冷休克蛋白(cold inducible RNA-binding protein, CIRP)是低溫誘導(dǎo)表達(dá)出的具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長周期,神經(jīng)保護(hù)等作用的蛋白。我們前期的研究觀察到亞低溫下CIRP表達(dá)增加,能夠減少H202誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。因此本次研究旨在利用原核表達(dá)系統(tǒng)大量表達(dá)CIRP并純化。外源性給予小鼠神經(jīng)細(xì)胞Nuero2a,并用H202刺激,觀察其生長周期變化,以及凋亡情況,并探索上述實(shí)驗(yàn)外源性CIRP參與神經(jīng)保護(hù)過程中的相關(guān)分子及可能信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。方法首先誘導(dǎo)表達(dá)基因克隆重組CIRP蛋白,采用陰陽離子結(jié)合柱,分子篩等手段進(jìn)行重組蛋白純化。將得到的CIRP預(yù)孵育小鼠Neuro2a田胞1h后,同對照組一起加入H202刺激24 h,應(yīng)用MTT對細(xì)胞活力、流式細(xì)胞儀對細(xì)胞周期、Western blotting從細(xì)胞蛋白水平研究CIRP對H202介導(dǎo)的細(xì)胞周期信號通路上相關(guān)因子的變化情況。結(jié)果CIRP預(yù)處理組相比對照組細(xì)胞凋亡數(shù)目明顯下降,對照組細(xì)胞周期被阻滯在S期,而CIRP組明顯緩解阻滯效果。Western blotting檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)CIRP預(yù)處理組p-Akt、p-ERK等信號通路因子表達(dá)水平相比對照組顯著增高與內(nèi)源性過表達(dá)CIRP結(jié)果一致。由此認(rèn)為外源性CIRP在細(xì)胞水平與亞低溫所起到的神經(jīng)保護(hù)功能及其分子調(diào)控方面起著相同的作用,同時(shí)為CIRP治療腦損傷的作用機(jī)理提供了一定依據(jù)。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R741
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一部分 重組蛋白CIRP的原核表達(dá)與純化
    前言
    一、實(shí)驗(yàn)材料
    二、實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
第二部分 重組冷休克蛋白對小鼠N2A、NCTC等細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究
    前言
    一、實(shí)驗(yàn)材料
    二、實(shí)驗(yàn)方法
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
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致謝

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本文編號：2846959