本文關鍵詞：米諾環(huán)素在神經退行疾病小鼠模型中對神經元流失的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：米諾環(huán)素(Minocycline)是一種廣譜的四環(huán)素類抗生素。很多的臨床醫(yī)學研究已經證實,在多種神經相關疾病的動物模型中,米諾環(huán)素具有一定的神經保護作用。然而,目前未知米諾環(huán)素是否能夠影響到神經退行疾病模型中的神經元流失現象。為了系統(tǒng)地檢測米諾環(huán)素對神經元流失的影響,本項目使用米諾環(huán)素在出現年齡依賴性神經元流失的Dicer條件性敲除(Dicer conditional knockout,Dicer cKO)的小鼠模型中。首先,檢測Dicer cKO小鼠出現神經炎癥反應和神經元流失開始發(fā)生的時間點,在Dicer cKO小鼠出現神經炎癥反應與神經元流失現象出現之前,連續(xù)使用米諾環(huán)素治療Dicer cKO小鼠兩個月。在治療后,檢測治療組與對照組中神經炎癥反應的相關特異性蛋白,包括膠質細胞纖維素酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP),鈣離子結合體分子1(Ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)和白介素6(Interleukin 6,IL6),在治療組Dicer c KO小鼠的大腦中蛋白表達量顯著減少,說明米諾環(huán)素能夠抑制神經炎癥反應。然而,檢測神經細胞核蛋白(Neuronal nuclear,NeuN)、突觸小泡蛋白(Synaptophysin,SYP)和突觸后膜蛋白(Postsynaptic Density protein 95,PSD95),以及檢測神經元細胞凋亡,發(fā)現神經元的流失和凋亡細胞的數目并沒有受到藥物的影響,說明米諾環(huán)素不能抑制神經元流失現象。在Dicer cKO小鼠的大腦皮層中,出現微管相關蛋白質Tau的過度磷酸化現象,而米諾環(huán)素治療后的Dicer cKO小鼠中的Tau蛋白的過度磷酸化現象并未顯著改變,檢測Tau蛋白的相關激酶,如促細胞分裂素蛋白p44/42(Mitogen-activated protein kinases p44/42,MAPK p44/42 or Erk1/2)、糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,Gsk3)和蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt),激酶的活性沒有受到影響,說明米諾環(huán)素不能抑制Tau蛋白相關激酶的活性,從而不能改變Dicer cKO小鼠的Tau的過度磷酸化現象。因此,米諾環(huán)素能夠抑制神經炎癥反應,不能抑制神經元的流失和凋亡。
【關鍵詞】：米諾環(huán)素 Dicer cKO 神經炎癥反應 神經元流失
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R741;R-332
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-10
• 第1章 引言10-21
• 1 神經退行疾病10-13
• 1.1 神經退行疾病的研究進展10
• 1.2 神經退行疾病的功能紊亂10-11
• 1.3 神經退行疾病的細胞內病理機制11-13
• 1.4 神經退行疾病與年齡13
• 1.5 治療13
• 2 神經炎癥反應13-17
• 2.1 神經炎癥反應的誘因14
• 2.2 中樞神經系統(tǒng)免疫應答14-16
• 2.3 神經炎癥與神經退行疾病16-17
• 2.4 作為治療靶點的研究17
• 3 米諾環(huán)素17-18
• 4 Cre-Flox P簡介18
• 5 CaMK II-Cre簡介18
• 6 Dicer基因及蛋白簡介18-19
• 7 課題研究的來源、目的及意義19-21
• 7.1 課題來源19
• 7.2 研究的目的和意義19-21
• 第2章 Dicer cKO 2 月齡小鼠的大腦形態(tài)21-33
• 1 材料和設備21-23
• 1.1 實驗動物21
• 1.2 試劑21-22
• 1.3 抗體22
• 1.4 設備22-23
• 1.5 溶液配制23
• 2 實驗方法23-28
• 2.1 動物模型繁殖和編號23-24
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組24-25
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣25
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片25-26
• 2.5 尼氏小體染色（Nissl染色）實驗26
• 2.6 組織免疫化學實驗26-28
• 2.7 組織免疫熒光實驗28
• 3 結果和分析28-32
• 3.1 Dicer cKO小鼠的基因型鑒定結果和實驗小鼠分組28-29
• 3.2 Nissl染色結果29-30
• 3.3 成熟神經元的檢測30
• 3.4 新激活神經膠質細胞測定30
• 3.5 突觸和細胞微管骨架形態(tài)組織免疫熒光染色30-31
• 3.6 神經炎癥反應和神經元死亡開始發(fā)生時間測定結果31-32
• 4 小結32-33
• 第3章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經炎癥反應的影響33-43
• 1 材料和設備33-37
• 1.1 實驗動物33
• 1.2 試劑33
• 1.3 抗體33-34
• 1.4 設備34
• 1.5 溶液配制34-37
• 2 實驗方法37-39
• 2.1 動物模型繁殖和編號37
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組37
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣37
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片37
• 2.5 小鼠大腦皮質總蛋白提取實驗37-38
• 2.6 蛋白濃度測定38
• 2.7 組織免疫化學實驗38
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實驗38-39
• 3 結果和分析39-41
• 3.1 米諾環(huán)素對神經炎癥反應的影響檢測結果39-40
• 3.2 米諾環(huán)素對神經免疫反應的影響40-41
• 4 小結41-43
• 第4章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經元退行的影響43-50
• 1 材料和設備43-47
• 1.1 實驗動物43
• 1.2 試劑43
• 1.3 抗體43
• 1.4 設備43-44
• 1.5 溶液配制44-47
• 2 實驗方法47
• 2.1 動物模型繁殖和編號47
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組47
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣47
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片47
• 2.5 小鼠大腦皮質總蛋白提取實驗47
• 2.6 蛋白濃度測定47
• 2.7 組織免疫化學實驗47
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實驗47
• 3 結果和分析47-49
• 3.1 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經退行的影響47-49
• 4 小結49-50
• 第5章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠突觸影響50-58
• 1 材料和設備50-54
• 1.1 實驗動物50
• 1.2 試劑50
• 1.3 抗體50-51
• 1.4 設備51
• 1.5 溶液配制51-54
• 2 實驗方法54-55
• 2.1 動物模型繁殖和編號54
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組54
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣54
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片54
• 2.5 小鼠大腦皮質總蛋白提取實驗54
• 2.6 蛋白濃度測定54
• 2.7 組織免疫熒光實驗54
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實驗54-55
• 3 結果和分析55-57
• 3.1 米諾環(huán)素對神經突觸的影響檢測結果55
• 3.2 米諾環(huán)素對神經樹突的影響檢測結果55-57
• 4 小結57-58
• 第6章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經凋亡影響58-63
• 1 材料和設備58-60
• 1.1 實驗動物58
• 1.2 試劑58
• 1.3 設備58-60
• 2 實驗方法60-61
• 2.1 動物模型繁殖和編號60
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組60
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣60
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片60
• 2.5 凋亡細胞檢測實驗60-61
• 3 結果和分析61
• 3.1 米諾環(huán)素對神經元凋亡的影響檢測結果61
• 4 小結61-63
• 第7章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠Tau過度磷酸化影響63-71
• 1 材料和設備63-66
• 1.1 實驗動物63
• 1.2 試劑63
• 1.3 抗體63-64
• 1.4 設備64
• 1.5 溶液配制64-66
• 2 實驗方法66-67
• 2.1 動物模型繁殖和編號66-67
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組67
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣67
• 2.4 小鼠大腦皮質總蛋白提取實驗67
• 2.5 蛋白濃度測定67
• 2.6 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實驗67
• 3 結果和分析67-68
• 3.1 米諾環(huán)素對Tau磷酸化的的影響檢測結果67
• 3.2 米諾環(huán)素對Tau的磷酸化激酶的影響檢測結果67-68
• 4 小結68-71
• 第8章 研究結論與展望71-73
• 1 結論71-72
• 2 研究展望72-73
• 致謝73-74
• 參考文獻74-79
• 攻讀學位期間的研究成果79

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1 梁新亮;張守民;;口服米諾環(huán)素聯(lián)合過氧化苯甲酰治療痤瘡療效觀察[J];醫(yī)藥論壇雜志;2011年18期

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5 李蓬;米諾環(huán)素局部用藥治療牙周炎的研究進展[J];北京口腔醫(yī)學;2004年02期

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7 任韻清;楊森;張學軍;;米諾環(huán)素應用新進展[J];中華皮膚科雜志;2005年12期

8 馮柏秋;;異維A酸凝膠與米諾環(huán)素治療痤瘡的療效比較分析[J];中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥;2007年05期

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10 鄒群;路秀文;張志紅;韋界飛;劉洪正;渠莉;朱z

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