目的探討小分子化合物組合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化為類神經(jīng)細胞的可行性。方法采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,觀察培養(yǎng)過程中細胞生長狀態(tài);流式細胞術(shù)檢測第3代細胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105的表達情況。實驗組取第3代細胞,以含有Forskolin的神經(jīng)元培養(yǎng)基預誘導1天,再以含有Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021的神經(jīng)元培養(yǎng)基正式誘導3天。對照組以神經(jīng)元培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。使用倒置顯微鏡觀察誘導過程中細胞形態(tài)變化并記錄,免疫熒光法檢測神經(jīng)特異性標記物NSE、Nestin,Western blot技術(shù)檢測NSE、Nestin、SOX1的表達情況。結(jié)果大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞以梭形細胞為主,可見長短不一的突起;3d后可見集落,集落細胞折光性強,中央有雜質(zhì);經(jīng)流式細胞儀鑒定,CD90、CD105表達呈陽性,而CD34和CD45表達呈陰性,結(jié)果表明培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞可用于后續(xù)實驗。誘導后,細胞有明顯神經(jīng)樣形態(tài)改變,免疫熒光檢測到神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)陽性表達,誘導3天后Western blot顯示誘導組與對照組相比NSE、Nestin和SOX1表達明顯增多。結(jié)論1、培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中存在小分子化合物的作用基礎(chǔ);2、小分子化合物組合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)可誘導BMSCs類神經(jīng)分化。
【學位單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R741
【部分圖文】：

圖 1 觀察 BMSCs 生長狀態(tài)注：a 為原代細胞，b 為第 2 代細胞，放大倍數(shù) 100×二、流式細胞儀鑒定 BMSCs流式細胞儀檢測培養(yǎng)的第 3 代 BMSCs 表面標志，結(jié)果顯示間充質(zhì)干細胞表面標志抗原 CD90、CD105 表達呈陽性，陽性率分別為 98.23%、99.27%；而造

圖 2 流式細胞儀檢測 CD34、CD45、CD90、CD105 陽性率、觀察 BMSCs 誘導后的細胞形態(tài)誘導第 1d，可見少數(shù)細胞折光性變強，有較長突起；誘導第 2d，細胞形化更加明顯，突觸伸長，形成分支，并交織成網(wǎng)，呈神經(jīng)細胞樣形態(tài)折光性明顯；誘導第 3d，突起增多，相互連接成網(wǎng)，如圖 3。

11圖 3 觀察誘導過程中細胞形態(tài)變化注：a、b 分別為誘導第 1d、2d 細胞形態(tài)， c、d 為誘導第 3d 細胞形態(tài)，a、b、c 放大倍100×，d 放大倍數(shù) 400×
【參考文獻】

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3 姜楠;潘學峰;;表觀遺傳學及現(xiàn)代表觀遺傳生物醫(yī)藥技術(shù)的發(fā)展[J];生物技術(shù)通報;2015年04期

4 施劍明;牛力;杜桂花;殷明;;骨髓間充質(zhì)干細胞治療周圍神經(jīng)損傷的研究進展[J];中國矯形外科雜志;2014年12期

5 劉镕;趙琴平;董惠芬;蔣明森;;TGF-β信號傳導通路及其生物學功能[J];中國病原生物學雜志;2014年01期

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7 單威;余勤;劉麗珍;王標;;誘導性多能干細胞向神經(jīng)細胞分化的研究進展[J];中國生物工程雜志;2012年09期

8 李進;侯俊;胡敏;;干細胞基礎(chǔ)研究熱點及應用難題[J];解放軍醫(yī)學雜志;2012年06期

本文編號：2855602