背景:據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,Runx1在一些因素引起的肌肉損傷和肌肉萎縮,如失神經(jīng)損傷、注射心臟毒素(cardiotoxin)以及抗肌萎縮蛋白缺失模型中有修復(fù)作用,但在饑餓或缺血再灌注狀態(tài)下誘發(fā)的肌肉萎縮和肌肉損傷中的作用仍不明確。目的:本文旨在探究Runx1在饑餓和缺血再灌注狀態(tài)下引起的骨骼肌萎縮和損傷中的作用。方法:(1)分別建立C57BL/6小鼠饑餓肌肉萎縮模型和缺血再灌注肌肉萎縮模型,從小鼠腓腸肌中提RNA,做microarray芯片找出差異表達(dá)的基因;(2)對(duì)芯片結(jié)果進(jìn)行分析找出饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)下不同調(diào)節(jié)的基因,進(jìn)行Real-time PCR驗(yàn)證;(3)利用小鼠成肌細(xì)胞C2C12細(xì)胞系構(gòu)建過(guò)表達(dá)或CRISPR/Cas9敲除細(xì)胞系,探究Runx1基因?qū)2C12細(xì)胞增殖和分化的影響;(4)提取C57BL/6小鼠脛骨前肌,從中分離得到衛(wèi)星細(xì)胞(SC)并利用低濃度馬血清(2%)體外誘導(dǎo)其分化,探究未分化和已分化的衛(wèi)星細(xì)胞中Runx1基因的表達(dá)水平;(5)查閱文獻(xiàn)并通過(guò)相關(guān)實(shí)驗(yàn),探究Runx1基因在饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)下誘導(dǎo)的骨骼肌萎縮和損傷中的作用。結(jié)果:分析饑餓和缺血再灌注的芯片結(jié)果,發(fā)現(xiàn)Runx1基因的表達(dá)在這兩種狀態(tài)下均為明顯上升。利用Real-time PCR驗(yàn)證的結(jié)果與芯片結(jié)果一致。過(guò)表達(dá)Runx1基因后,C2C12細(xì)胞分化被促進(jìn),增殖也被促進(jìn),而利用CRISPR/Cas9敲除Runx1基因后,C2C12細(xì)胞分化和增殖情況則與過(guò)表達(dá)相反。通過(guò)比較C57小鼠脛骨前肌未分化和已經(jīng)分化的衛(wèi)星細(xì)胞中Runx1基因表達(dá)量變化情況,發(fā)現(xiàn)衛(wèi)星細(xì)胞分化后Runx1的基因表達(dá)量下降。通過(guò)對(duì)microarray芯片分析以及利用Real-time PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)一些受Runx1調(diào)控的基因,并且這些基因在饑餓和缺血再灌注狀態(tài)下的表達(dá)有差異。結(jié)論:本課題的研究揭示了Runx1可能在預(yù)防骨骼肌萎縮和損傷的過(guò)程中起到補(bǔ)償修復(fù)作用,通過(guò)促進(jìn)衛(wèi)星細(xì)胞的激活,維護(hù)骨骼肌細(xì)胞增殖和分化的平衡,進(jìn)而促進(jìn)肌管的形成和再生。此外,還發(fā)現(xiàn)在饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)下引起的骨骼肌萎縮和損傷受Runx1調(diào)節(jié)的下游靶基因可能不同。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R746.4
【部分圖文】：

Real-timePCR驗(yàn)證饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)肌肉中Runx1的基因表

饑餓3天的c57小鼠體重稱量結(jié)果

免疫熒光驗(yàn)證缺血再灌注小鼠腓腸肌TUNEL染色結(jié)果
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 鄔江;孫曉娟;鐘世鎮(zhèn);徐達(dá)傳;李主一;;骨骼肌失神經(jīng)和再神經(jīng)化時(shí)肌衛(wèi)星細(xì)胞的變化[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2006年10期

本文編號(hào)：2842017