腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的一種原發(fā)性惡性腫瘤,占顱內(nèi)腫瘤的45%左右,占成人所有惡性腫瘤的2%。當前,手術(shù)治療仍是首選,但是手術(shù)切除不能防止膠質(zhì)瘤復發(fā),因此化療對傳統(tǒng)手術(shù)治療必不可少。然而,傳統(tǒng)的小分子抗癌藥物常常由于內(nèi)在局限性,如水溶性差,循環(huán)時間無法控制,生物分布不當和可能出現(xiàn)的嚴重副作用等,大大降低了治療效果。同時,現(xiàn)有的膠質(zhì)瘤的診斷與治療是兩個獨立的過程,不能滿足臨床醫(yī)生在診斷的同時進行治療及治療的過程中對藥物療效進行實時監(jiān)控的要求。因此,研發(fā)具有腫瘤診斷、靶向藥物輸送、實時監(jiān)測和判斷治療進展的診療一體化制劑成為一個新的研究熱點。為了適應(yīng)上述需求,本論文第一章設(shè)計和制造了具有膠質(zhì)瘤靶向藥物遞送、磁共振成像、可控性藥物釋放于一體的多功能共聚物膠束CD-P(CPTM-co-DEA)-b-P(OEGMA-co-Gd-co-ANG)(簡稱ANPs/CPT)用于膠質(zhì)瘤的體內(nèi)外研究。使用透射電鏡(TEM)、紅外光譜(FTIR)、動態(tài)光散射儀(DLS)和質(zhì)子波譜(1HMRS)等多種方法對膠束進行了表征。結(jié)果表明所制備的共聚物膠束分散性好,粒徑分布在120±13nm,CPT及Gd3+含量分別為19.2 wt%和1.804 wt%。藥物釋放實驗顯示在GSH的作用下二硫鍵發(fā)生斷裂釋放抗腫瘤藥物CPT,且釋放速度隨著GSH濃度的增大而加快,表現(xiàn)出良好的還原性藥物釋放能力。磁共振弛豫實驗顯示ANPs/CPT弛豫效率約為DOTA-Gd的3倍,表現(xiàn)出優(yōu)良地T1成像能力。本論文第二章采用Angiopep2做為膠質(zhì)瘤靶向分子修飾聚合物膠束表面,在原代培養(yǎng)腦毛細血管內(nèi)皮細胞和C6細胞攝入均較未修飾組顯著提高。BBB實驗顯示Angiopep2的修飾可以增加ANPs對BBB的穿透性并提高其在C6細胞的攝取,表現(xiàn)出體外良好的雙重靶向效果。此外,注射ANPs2 h后在腫瘤部位的分布顯著高于NPs組,再次證明Angiopep2的修飾在活體內(nèi)同樣具備良好的雙重靶向效果。第三章MR體外細胞成像測定結(jié)果顯示經(jīng)Angiopep2修飾后的載藥聚合物膠束可以更多地進入到腫瘤細胞內(nèi),具有比DOTA-Gd更強的信號和SNR、CNR。MRI活體成像證實ANPs/CPT可以很好地靶向顯示腫瘤,與DOTA-Gd和NPs比較具有更高的CNR和T/N比。實驗期間,共價鍵與膠束結(jié)合的Gd3+基本不會從膠束中釋放,故MR增強信號可以提示ANPs/CPT的分布。體內(nèi)分布實驗顯示ANPs/CPT具有很好的長循環(huán)特征和較好的腦靶向性。第四章主要考察了Angiopep2修飾的載藥聚合物膠束抗膠質(zhì)瘤效果。在CPT濃度為25μg/ml的濃度下,Angiopep2的靶向作用介導殺傷更多的腫瘤細胞。細胞球?qū)嶒烇@示ANPs/CPT具有較好的腫瘤細胞滲透性,能夠到達腫瘤球內(nèi)部,誘導腫瘤細胞調(diào)亡。體外BBB實驗證明ANPs/CPT具有良好的雙重靶向作用,腦腫瘤病理學檢查進一步證實了Angiopep2修飾后的納米膠束具有良好的抗膠質(zhì)瘤效果�？傊�,本論文成功合成了Angiopep2修飾的嵌段共聚物作為診療一體化平臺,可靶向膠質(zhì)瘤細胞運輸抗腫瘤藥物CPT的同時進行磁共振成像。在水溶液中,嵌段共聚物自主裝成穩(wěn)定的膠束,具有DEA和CPTM組成的疏水性的內(nèi)核和親水性的外殼OEGMA,OEGMA上共價連接了靶向基元Angiopep2和MRI對比劑DOTA-Gd。含二硫鍵的CPTM單體具備可控性釋放的功能,并且Angiopep2修飾的載藥膠束由于LRP受體的介導而顯示出良好的細胞毒性,DOTA-Gd縮短T1的MR特征可以用于膠質(zhì)瘤的診斷、實時監(jiān)測藥物在在腫瘤組織中的富集、在各器官中的代謝及生物分布。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2015
【中圖分類】：R739.41;R445.2
【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 多功能共聚物膠束制備及性能研究
    1.1 引言
    1.2 儀器與試劑
        1.2.1 試劑和材料
        1.2.2 儀器
    1.3 實驗方法
        1.3.1 樣品合成與表征
        1.3.2 體外藥物釋放
        1.3.3 細胞毒性試驗
        1.3.4 MR弛豫性能測試
    1.4 結(jié)果與討論
        1.4.1 樣品合成與特征
        1.4.2 膠束粒徑與形貌
        1.4.3 體外藥物釋放特性
        1.4.4 細胞毒性試驗
        1.4.5 MR弛豫性能測試
    1.5 小結(jié)
第二章 Angiopep2修飾的聚合物膠束膠質(zhì)瘤靶向效果及機制
    2.1引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 試劑和材料
        2.2.2 儀器
        2.2.3 細胞及動物
    2.3 實驗方法
        2.3.1 BCECs和星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)與鑒定
        2.3.2 LRP1檢測
        2.3.3 細胞攝入及機制實驗
        2.3.4 BBB雙級靶向效果評價實驗
        2.3.5 大鼠C6膠質(zhì)瘤模型建立
        2.3.6 Angiopep2修飾的聚合物膠束腦內(nèi)分布
        2.3.7 統(tǒng)計處理
    2.4 結(jié)果
        2.4.1BCECs與星形膠質(zhì)細胞的培養(yǎng)與鑒定
        2.4.2 LRP1檢測
        2.4.3 細胞攝入及機制實驗
        2.4.4 BBB雙級靶向效果評價
        2.4.5 大鼠C6膠質(zhì)瘤模型
        2.4.6 Angiopep2修飾的聚合物膠束腦內(nèi)分布
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第三章 多功能共聚物膠束磁共振成像研究
    3.1 引言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 試劑和材料
        3.2.2 儀器
        3.2.3 細胞與動物
    3.3 實驗方法
        3.3.1 Gd3+攝入
        3.3.2 細胞MR成像
        3.3.3 活體MR成像
        3.3.4 統(tǒng)計處理
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 Gd3+攝入
        3.4.2 細胞MR成像
        3.4.3 正常大鼠ANPs/CPT體內(nèi)分布MRI評價
        3.4.4 大鼠腦膠質(zhì)瘤的靶向MRI成像
    3.5 討論
    3.6小結(jié)
第四章 膠質(zhì)瘤靶向聚合物膠束抗膠質(zhì)瘤效果評價
    4.1 引言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 試劑和材料
        4.2.2 儀器
        4.2.3 細胞與動物
    4.3 實驗方法
        4.3.1 細胞攝取
        4.3.2 ANPs/CPT細胞內(nèi)分布
        4.3.3 細胞凋亡
        4.3.4 C6細胞球制備
        4.3.5 C6細胞球穿透試驗
        4.3.6 C6細胞球抑制試驗
        4.3.7 BBB轉(zhuǎn)運實驗
        4.3.8 BBB雙級靶向抑制實驗
        4.3.9 大鼠C6膠質(zhì)瘤治療病理評估
        4.3.10統(tǒng)計處理
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 ANPs/CPT的攝取及細胞凋亡
        4.4.2 ANPs/CPT細胞內(nèi)分布
        4.4.3 細胞凋亡
        4.4.4 C6細胞球制備
        4.4.5 細胞球滲透實驗
        4.4.6 細胞球抑制試驗
        4.4.7 BBB轉(zhuǎn)運實驗
        4.4.8 BBB雙級靶向抑制實驗
        4.4.9 大鼠C6膠質(zhì)瘤治療病理評估
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
全文總結(jié)
中英文縮寫對照
參考文獻
綜述
    參考文獻
附件
致謝


本文編號：2830862