本文關(guān)鍵詞：SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞聚集的作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的:氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)與動脈粥樣硬化形成密切相關(guān)。自噬在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中有降解ox-LDL的作用。Sirtuin1(SIRT1),一種新型抗動脈粥樣硬化因子,是哺乳動物沉默信號調(diào)節(jié)因子2的同源物,對細(xì)胞的生存、代謝等生理活動起著十分重要的調(diào)節(jié)作用,可能是所有生物共同的壽命控制基因之一,并且有誘導(dǎo)自噬作用。本文研究SIRT1對HUVECs內(nèi)ox-LDL聚集的影響,并初步探討其作用是否與其促進(jìn)ox-LDL自噬性降解有關(guān)。方法:1.流式細(xì)胞儀檢測SIRT1抑制劑尼克酰胺(nicotinamide,NAM)和激動劑白藜蘆醇(resveratrol,RSV)對Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影響;利用SIRT1小干擾RNA(small interfering RNA,si RNA)轉(zhuǎn)染構(gòu)建SIRT1 si RNA內(nèi)皮細(xì)胞模型,并用流式細(xì)胞儀檢測其對Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影響。2.利用自噬相關(guān)基因Atg5小干擾RNA轉(zhuǎn)染構(gòu)建Atg5 si RNA內(nèi)皮細(xì)胞模型,流式細(xì)胞儀檢測其對白藜蘆醇抑制Dil-ox-LDL在HUVECs聚集的影響;采用蛋白免疫印跡方法檢測自噬流相關(guān)蛋白LC3、p62的蛋白含量,并用GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)在熒光顯微鏡下觀察各組LC3熒光點的數(shù)目;通過免疫熒光技術(shù)觀察HUVECs中Dil-ox-LDL與溶酶體標(biāo)志物L(fēng)amp1和Cathepsin D的共定位情況。結(jié)果:1.流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示SIRT1 si RNA和NAM增加HUVECs中Dil-ox-LDL的熒光強(qiáng)度,RSV減少HUVECs中Dil-ox-LDL的熒光強(qiáng)度。2.敲減Atg5增加HUVECs中Dil-ox-LDL的熒光強(qiáng)度;與RSV組相比,Atg5 si RNA和RSV組的HUVECs中Dil-ox-LDL熒光強(qiáng)度增加。3.免疫印跡結(jié)果顯示ox-LDL升高LC3-II和p62的蛋白表達(dá),與單獨ox-LDL組相比,SIRT1 si RNA+ox-LDL組和NAM+ox-LDL組LC3-II的蛋白表達(dá)降低,p62蛋白水平升高,RSV+ox-LDL組LC3-II的蛋白表達(dá)升高,p62蛋白水平降低。運(yùn)用GFP-LC3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SIRT1 si RNA和NAM減少LC3點狀物數(shù)目,RSV增加LC3點狀物數(shù)目。4.免疫熒光結(jié)果顯示Dil-ox-LDL與Lamp1及Cathepsin D部分共定位,與Dil-ox-LDL單獨組相比,SIRT1 si RNA和NAM減少Dil-ox-LDL和Lamp1及Cathepsin D共定位程度,RSV增加Dil-ox-LDL和Lamp1及Cathepsin D共定位程度。結(jié)論:SIRT1抑制劑及敲減SIRT1基因增加ox-LDL在HUVECs中的聚集,SIRT1激動劑則減少ox-LDL在HUVECs中的聚集,SIRT1的這種調(diào)控作用與其對自噬溶酶體途徑的調(diào)節(jié)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：SIRT1 氧化低密度脂蛋白 聚集 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 自噬溶酶體途徑
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743;R54
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-12
• 第一部分 SIRT1 對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中氧化低密度脂蛋白聚集的影響12-23
• 材料與方法12-19
• 結(jié)果19-21
• 討論21-23
• 第二部分 SIRT1 影響氧化低密度脂蛋白在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞聚集的可能機(jī)制23-35
• 材料和方法23-27
• 結(jié)果27-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-42
• 綜述42-62
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 中英文對照縮略詞匯表62-63
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文63-64
• 致謝64-65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉友斌;楊樹森;樊瑛;甘潤韜;;自噬與心肌缺血/再灌注損傷[J];中國病理生理雜志;2009年12期

  本文關(guān)鍵詞：SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白在血管內(nèi)皮細(xì)胞聚集的作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：281118