本文關(guān)鍵詞：米諾環(huán)素在神經(jīng)退行疾病小鼠模型中對神經(jīng)元流失的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：米諾環(huán)素(Minocycline)是一種廣譜的四環(huán)素類抗生素。很多的臨床醫(yī)學(xué)研究已經(jīng)證實(shí),在多種神經(jīng)相關(guān)疾病的動物模型中,米諾環(huán)素具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。然而,目前未知米諾環(huán)素是否能夠影響到神經(jīng)退行疾病模型中的神經(jīng)元流失現(xiàn)象。為了系統(tǒng)地檢測米諾環(huán)素對神經(jīng)元流失的影響,本項(xiàng)目使用米諾環(huán)素在出現(xiàn)年齡依賴性神經(jīng)元流失的Dicer條件性敲除(Dicer conditional knockout,Dicer cKO)的小鼠模型中。首先,檢測Dicer cKO小鼠出現(xiàn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元流失開始發(fā)生的時(shí)間點(diǎn),在Dicer cKO小鼠出現(xiàn)神經(jīng)炎癥反應(yīng)與神經(jīng)元流失現(xiàn)象出現(xiàn)之前,連續(xù)使用米諾環(huán)素治療Dicer cKO小鼠兩個(gè)月。在治療后,檢測治療組與對照組中神經(jīng)炎癥反應(yīng)的相關(guān)特異性蛋白,包括膠質(zhì)細(xì)胞纖維素酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP),鈣離子結(jié)合體分子1(Ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)和白介素6(Interleukin 6,IL6),在治療組Dicer c KO小鼠的大腦中蛋白表達(dá)量顯著減少,說明米諾環(huán)素能夠抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng)。然而,檢測神經(jīng)細(xì)胞核蛋白(Neuronal nuclear,NeuN)、突觸小泡蛋白(Synaptophysin,SYP)和突觸后膜蛋白(Postsynaptic Density protein 95,PSD95),以及檢測神經(jīng)元細(xì)胞凋亡,發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元的流失和凋亡細(xì)胞的數(shù)目并沒有受到藥物的影響,說明米諾環(huán)素不能抑制神經(jīng)元流失現(xiàn)象。在Dicer cKO小鼠的大腦皮層中,出現(xiàn)微管相關(guān)蛋白質(zhì)Tau的過度磷酸化現(xiàn)象,而米諾環(huán)素治療后的Dicer cKO小鼠中的Tau蛋白的過度磷酸化現(xiàn)象并未顯著改變,檢測Tau蛋白的相關(guān)激酶,如促細(xì)胞分裂素蛋白p44/42(Mitogen-activated protein kinases p44/42,MAPK p44/42 or Erk1/2)、糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,Gsk3)和蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt),激酶的活性沒有受到影響,說明米諾環(huán)素不能抑制Tau蛋白相關(guān)激酶的活性,從而不能改變Dicer cKO小鼠的Tau的過度磷酸化現(xiàn)象。因此,米諾環(huán)素能夠抑制神經(jīng)炎癥反應(yīng),不能抑制神經(jīng)元的流失和凋亡。
【關(guān)鍵詞】：米諾環(huán)素 Dicer cKO 神經(jīng)炎癥反應(yīng) 神經(jīng)元流失
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R741;R-332
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-10
• 第1章 引言10-21
• 1 神經(jīng)退行疾病10-13
• 1.1 神經(jīng)退行疾病的研究進(jìn)展10
• 1.2 神經(jīng)退行疾病的功能紊亂10-11
• 1.3 神經(jīng)退行疾病的細(xì)胞內(nèi)病理機(jī)制11-13
• 1.4 神經(jīng)退行疾病與年齡13
• 1.5 治療13
• 2 神經(jīng)炎癥反應(yīng)13-17
• 2.1 神經(jīng)炎癥反應(yīng)的誘因14
• 2.2 中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫應(yīng)答14-16
• 2.3 神經(jīng)炎癥與神經(jīng)退行疾病16-17
• 2.4 作為治療靶點(diǎn)的研究17
• 3 米諾環(huán)素17-18
• 4 Cre-Flox P簡介18
• 5 CaMK II-Cre簡介18
• 6 Dicer基因及蛋白簡介18-19
• 7 課題研究的來源、目的及意義19-21
• 7.1 課題來源19
• 7.2 研究的目的和意義19-21
• 第2章 Dicer cKO 2 月齡小鼠的大腦形態(tài)21-33
• 1 材料和設(shè)備21-23
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物21
• 1.2 試劑21-22
• 1.3 抗體22
• 1.4 設(shè)備22-23
• 1.5 溶液配制23
• 2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2.1 動物模型繁殖和編號23-24
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組24-25
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣25
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片25-26
• 2.5 尼氏小體染色（Nissl染色）實(shí)驗(yàn)26
• 2.6 組織免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)26-28
• 2.7 組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)28
• 3 結(jié)果和分析28-32
• 3.1 Dicer cKO小鼠的基因型鑒定結(jié)果和實(shí)驗(yàn)小鼠分組28-29
• 3.2 Nissl染色結(jié)果29-30
• 3.3 成熟神經(jīng)元的檢測30
• 3.4 新激活神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞測定30
• 3.5 突觸和細(xì)胞微管骨架形態(tài)組織免疫熒光染色30-31
• 3.6 神經(jīng)炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元死亡開始發(fā)生時(shí)間測定結(jié)果31-32
• 4 小結(jié)32-33
• 第3章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經(jīng)炎癥反應(yīng)的影響33-43
• 1 材料和設(shè)備33-37
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物33
• 1.2 試劑33
• 1.3 抗體33-34
• 1.4 設(shè)備34
• 1.5 溶液配制34-37
• 2 實(shí)驗(yàn)方法37-39
• 2.1 動物模型繁殖和編號37
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組37
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣37
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片37
• 2.5 小鼠大腦皮質(zhì)總蛋白提取實(shí)驗(yàn)37-38
• 2.6 蛋白濃度測定38
• 2.7 組織免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)38
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實(shí)驗(yàn)38-39
• 3 結(jié)果和分析39-41
• 3.1 米諾環(huán)素對神經(jīng)炎癥反應(yīng)的影響檢測結(jié)果39-40
• 3.2 米諾環(huán)素對神經(jīng)免疫反應(yīng)的影響40-41
• 4 小結(jié)41-43
• 第4章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經(jīng)元退行的影響43-50
• 1 材料和設(shè)備43-47
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物43
• 1.2 試劑43
• 1.3 抗體43
• 1.4 設(shè)備43-44
• 1.5 溶液配制44-47
• 2 實(shí)驗(yàn)方法47
• 2.1 動物模型繁殖和編號47
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組47
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣47
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片47
• 2.5 小鼠大腦皮質(zhì)總蛋白提取實(shí)驗(yàn)47
• 2.6 蛋白濃度測定47
• 2.7 組織免疫化學(xué)實(shí)驗(yàn)47
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實(shí)驗(yàn)47
• 3 結(jié)果和分析47-49
• 3.1 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經(jīng)退行的影響47-49
• 4 小結(jié)49-50
• 第5章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠突觸影響50-58
• 1 材料和設(shè)備50-54
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物50
• 1.2 試劑50
• 1.3 抗體50-51
• 1.4 設(shè)備51
• 1.5 溶液配制51-54
• 2 實(shí)驗(yàn)方法54-55
• 2.1 動物模型繁殖和編號54
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組54
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣54
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片54
• 2.5 小鼠大腦皮質(zhì)總蛋白提取實(shí)驗(yàn)54
• 2.6 蛋白濃度測定54
• 2.7 組織免疫熒光實(shí)驗(yàn)54
• 2.8 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實(shí)驗(yàn)54-55
• 3 結(jié)果和分析55-57
• 3.1 米諾環(huán)素對神經(jīng)突觸的影響檢測結(jié)果55
• 3.2 米諾環(huán)素對神經(jīng)樹突的影響檢測結(jié)果55-57
• 4 小結(jié)57-58
• 第6章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠神經(jīng)凋亡影響58-63
• 1 材料和設(shè)備58-60
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物58
• 1.2 試劑58
• 1.3 設(shè)備58-60
• 2 實(shí)驗(yàn)方法60-61
• 2.1 動物模型繁殖和編號60
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組60
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣60
• 2.4 小鼠大腦石蠟固定包埋、切片60
• 2.5 凋亡細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)60-61
• 3 結(jié)果和分析61
• 3.1 米諾環(huán)素對神經(jīng)元凋亡的影響檢測結(jié)果61
• 4 小結(jié)61-63
• 第7章 米諾環(huán)素對Dicer cKO小鼠Tau過度磷酸化影響63-71
• 1 材料和設(shè)備63-66
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物63
• 1.2 試劑63
• 1.3 抗體63-64
• 1.4 設(shè)備64
• 1.5 溶液配制64-66
• 2 實(shí)驗(yàn)方法66-67
• 2.1 動物模型繁殖和編號66-67
• 2.2 小鼠基因型鑒定和分組67
• 2.3 小鼠大腦的解剖取樣67
• 2.4 小鼠大腦皮質(zhì)總蛋白提取實(shí)驗(yàn)67
• 2.5 蛋白濃度測定67
• 2.6 蛋白免疫印跡（Western Blot, WB）實(shí)驗(yàn)67
• 3 結(jié)果和分析67-68
• 3.1 米諾環(huán)素對Tau磷酸化的的影響檢測結(jié)果67
• 3.2 米諾環(huán)素對Tau的磷酸化激酶的影響檢測結(jié)果67-68
• 4 小結(jié)68-71
• 第8章 研究結(jié)論與展望71-73
• 1 結(jié)論71-72
• 2 研究展望72-73
• 致謝73-74
• 參考文獻(xiàn)74-79
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果79

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：286338