目的探討小分子化合物組合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為類神經(jīng)細(xì)胞的可行性。方法采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)第3代細(xì)胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)組取第3代細(xì)胞,以含有Forskolin的神經(jīng)元培養(yǎng)基預(yù)誘導(dǎo)1天,再以含有Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021的神經(jīng)元培養(yǎng)基正式誘導(dǎo)3天。對(duì)照組以神經(jīng)元培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。使用倒置顯微鏡觀察誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)變化并記錄,免疫熒光法檢測(cè)神經(jīng)特異性標(biāo)記物NSE、Nestin,Western blot技術(shù)檢測(cè)NSE、Nestin、SOX1的表達(dá)情況。結(jié)果大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以梭形細(xì)胞為主,可見(jiàn)長(zhǎng)短不一的突起;3d后可見(jiàn)集落,集落細(xì)胞折光性強(qiáng),中央有雜質(zhì);經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定,CD90、CD105表達(dá)呈陽(yáng)性,而CD34和CD45表達(dá)呈陰性,結(jié)果表明培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。誘導(dǎo)后,細(xì)胞有明顯神經(jīng)樣形態(tài)改變,免疫熒光檢測(cè)到神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)陽(yáng)性表達(dá),誘導(dǎo)3天后Western blot顯示誘導(dǎo)組與對(duì)照組相比NSE、Nestin和SOX1表達(dá)明顯增多。結(jié)論1、培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中存在小分子化合物的作用基礎(chǔ);2、小分子化合物組合(Forskolin、SB431542、DMH1、CHIR99021)可誘導(dǎo)BMSCs類神經(jīng)分化。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R741
【部分圖文】：

圖 1 觀察 BMSCs 生長(zhǎng)狀態(tài)注：a 為原代細(xì)胞，b 為第 2 代細(xì)胞，放大倍數(shù) 100×二、流式細(xì)胞儀鑒定 BMSCs流式細(xì)胞儀檢測(cè)培養(yǎng)的第 3 代 BMSCs 表面標(biāo)志，結(jié)果顯示間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志抗原 CD90、CD105 表達(dá)呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率分別為 98.23%、99.27%；而造

圖 2 流式細(xì)胞儀檢測(cè) CD34、CD45、CD90、CD105 陽(yáng)性率、觀察 BMSCs 誘導(dǎo)后的細(xì)胞形態(tài)誘導(dǎo)第 1d，可見(jiàn)少數(shù)細(xì)胞折光性變強(qiáng)，有較長(zhǎng)突起；誘導(dǎo)第 2d，細(xì)胞形化更加明顯，突觸伸長(zhǎng)，形成分支，并交織成網(wǎng)，呈神經(jīng)細(xì)胞樣形態(tài)折光性明顯；誘導(dǎo)第 3d，突起增多，相互連接成網(wǎng)，如圖 3。

11圖 3 觀察誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)胞形態(tài)變化注：a、b 分別為誘導(dǎo)第 1d、2d 細(xì)胞形態(tài)， c、d 為誘導(dǎo)第 3d 細(xì)胞形態(tài)，a、b、c 放大倍100×，d 放大倍數(shù) 400×
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 李文林;張冠宇;孫平新;;干細(xì)胞研究中的化學(xué)生物學(xué):學(xué)科交叉的新前沿[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2017年02期

2 付艷賓;龍媛;謝欣;;全化學(xué)誘導(dǎo)體細(xì)胞重編程和轉(zhuǎn)分化[J];生命科學(xué);2016年08期

3 姜楠;潘學(xué)峰;;表觀遺傳學(xué)及現(xiàn)代表觀遺傳生物醫(yī)藥技術(shù)的發(fā)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2015年04期

4 施劍明;牛力;杜桂花;殷明;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療周?chē)窠?jīng)損傷的研究進(jìn)展[J];中國(guó)矯形外科雜志;2014年12期

5 劉镕;趙琴平;董惠芬;蔣明森;;TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路及其生物學(xué)功能[J];中國(guó)病原生物學(xué)雜志;2014年01期

6 陳兵;易斌;魯開(kāi)智;;Smad蛋白家族調(diào)控細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2013年05期

7 單威;余勤;劉麗珍;王標(biāo);;誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的研究進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2012年09期

8 李進(jìn);侯俊;胡敏;;干細(xì)胞基礎(chǔ)研究熱點(diǎn)及應(yīng)用難題[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2012年06期

本文編號(hào)：2855602