 中有 3 個(gè)（表 1.1），其中差異倍數(shù):16096426-16105662) 位于 MYCN 上游（圖 1.53bp，有 4 個(gè)外顯子和 3 個(gè)內(nèi)含子，確切功能由于其在細(xì)胞中的豐度較低，所以沒(méi)有納入我表 1.1：與 MYCN 位置鄰近的差異表達(dá) LncRN1: Differential expressed LncRNAs which located ne

Real-time PCR 和 WB 檢測(cè) MYCN mRNA 和蛋白在 NB 細(xì)胞的表達(dá)水平Real-time PCR 檢測(cè)在 SH-SY5Y、SK-N-AS、SK-N-DZ 和 SK-N-BE(2) 細(xì)CN mRNA 的表達(dá)水平。與 SH-SY5Y 細(xì)胞相比，MYCN mRNA 在 SK-K-N-BE(2)細(xì)胞中的表達(dá)均增高 100 余倍（P<0.01），而在 SK-N-AS 細(xì)胞無(wú)顯著差異（P >0.05）（圖 1.4A）。WB 檢測(cè) MYCN 蛋白在 NB 細(xì)胞中的表達(dá)。與 SH-SY5Y 細(xì)胞相比，MYC SK-N-DZ 和 SK-N-BE(2) 細(xì)胞中的表達(dá)均增高 50 多倍（P<0.01），N-AS 細(xì)胞中的表達(dá)無(wú)顯著差異（P >0.05）（圖 1.4 B）。以上結(jié)果表明 MK-N-DZ和SK-N-BE(2)細(xì)胞中高表達(dá)，在SH-SY5Y和SK-N-AS細(xì)胞中低
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本文編號(hào)：2868764