發(fā)布時間：2020-10-31 15:06

　　 背景:The NOD-like receptor family,pyrin domaincontaining 3(NLRP3)炎性復(fù)合體是細(xì)胞內(nèi)固有免疫系統(tǒng)中的一個重要的多蛋白復(fù)合物,由NLRP3 scaffold,the ASC(PYCARD)adaptor及pro-caspase-1組裝而成。在內(nèi)、外介導(dǎo)的因素的刺激下,NLRP3炎性復(fù)合體發(fā)生活化,可導(dǎo)致炎癥級聯(lián)瀑布反應(yīng),加重炎性損傷�，F(xiàn)有研究表明,NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥級聯(lián)反應(yīng)在腦缺血再灌注損傷過程中具有重要作用;RSV具有減輕腦缺血損傷的保護(hù)作用,但是其具體的腦保護(hù)機制仍舊不甚清楚。目的:探究RSV能否通過抑制NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)減輕腦缺血再灌注損傷以及autophagy是否參與到RSV對NLRP3炎性復(fù)合體活化的抑制過程。此外,我們也探索了Sirt-1在RSV誘導(dǎo)的腦保護(hù)過程中的重要作用。方法:⑴采用Longa線栓法制做大鼠大腦中動脈栓塞(1h)再灌注(24h)模型,并于再灌注開始時給予RSV腹腔注射(100mg/kg)。⑵在大鼠MCAO術(shù)前30分鐘進(jìn)行3-MA(特異性autophagy抑制劑)的左側(cè)腦室注射(600nmol、10ug/ul),之后再采用Longa線栓法制做大鼠MCAO模型并于再灌注啟始時給予RSV處理(腹腔注射、100mg/kg)。⑶化學(xué)合成特異性Sirt-1 siRNA(sense primer 5-GCAGAUUAGUAAGCGUCUUTT-3 and antisense primer 5-AAGACGCUUACUAAUCUGCTT-3),在大鼠MCAO術(shù)前24h進(jìn)行左側(cè)腦室注射(10ul、2μg/μL)。之后再采用Longa線栓法制做大鼠MCAO模型,在再灌注啟始時給予RSV處理(腹腔注射、100mg/kg)。⑷用Western blot檢測Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV組中Sirt-1、p62、LC3B和NLRP3炎性復(fù)合體及其下游炎癥分子caspase-1、IL1β、IL18的蛋白表達(dá)水平;用TTC染色法檢測上述四個分組中腦梗死的體積大小;測定各組樣本中腦組織的含水量;對各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。⑸用Western blot檢測Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV、MCAO+RSV+3-MA組中Sirt-1、p62、LC3B及NLRP3炎性復(fù)合體的蛋白表達(dá)水平。⑹用Western blot檢測Sham、MCAO、MCAO+DMSO、MCAO+RSV、MCAO+RSV+Sirt1 siRNA組中Sirt-1、p62、LC3B及NLRP3炎性復(fù)合體的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:⑴腦缺血再灌注損傷后,腦皮質(zhì)中NLRP3炎性復(fù)合體及其下游炎性分子caspase-1、IL1β、IL18蛋白表達(dá)水平增加;同時,Sirt-1表達(dá)水平上調(diào)、自噬活性增強(LC3BII/I的比值增大、P62增多)。RSV處理可以明顯地抑制NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),進(jìn)一步上調(diào)Sirt-1的表達(dá)水平、增強自噬活性(LC3BII/I的比值進(jìn)一步增大、P62減少)。此外,RSV處理還可以顯著地減小腦梗死灶體積、降低腦含水量、改善神經(jīng)功能評分。⑵使用3-MA特異性抑制自噬活性(LC3BII/I的比值減小、P62增多)后,RSV對NLRP3炎性復(fù)合體活化的抑制作用被明顯阻斷,但Sirt-1的蛋白表達(dá)水平未受明顯影響。⑶使用siRNA特異性干擾Sirt-1的表達(dá)后,不僅顯著地逆轉(zhuǎn)了RSV對NLRP3炎性復(fù)合體活化的抑制作用而且明顯地阻斷了RSV誘導(dǎo)的自噬活性的增強(LC3BII/I的比值大幅減小、P62大幅增多)。結(jié)論:RSV處理可通過增強Sirt-1誘導(dǎo)的自噬活性抑制NLRP3炎性復(fù)合體介導(dǎo)的炎癥級聯(lián)反應(yīng)從而減輕腦缺血再灌注損傷。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R743
【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 RSV對腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第二部分 RSV對腦缺血再灌注損傷后Sirt-1的表達(dá)、自噬活性以及NLRP3炎性復(fù)合體活化的影響
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第三部分 RSV通過誘導(dǎo)自噬活性抑制NLRP3炎性復(fù)合體的活化
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第四部分 Sirt-1在RSV增強自噬活性并抑制NLRP3炎性復(fù)合體活化的過程中具有重要作用
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
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