本文關鍵詞：D-Ser~2-OXM對MPTP誘導的帕金森模型小鼠的神經保護作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是僅次于阿爾茲海默病的第二大中樞神經系統(tǒng)疾病,其主要的病理特征為中腦黑質致密部(Substantia nigra pars compacta,SNpc)多巴胺(Dopamine,DA)能神經元進行性死亡、紋狀體區(qū)DA含量顯著降低以及殘存神經元內路易氏小體沉積。一般認為PD的病因及發(fā)病機制涉及到線粒體氧化應激、免疫反應、興奮性氨基酸毒性、內質網應激、細胞凋亡與自噬等多方面。近來研究證明,PD與糖尿病(Type2 Diabetes Mellitus,T2DM)有著共同的病理生理途徑,并且胰高血糖素樣肽1(Glucagon-like protein 1,GLP-1)已被批準上市應用于T2DM的治療。基于兩病的相似性及GLP-1中樞作用,提出一個治療PD的新策略:用治療T2DM的藥物來干預PD。本實驗室前期研究表明GLP-1類似物如liraglutide、Lixisenatide、(Val8)GLP-1及受體激動劑京尼平苷均能明顯改善PD小鼠的行為異常,通過調節(jié)相關凋亡蛋白的表達保護DA能神經元。胃泌酸調節(jié)素類似物(D-Ser_2-oxyntomodulin,D-Ser_2-OXM)具有胰高血糖素受體和GLP-1受體雙重的激活特性,相比于GLP-1單受體激動藥及其類似物,D-Ser_2-OXM的改善糖代謝、減肥作用更加明顯。我們推測D-Ser_2-OXM可能通過激活腦內胰高血糖素和GLP-1雙受體通路抑制PD病理生理學變化,進而實現神經保護作用及防止DA能神經元變性。第一部分D-Ser_2-OXM對MPTP誘導的亞急性PD模型小鼠的神經保護作用目的:1.觀察D-Ser_2-OXM能否改善亞急性PD小鼠行為學障礙、減輕中腦DA能神經元損傷。2.探討d-ser2-oxm是否能降低中腦神經炎癥反應、增加突觸數量或促進軸突重建以及調節(jié)凋亡相關蛋白表達,對抗mptp誘導的da能神經元的丟失。3.探討d-ser2-oxm是否通過pi3k/akt通路發(fā)揮神經保護作用。方法:1.動物分組及模型制備:c57bl/6小鼠稱重后隨機分為4組:正常對照組(control):生理鹽水(ns,ip.)+ns(ip.);d-ser2-oxm單給藥組(oxy):ns(ip.)+oxy(ip.);mptp組(mptp):mptp(ip.)+ns(ip.);d-ser2-oxm治療組(mptp+oxy):mptp(ip.)+oxy(ip.)。四組接受ns或mptp(20mg/kg,i.p)連續(xù)7d;在注射mptp1h后用給予ns或d-ser2-oxm(ip.),連續(xù)14d。2.行為學實驗:于處死前一天,完成行為學實驗,觀測小鼠行為學的變化。3.免疫組化方法分別檢測各組小鼠中腦黑質th、gfap、iba-1、synaptophysin及紋狀體th表達情況。4.tunel染色分別檢測各組小鼠黑質區(qū)凋亡細胞數量。5.采用蛋白質印跡法(westernblotting)分別檢測各組小鼠黑質中th、α-synuclein、bax、bcl-2、tnf-α、synaptophysin、akt、p-aktser473的蛋白表達情況。結果:1.成功復制亞急性pd小鼠模型。給予mptp后,小鼠出現震顫、豎尾、呼吸急促等異常表現,約1h后上述癥狀逐漸減輕。通過自主活動、轉棒、游泳、牽引等行為學檢測小鼠的協(xié)調能力與肢體的靈活性。與對照組比較,mptp模型組小鼠的直立次數、爬格數、掉落潛伏期、牽引評分及游泳評分顯著降低。而d-ser2-oxm治療組小鼠的行為活動較mptp模型組小鼠有所改善。2.免疫組織化學檢測結果顯示:mptp模型組小鼠黑質syn、th及紋狀體th陽性表達較對照組顯著減少,與mptp模型組相比,d-ser2-oxm治療組小鼠黑質syn、th及紋狀體th陽性表達明顯增加。gfap、iba-1在中腦黑質區(qū)的表達發(fā)現:mptp損傷之后,gfap、iba-1陽性表達較對照組的顯著增多。而d-ser2-oxm治療組小鼠黑質區(qū)gfap、iba-1陽性表達較mptp組明顯減少。5.tunel染色結果顯示:各組小鼠黑質區(qū)均可見tunel陽性細胞。與對照組比較,mptp模型組tunel陽性染色率顯著性升高。而d-ser2-oxm治療組小鼠的tunel陽性染色率較模型組明顯降低。6.westernblotting方法檢測結果顯示:mptp模型組小鼠的tnf-α表達量及bax/bcl-2比值較對照組顯著增加,th、syn陽性表達及p-aktser473水平較對照組顯著降低;給予d-ser2-oxm治療后,可降低黑質區(qū)tnf-α的表達,下調bax/bcl-2比值,此外還可以增加黑質區(qū)th、syn蛋白的表達,提高akt的磷酸化。各組小鼠黑質區(qū)α-synuclein蛋白水平并無顯著改變。結論:1.d-ser2-oxm能夠改善亞急性pd模型小鼠行為學障礙,減少中腦黑質及紋狀體da能神經元的凋亡,增加其存活數量。2.d-ser2-oxm能夠抑制中腦神經炎癥反應、增加突觸數量或促進軸突重建以及調節(jié)凋亡相關蛋白表達,對抗mptp損傷引起的da能神經元的丟失。3.d-ser2-oxm可能通過激活pi3k/akt通路發(fā)揮神經保護作用。第二部分d-ser2-oxm對mptp誘導的慢性pd模型小鼠的神經保護作用目的:觀察d-ser2-oxm可否改善慢性pd模型小鼠行為學障礙及病理特征性改變。方法:1.動物分組及模型制備:c57bl/6小鼠稱重后隨機分為4組:正常對照組(control):生理鹽水(ns,ip.)+ns(ip.);d-ser2-oxm單給藥組(oxy):ns(ip.)+oxy(ip.);mptp組(mptp):mptp(ip.)+ns(ip.);d-ser2-oxm治療組(mptp+oxy):mptp(ip.)+oxy(ip.)。皮下注射mptp20mg/kg,1h后腹腔注射丙磺舒250mg/kg,一周兩次,連續(xù)5周;注射mptp1h前用給予ns或d-ser2-oxm(ip.),連續(xù)腹腔注射5周。2.最后一次MPTP注射后3天,進行轉棒及曠場實驗,行為學完成后取腦。3.免疫組織化學方法觀察黑質及紋狀體中TH陽性表達,Western Blotting分別檢測各組小鼠黑質中TH、α-synuclein表達變化。結果:1.成功復制了慢性PD小鼠模型,并觀察到D-Ser_2-OXM改善了MPTP對小鼠造成的行為學障礙。行為學檢測小鼠協(xié)調運動能力與肢體的靈活性。與對照組進行比較,MPTP模型組小鼠的直立次數、爬格數、掉落潛伏期顯著降低。而D-Ser_2-OXM治療組小鼠的行為活動較MPTP模型組小鼠有所改善。2.免疫組織化學檢測結果顯示:MPTP模型組小鼠黑質及紋狀體TH陽性表達較對照組顯著減少,與MPTP模型組相比,D-Ser_2-OXM治療組小鼠紋狀體及黑質TH陽性表達明顯增加。3.Western blotting方法檢測結果顯示:MPTP模型組小鼠黑質區(qū)TH陽性表達較對照組顯著降低,α-synuclein表達量顯著增加;給予D-Ser_2-OXM治療后,可增加TH表達量,降低α-synuclein表達量。結論:D-Ser_2-OXM能夠改善MPTP誘導的PD小鼠行為學障礙,減少中腦黑質及紋狀體DA能神經元的凋亡,抑制α-synuclein的沉積。
【關鍵詞】：帕金森病 D-Ser_2-OXM 神經保護 細胞凋亡 PI3K/Akt通路
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 常用縮寫詞中英文對照表15-17
• 前言17-19
• 第一部分 D-Ser~2-OXM對MPTP誘導的亞急性PD模型小鼠的神經保護作用19-45
• 1 材料與方法19-27
• 1.1 實驗材料19-22
• 1.2 實驗方法22-27
• 2 結果27-40
• 2.1 D-Ser~2-OXM對亞急性PD模型小鼠的行為學表現的影響27-30
• 2.2 D-Ser~2-OXM對黑質及紋狀體區(qū)TH陽性細胞的影響30-32
• 2.3 D-Ser~2-OXM對黑質區(qū)TH、α-synuclein表達的影響32-33
• 2.4 D-Ser~2-OXM對突觸數量的影響33-34
• 2.5 D-Ser~2-OXM對黑質神經炎癥的影響34-37
• 2.6 D-Ser~2-OXM對細胞凋亡及相關凋亡蛋白表達的影響37-39
• 2.7 D-Ser~2-OXM對中腦黑質內p-Akt蛋白表達的影響39-40
• 3 討論40-44
• 4 結論44-45
• 第二部分 D-Ser~2-OXM對MPTP誘導的慢性PD模型小鼠的神經保護作用45-54
• 1 材料與方法45-47
• 1.1 實驗材料45
• 1.2 實驗方法45-47
• 2 結果47-51
• 2.1 D-Ser~2-OXM對PD模型小鼠的行為學表現的影響47-48
• 2.2 D-Ser~2-OXM對慢性PD模型小鼠黑質及紋狀體區(qū)TH陽性細胞的影響48-50
• 2.3 D-Ser~2-OXM對PD模型小鼠黑質區(qū)TH、α-synuclein表達的影響50-51
• 3 討論51-53
• 4 結論53-54
• 參考文獻54-61
• 綜述61-76
• 參考文獻69-76
• 致謝76-77
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果77-78
• 個人簡歷78

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本文編號：282483