發(fā)布時(shí)間：2020-10-27 07:50

　　 目的:探討攜帶載脂蛋白J(apolipoprotein J,ApoJ)基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植對(duì)腦出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠凋亡可能的治療作用及機(jī)制。方法:1.運(yùn)用“貼壁篩選法”于體外分離、培養(yǎng)并純化大鼠BMSCs。2.采用脂質(zhì)體介導(dǎo)重組綠色熒光蛋白質(zhì)粒pEGFP-N1-ApoJ轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的BMSCs,在熒光顯微鏡下觀察重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染效果,篩選出轉(zhuǎn)染率最高的轉(zhuǎn)染組。3.利用腦立體定位儀及“改良二次注血法”建立大鼠腦出血模型。將144只雄性SD大鼠,隨機(jī)分為三組:ApoJ基因修飾的BMSCs移植組(ApoJ/BMSCs組)、BMSCs移植組(BMSCs組)及生理鹽水對(duì)照組(NS組),每組48只。4.三組分別于造模成功24h后,移植等體積轉(zhuǎn)染ApoJ基因的BMSCs懸液、BMSCs懸液和生理鹽水至大鼠的腦出血部位,移植后再分為1 d、3 d、5 d、7 d 4個(gè)亞組,每個(gè)亞組12只。5.在各時(shí)間點(diǎn)采用“改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分(modified neurological severity score,mNss)”評(píng)估大鼠的神經(jīng)功能情況;通過(guò)干濕重法測(cè)量腦組織含水量;HE染色法觀察大鼠腦出血后血腫周圍組織的病理改變;通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、Western blot和免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)血腫周圍腦組織中線粒體促凋亡因子(Omi/HtrA2)的表達(dá)情況。結(jié)果:1.采用體外全骨髓貼壁篩選法,培養(yǎng)出活性較好且純度較高的BMSCs,應(yīng)用于下一步的實(shí)驗(yàn)研究。2.重組pEGFP-N1-ApoJ質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs,且ApoJ基因能夠穩(wěn)定且大量表達(dá)。3.mNSS評(píng)分結(jié)果顯示,在移植后的1d、3d、5d、7d,ApoJ/BMSCs組的評(píng)分明顯低于同時(shí)間點(diǎn)的BMSCs組和NS組(P均0.05),其中BMSCs組又低于同時(shí)間點(diǎn)NS組(P均0.05)。4.大鼠腦組織含水量結(jié)果顯示,ApoJ/BMSCs組腦組織含水量在1d、3d、5d、7d顯著低于同時(shí)間點(diǎn)的BMSCs組和NS組(P均0.05),其中BMSCs組又低于NS組(P均0.05)。5.HE染色顯示,ApoJ/BMSCs組和BMSCs組在1d、3d、5d、7d血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞的水腫、壞死、炎性細(xì)胞及紅細(xì)胞聚集較NS組均有減輕,且ApoJ/BMSCs組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)少,神經(jīng)元細(xì)胞水腫程度最輕,受損神經(jīng)結(jié)構(gòu)修復(fù)最好。6.RT-PCR結(jié)果顯示,在各時(shí)間點(diǎn)ApoJ/BMSCs組Omi/HtrA2 mRNA表達(dá)水平較其他兩組均顯著降低(P均0.05),其中BMSCs組又低于同時(shí)間點(diǎn)NS組(P均0.05)。7.Western blot結(jié)果顯示,與BMSCs組和NS組比較,ApoJ/BMSCs組移植后各時(shí)間點(diǎn)的Omi/HtrA2蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P均0.05),其中BMSCs組又低于同時(shí)間點(diǎn)NS組(P均0.05)。8.免疫組化結(jié)果顯示,ApoJ/BMSCs組在移植后各時(shí)間點(diǎn)的Omi/HtrA2蛋白表達(dá)水平顯著低于另外兩組(P均0.05),其中各時(shí)間點(diǎn)的BMSCs組又低于NS組(P均0.05)。結(jié)論:ApoJ基因修飾的BMSCs移植治療腦出血較單純的BMSCs移植療效更顯著,外源性ApoJ可能通過(guò)抑制Omi/HtrA2介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑,減輕腦水腫,促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù),減輕腦出血后的繼發(fā)性神經(jīng)損傷。
【學(xué)位單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R743.34
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英漢縮略詞對(duì)照表
致謝
載脂蛋白J在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的研究進(jìn)展（綜述）
    參考文獻(xiàn)

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