背景:The NOD-like receptor family,pyrin domaincontaining 3(NLRP3)炎性復(fù)合體是細(xì)胞內(nèi)固有免疫系統(tǒng)中的一個(gè)重要的多蛋白復(fù)合物,由NLRP3 scaffold,the ASC(PYCARD)adaptor及pro-caspase-1組裝而成。在內(nèi)、外介導(dǎo)的因素的刺激下,NLRP3炎性復(fù)合體發(fā)生活化,可導(dǎo)致炎癥級(jí)聯(lián)瀑布反應(yīng),加重炎性損傷。現(xiàn)有研究表明,NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)在腦缺血再灌注損傷過程中具有重要作用;RSV具有減輕腦缺血損傷的保護(hù)作用,但是其具體的腦保護(hù)機(jī)制仍舊不甚清楚。目的:探究RSV能否通過抑制NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)減輕腦缺血再灌注損傷以及autophagy是否參與到RSV對(duì)NLRP3炎性復(fù)合體活化的抑制過程。此外,我們也探索了Sirt-1在RSV誘導(dǎo)的腦保護(hù)過程中的重要作用。方法:⑴采用Longa線栓法制做大鼠大腦中動(dòng)脈栓塞(1h)再灌注(24h)模型,并于再灌注開始時(shí)給予RSV腹腔注射(100mg/kg)。⑵在大鼠MCAO術(shù)前30分鐘進(jìn)行3-MA(特異性autophagy抑制劑)的左側(cè)腦室注射(600nmol、10ug/ul),之后再采用Longa線栓法制做大鼠MCAO模型并于再灌注啟始時(shí)給予RSV處理(腹腔注射、100mg/kg)。⑶化學(xué)合成特異性Sirt-1 siRNA(sense primer 5-GCAGAUUAGUAAGCGUCUUTT-3 and antisense primer 5-AAGACGCUUACUAAUCUGCTT-3),在大鼠MCAO術(shù)前24h進(jìn)行左側(cè)腦室注射(10ul、2μg/μL)。之后再采用Longa線栓法制做大鼠MCAO模型,在再灌注啟始時(shí)給予RSV處理(腹腔注射、100mg/kg)。⑷用Western blot檢測Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV組中Sirt-1、p62、LC3B和NLRP3炎性復(fù)合體及其下游炎癥分子caspase-1、IL1β、IL18的蛋白表達(dá)水平;用TTC染色法檢測上述四個(gè)分組中腦梗死的體積大小;測定各組樣本中腦組織的含水量;對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。⑸用Western blot檢測Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV、MCAO+RSV+3-MA組中Sirt-1、p62、LC3B及NLRP3炎性復(fù)合體的蛋白表達(dá)水平。⑹用Western blot檢測Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV、MCAO+RSV+Sirt1 siRNA組中Sirt-1、p62、LC3B及NLRP3炎性復(fù)合體的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:⑴腦缺血再灌注損傷后,腦皮質(zhì)中NLRP3炎性復(fù)合體及其下游炎性分子caspase-1、IL1β、IL18蛋白表達(dá)水平增加;同時(shí),Sirt-1表達(dá)水平上調(diào)、自噬活性增強(qiáng)(LC3BII/I的比值增大、P62增多)。RSV處理可以明顯地抑制NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),進(jìn)一步上調(diào)Sirt-1的表達(dá)水平、增強(qiáng)自噬活性(LC3BII/I的比值進(jìn)一步增大、P62減少)。此外,RSV處理還可以顯著地減小腦梗死灶體積、降低腦含水量、改善神經(jīng)功能評(píng)分。⑵使用3-MA特異性抑制自噬活性(LC3BII/I的比值減小、P62增多)后,RSV對(duì)NLRP3炎性復(fù)合體活化的抑制作用被明顯阻斷,但Sirt-1的蛋白表達(dá)水平未受明顯影響。⑶使用siRNA特異性干擾Sirt-1的表達(dá)后,不僅顯著地逆轉(zhuǎn)了RSV對(duì)NLRP3炎性復(fù)合體活化的抑制作用而且明顯地阻斷了RSV誘導(dǎo)的自噬活性的增強(qiáng)(LC3BII/I的比值大幅減小、P62大幅增多)。結(jié)論:RSV處理可通過增強(qiáng)Sirt-1誘導(dǎo)的自噬活性抑制NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)從而減輕腦缺血再灌注損傷。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743
【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 RSV對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第二部分 RSV對(duì)腦缺血再灌注損傷后Sirt-1的表達(dá)、自噬活性以及NLRP3炎性復(fù)合體活化的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第三部分 RSV通過誘導(dǎo)自噬活性抑制NLRP3炎性復(fù)合體的活化
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第四部分 Sirt-1在RSV增強(qiáng)自噬活性并抑制NLRP3炎性復(fù)合體活化的過程中具有重要作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的論文

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱耀斌;張雅娉;李志強(qiáng);丁楠;伊寒露;沈磊;趙宇東;葉贊凱;劉揚(yáng);樊星;劉東海;張偉華;;囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠線粒體功能及氧化應(yīng)激的影響[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2018年11期

2 王嬌;周國平;吳春曉;許秀洪;;針刺治療腦缺血再灌注損傷機(jī)制研究[J];中醫(yī)學(xué)報(bào);2017年01期

3 孫大偉;齊新;高青;;丹參素調(diào)控自噬以減少缺血再灌注損傷研究進(jìn)展[J];河南中醫(yī);2017年05期

4 胡曉鶯;陳振雨;;靜脈淤血型皮瓣缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展[J];中國美容整形外科雜志;2017年04期

5 彭智遠(yuǎn);劉旺華;曹雯;;腦缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2017年08期

6 李瑞華;闞世廉;李津;;骨骼肌缺血再灌注損傷研究進(jìn)展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志;2017年04期

7 秦聰;張杰;;缺血再灌注損傷中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2017年09期

8 宋亞剛;葉林峰;吃安坤;曹慧;沈甜;張曉雙;侯建平;王斌;;5-脂氧酶在腦缺血再灌注損傷中的機(jī)制探討[J];中南藥學(xué);2016年04期

9 劉磊;劉麗華;馬玉奎;;腦缺血再灌注損傷機(jī)制研究進(jìn)展[J];藥學(xué)研究;2016年09期

10 楊楊;孫華;;近10年針刺治療腦缺血再灌注損傷的研究進(jìn)展[J];中國針灸;2015年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 包道日娜;通過抑制核因子κB表達(dá)在遠(yuǎn)端缺血預(yù)處理胃缺血再灌注損傷大鼠模型中的保護(hù)作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

2 蔣海山;缺血再灌注器官型腦片神經(jīng)再生的作用及機(jī)理研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

3 黃超;MicroRNA-708在腦缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

4 蔣玲玲;藥物后處理對(duì)心臟/腎臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及信號(hào)通路研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

5 孟哲;瞬時(shí)受體陽離子通道TRPM7在缺血再灌注損傷中的作用機(jī)制及應(yīng)用的研究[D];武漢大學(xué);2015年

6 郭森;IRF4在腦缺血再灌注損傷中的作用與機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2015年

7 齊小康;n-3多不飽和脂肪酸對(duì)大鼠睪丸缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2018年

8 胡曉鶯;熱休克蛋白90α對(duì)靜脈淤血型皮瓣缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2017年

9 曹霞;人參皂苷Re對(duì)心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2004年

10 張英俊;雙苯氟嗪腦保護(hù)作用的分子機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 何琪;白藜蘆醇通過增強(qiáng)Sirt-1誘導(dǎo)的自噬活性抑制NLRP3炎性復(fù)合體活化減輕腦缺血再灌注損傷[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

2 石佳欣;高血鉀對(duì)心肺復(fù)蘇后大鼠腦缺血再灌注損傷的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2017年

3 張洋;雌激素調(diào)節(jié)Th17/Treg細(xì)胞免疫平衡保護(hù)腎臟缺血再灌注損傷[D];石河子大學(xué);2018年

4 樊勇樂;慢病毒介導(dǎo)熱休克蛋白目的片段至人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)皮瓣缺血再灌注損傷[D];青島大學(xué);2018年

5 武康;NLRP3在小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用及MCC950應(yīng)用研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

6 穆麗娜;硫化氫通過Nod2信號(hào)通路在腎臟缺血再灌注損傷中保護(hù)作用的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

7 黃俊;嗎啡預(yù)處理經(jīng)由ERK通路調(diào)控受體相互作用蛋白減輕大鼠全心缺血再灌注損傷的作用機(jī)制[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

8 唐玥雯;RTN1-C在腦缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

9 裴科陽;腺苷預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷線粒體功能的影響[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2018年

10 龐國棟;硫酸鎂對(duì)腦缺血再灌注損傷的腦保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2864110