目的:探討拉科酰胺與顳葉癲癇大鼠海馬區(qū)CRMP-2及其磷酸化蛋白表達(dá)的相關(guān)性,從而明確拉科酰胺是否可以通過調(diào)節(jié)其表達(dá)發(fā)揮抗癲癇形成作用。方法:將大鼠隨機(jī)分成三組:(1)假手術(shù)對(duì)照組(Control組),n=8;(2)癲癇組(SE組),n=20;(3)癲癇+拉科酰胺治療組(SE+LCM組),n=20。SE組和SE+LCM組再按時(shí)間點(diǎn)分為3d(n=4)、7d(n=8)、14d(n=4)、28d(n=4)。分別于3d、7d、14d、28d 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)將大鼠斷頭取海馬,然后用Western Blot技術(shù)檢測(cè)各組大鼠CRMP-2及其磷酸化蛋白表達(dá)水平。另外,通過制作石蠟切片、HE染色觀察7d大鼠藥物干預(yù)前后海馬區(qū)病理損傷情況。結(jié)果:(1)SE+LCM組慢性期自發(fā)性發(fā)作大鼠數(shù)量較SE組少。(2)HE染色光鏡下見SE組和SE+LCM組大鼠CA1區(qū)錐體細(xì)胞及DG區(qū)顆粒細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊,結(jié)構(gòu)完整,與Control組大鼠比較無明顯損傷。然而,CA3區(qū)錐體細(xì)胞可見明顯損傷。其中SE組大鼠CA3區(qū)在由腹外方向轉(zhuǎn)向腹內(nèi)側(cè),且繼續(xù)延伸插入齒狀回部分神經(jīng)元脫落、消失嚴(yán)重,僅遺留細(xì)胞碎片及散在的正常細(xì)胞;SE+LCM組大鼠CA3區(qū)僅在由腹外方向轉(zhuǎn)向腹內(nèi)側(cè)部分見到神經(jīng)元明顯脫落、消失,其余部分神經(jīng)元?jiǎng)t相對(duì)保留完整。(3)SE組大鼠海馬區(qū)CRMP-2蛋白表達(dá)在3d、7d、14d、28d 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),而其磷酸化p Thr514蛋白則呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)。(4)拉科酰胺干預(yù)后顳葉癲癇大鼠海馬區(qū)CRMP-2蛋白表達(dá)在急性期(3d、7d)、靜止期(14d)和慢性期(28d)均較非藥物干預(yù)組低,CRMP-2磷酸化p Thr514蛋白表達(dá)均較非藥物干預(yù)組高,且結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)拉科酰胺抗癲癇同時(shí)具有神經(jīng)元保護(hù)作用。(2)SE組大鼠海馬區(qū)CRMP-2蛋白表達(dá)在3d、7d、14d、28d 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),而其磷酸化p Thr514蛋白則呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)。(3)拉科酰胺可通過抑制CRMP-2蛋白表達(dá)并促進(jìn)其磷酸化來抑制神經(jīng)突起的生長,進(jìn)而發(fā)揮抗癲癇形成作用。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R742.1
【部分圖文】：

錐毒素對(duì) Cav2.2 的抑制作用使軸突長度減小酸化，這使得多條信號(hào)通路在一個(gè)點(diǎn)上會(huì)聚性)CRMP-2 的平衡，改變這種平衡的激酶活性的變化將導(dǎo)致應(yīng)變化。2.2.5CRMP-2的磷酸化調(diào)節(jié)通路GSK-3β 是 Akt 的下游基因在神經(jīng)元極性測(cè)定中的關(guān)鍵分子分支，GSK-3β 的活性形式通過使酸化 CRMP-2 可能受兩種不同機(jī)制的調(diào)控底物識(shí)別的變化。與許多底物一樣是 GSK-3β 后續(xù)磷酸化（研究表明，CDK5 啟動(dòng)子的丟失是一。（見圖 2.1）[30,31]。已知 CRMP-2 被這使得多條信號(hào)通路在一個(gè)點(diǎn)上會(huì)聚，即非磷酸化(活性)和改變這種平衡的激酶活性的變化將導(dǎo)致 CRM的下游基因，是負(fù)責(zé)神經(jīng)元存活和軸突生長的在神經(jīng)元極性測(cè)定中的關(guān)鍵分子。GSK-3β 失活或下調(diào)促進(jìn)神經(jīng)元軸CRMP-2 磷酸化減少軸突生長[32可能受兩種不同機(jī)制的調(diào)控：1)GSK-3β 表達(dá)或活性與許多底物一樣，CDK5 對(duì) CRMP-2 的事先磷酸（pThr509、pThr514）的必要條件[33]。WilsGSK-3β 磷酸化 CRMP-2 活性降和CRM是負(fù)責(zé)神經(jīng)元存活和軸突生長的32]表達(dá)或活性的事先磷酸

現(xiàn)配現(xiàn)用。（10）封閉液脫脂奶粉 5g0.01TBS 100ml充分溶解后，現(xiàn)配現(xiàn)用。（11）4%多聚甲醛多聚甲醛 40gNaH2PO42.965gNa2HPO429g雙蒸水 1000ml加熱至60C，充分溶解，過濾，調(diào)整PH至7.4，避光4℃保存。3.2 實(shí)驗(yàn)方法3.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖

橫軸在中線向右旁開 4.5mm，深度距顱骨表面 8.5mm。（見圖 3.2）圖 3.2 大鼠腦BLA定位圖3.2.3 顳葉癲癇大鼠模型制備(1)將大鼠稱重后用 10%水合氯醛以 3.5ml/Kg 腹腔注射麻醉；(2)用耳棒固定大鼠(俯臥位)的兩外耳道于立體定位儀上，使耳廓對(duì)稱外展，頭左右不能晃動(dòng)，大鼠軀干舒展，同時(shí)將切牙掛在齒桿上，并保證切牙緊靠齒桿；(3)剪除大鼠頭部毛發(fā)，用 75%酒精消毒頭部皮膚，取頭顱正中做縱行切口，切開皮膚，分離顱骨上腱膜及顱骨外膜，充分暴露前囟、后囟及冠狀縫；(4)將預(yù)先裝有 0.4μg KA（制備 SE 組模型用）或等量 PBS（制備 Control 組模型用）的微量注射器固定于定位儀上，縱向移動(dòng)游標(biāo)卡尺調(diào)整前、后囟在同一高度上（誤差＜0.05mm），然后使注射器尖端位于前囟，打開前后及左右按鈕
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2847560