背景:缺血性腦血管疾病是一種嚴(yán)重影響人類健康的常見病,具有致殘率、死亡率高等特點(diǎn)。腦缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制涉及腦組織多種能量代謝過程,在此過程中發(fā)生的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)可加重?fù)p傷,導(dǎo)致大量神經(jīng)元死亡。近年研究表明,The NOD-like receptor family,pyrin domain-containing 3(NLRP3)炎性小體的活化是神經(jīng)元損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。NLRP3炎性小體的活化可以促進(jìn)腦缺血再灌注損傷的炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)從而加重?fù)p傷。因此,尋找能調(diào)控NLRP3炎性小體并闡明其調(diào)控機(jī)制具有極其重要意義。目的:探究能否通過抑制GSK-3β活性抑制NLRP3炎性小體的活化來減輕腦缺血再灌注損傷,以及抑制GSK-3β活性是否通過增強(qiáng)自噬活動(dòng)對(duì)NLRP3炎性小體的活化產(chǎn)生抑制作用。方法:(1)使用Longa線栓法對(duì)SD大鼠行大腦中動(dòng)脈栓塞模型建立,觀察各實(shí)驗(yàn)組大鼠建模后神經(jīng)功能評(píng)分,并利用TTC染色法檢測(cè)大鼠的腦梗死體積。(2)運(yùn)用特異性合成的GSK-3βsiRNA于MCAO模型建立前24h行側(cè)腦室注射,運(yùn)用GSK-3β抑制劑SB216763于MCAO模型建立前6h行側(cè)腦室注射,運(yùn)用自噬抑制劑3-MA于MCAO模型建立前30分鐘行側(cè)腦室注射。(3)利用Western blot檢測(cè)GSK-3β,GSK-3β(p-Tyr216)、NRLP3炎性小體及其下游炎癥因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18、自噬相關(guān)蛋白LC3B-I、LC3B-II與p62的表達(dá)。(4)ELISA法檢測(cè)IL-β、IL-18蛋白濃度。(5)透射電鏡顯示各實(shí)驗(yàn)組神經(jīng)細(xì)胞炎癥情況及自噬體數(shù)量。結(jié)果:(1)抑制GSK-3β活性可減輕大鼠腦缺血再灌注損傷。(2)抑制GSK-3β活性后,NLRP3炎性小體活性下降,其下游炎性因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18表達(dá)減少,腦梗死體積較前明顯減小,行為學(xué)缺損較前有所改善。(3)抑制GSK-3β活性使大鼠腦缺血再灌注損傷中自噬活動(dòng)增強(qiáng)。(4)在抑制GSK-3β活性的基礎(chǔ)上下調(diào)自噬后,NLRP3炎性小體活性及下游炎性因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18表達(dá)水平升高。結(jié)果:(1)通過給大鼠側(cè)腦室注射GSK-3β干擾片段或抑制劑抑制GSK-3β的活性可以減輕大鼠腦缺血再灌注損傷。(2)GSK-3β的活性被抑制后,NLRP3炎性小體活化及其下游炎性因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18的表達(dá)明顯下降。(3)在大鼠腦缺血再灌注損傷中抑制GSK-3β的活性可增強(qiáng)自噬活動(dòng)。(4)在大鼠腦缺血再灌注損傷中抑制GSK-3β的活性是通過自噬活動(dòng)調(diào)控NLRP3炎性小體。結(jié)論:抑制GSK-3β的活性可通過增強(qiáng)自噬活動(dòng)來降低NLRP3炎性小體活化從而減輕腦缺血再灌注損傷。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R743.3
【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抑制GSK-3β的活性對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 試驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第二部分 抑制GSK-3β活性對(duì)腦缺血再灌注損傷后NLRP3 炎性小體活化及下游炎癥因子cleaved-caspase-1、IL-1β 、IL-18表達(dá)的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 試驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第三部分 抑制GSK-3β活性對(duì)于腦缺血再灌注損傷后自噬活動(dòng)的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 試驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第四部分 抑制GSK-3β活性通過自噬影響NLRP3 炎性小體激活及下游炎癥因子的釋放
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 試驗(yàn)方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
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