背景:據(jù)相關文獻報道,Runx1在一些因素引起的肌肉損傷和肌肉萎縮,如失神經(jīng)損傷、注射心臟毒素(cardiotoxin)以及抗肌萎縮蛋白缺失模型中有修復作用,但在饑餓或缺血再灌注狀態(tài)下誘發(fā)的肌肉萎縮和肌肉損傷中的作用仍不明確。目的:本文旨在探究Runx1在饑餓和缺血再灌注狀態(tài)下引起的骨骼肌萎縮和損傷中的作用。方法:(1)分別建立C57BL/6小鼠饑餓肌肉萎縮模型和缺血再灌注肌肉萎縮模型,從小鼠腓腸肌中提RNA,做microarray芯片找出差異表達的基因;(2)對芯片結果進行分析找出饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)下不同調(diào)節(jié)的基因,進行Real-time PCR驗證;(3)利用小鼠成肌細胞C2C12細胞系構建過表達或CRISPR/Cas9敲除細胞系,探究Runx1基因對C2C12細胞增殖和分化的影響;(4)提取C57BL/6小鼠脛骨前肌,從中分離得到衛(wèi)星細胞(SC)并利用低濃度馬血清(2%)體外誘導其分化,探究未分化和已分化的衛(wèi)星細胞中Runx1基因的表達水平;(5)查閱文獻并通過相關實驗,探究Runx1基因在饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)下誘導的骨骼肌萎縮和損傷中的作用。結果:分析饑餓和缺血再灌注的芯片結果,發(fā)現(xiàn)Runx1基因的表達在這兩種狀態(tài)下均為明顯上升。利用Real-time PCR驗證的結果與芯片結果一致。過表達Runx1基因后,C2C12細胞分化被促進,增殖也被促進,而利用CRISPR/Cas9敲除Runx1基因后,C2C12細胞分化和增殖情況則與過表達相反。通過比較C57小鼠脛骨前肌未分化和已經(jīng)分化的衛(wèi)星細胞中Runx1基因表達量變化情況,發(fā)現(xiàn)衛(wèi)星細胞分化后Runx1的基因表達量下降。通過對microarray芯片分析以及利用Real-time PCR驗證發(fā)現(xiàn)一些受Runx1調(diào)控的基因,并且這些基因在饑餓和缺血再灌注狀態(tài)下的表達有差異。結論:本課題的研究揭示了Runx1可能在預防骨骼肌萎縮和損傷的過程中起到補償修復作用,通過促進衛(wèi)星細胞的激活,維護骨骼肌細胞增殖和分化的平衡,進而促進肌管的形成和再生。此外,還發(fā)現(xiàn)在饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)下引起的骨骼肌萎縮和損傷受Runx1調(diào)節(jié)的下游靶基因可能不同。
【學位單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R746.4
【部分圖文】：

Real-timePCR驗證饑餓和缺血再灌注兩種狀態(tài)肌肉中Runx1的基因表

饑餓3天的c57小鼠體重稱量結果

免疫熒光驗證缺血再灌注小鼠腓腸肌TUNEL染色結果
【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 鄔江;孫曉娟;鐘世鎮(zhèn);徐達傳;李主一;;骨骼肌失神經(jīng)和再神經(jīng)化時肌衛(wèi)星細胞的變化[J];中國修復重建外科雜志;2006年10期

本文編號：2842017