本文關(guān)鍵詞：核轉(zhuǎn)錄因子ΚB涉及抗水通道蛋白-4抗體陽(yáng)性血清對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的毒性作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)是主要累及視神經(jīng)和脊髓的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘疾病,常反復(fù)復(fù)發(fā)導(dǎo)致失明及癱瘓。迄今為止尚無(wú)有效的治療方法。探討其發(fā)病機(jī)制對(duì)尋找有效的治療藥物具有重要意義。目前認(rèn)為NMOSD患者自身抗體即抗水通道蛋白-4(aquaporin-4,AQP4)抗體和星形膠質(zhì)細(xì)胞突觸膜上的AQP4結(jié)合,通過(guò)補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性作用引起星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡和激發(fā)炎癥反應(yīng)等是其主要的發(fā)病機(jī)制。核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)在炎癥反應(yīng)的調(diào)控中發(fā)揮重要作用,其涉及許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如多發(fā)性硬化等的發(fā)病機(jī)制。最近一項(xiàng)研究表明AQP4抗體能激活體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的NFκB信號(hào)通路,但是否影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的生存和死亡尚不清楚。本研究使用抗AQP4抗體陽(yáng)性血清處理培養(yǎng)純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察NFκB在抗AQP4抗體陽(yáng)性血清誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞損害中的作用。方法:經(jīng)傳代培養(yǎng)純化新生SD大鼠大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞,免疫細(xì)胞化學(xué)熒光檢測(cè)純度達(dá)95%以上用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞隨機(jī)分為4組:(1)對(duì)照組:10%的比例加入健康人血清;(2)吡咯醛二硫氨基甲酸(Pyrrolidinedithiocarbamic acid,PDTC)組:10μmol/L PDTC預(yù)先處理細(xì)胞1 h后加入10%比例的健康人血清;(3)抗體陽(yáng)性組:10%的比例加入抗AQP4抗體陽(yáng)性NMOSD患者血清;(4)PDTC預(yù)處理組:10μmol/L PDTC預(yù)先處理細(xì)胞1 h后加入10%比例的抗AQP4抗體陽(yáng)性NMOSD患者血清。細(xì)胞培養(yǎng)12h后,采用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光法觀察各實(shí)驗(yàn)組NFκB p65入核情況,MTS試驗(yàn)檢測(cè)各組活細(xì)胞存活度,使用western blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)p65蛋白、磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)蛋白的表達(dá)。所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。多組間比較采用單因素方差分析(One-Way ANOVA),組間有顯著差異者應(yīng)用SNK(StudentNewman-Keuls test)行組間多重比較檢驗(yàn),P0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1鑒定經(jīng)傳代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度使用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光法觀察抗神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗體標(biāo)記的星形膠質(zhì)細(xì)胞,結(jié)果顯示經(jīng)傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞中95%以上是星形膠質(zhì)細(xì)胞;2抗AQP4抗體陽(yáng)性血清降低星形膠質(zhì)細(xì)胞的存活度,而PDTC預(yù)處理能減少其對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的毒性作用使用MTS試驗(yàn)觀察抗AQP4抗體陽(yáng)性血清對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的毒性作用以及PDTC預(yù)處理是否有保護(hù)效果。結(jié)果顯示,對(duì)照組、抗體陽(yáng)性組、PDTC預(yù)處理組光密度(optical density,OD)值分別為0.5411±0.017、0.3897±0.045和0.4380±0.005,各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而PDTC組(OD=0.5387±0.014)和對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);3抗AQP4抗體陽(yáng)性血清引起星形膠質(zhì)細(xì)胞NFκB p65入核為了觀察抗AQP4抗體陽(yáng)性血清是否激活星形膠質(zhì)細(xì)胞NFκB通路,使用免疫細(xì)胞化學(xué)熒光法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組NFκB p65入核情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)照組、PDTC組均未見(jiàn)p65入核,抗體陽(yáng)性血清組可見(jiàn)明顯NFκB p65入核,而PDTC預(yù)處理能抑制p65由胞漿進(jìn)入細(xì)胞核;4抗AQP4抗體陽(yáng)性血清增加NFκB p-p65表達(dá)Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組、PDTC組、抗體陽(yáng)性組、PDTC預(yù)處理組NFκB p65蛋白表達(dá)水平分別為0.8029±0.045、0.7880±0.047、0.7821±0.059、0.7093±0.044,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而相對(duì)應(yīng)的NFκB p-p65蛋白表達(dá)水平分別為0.7439±0.032、0.7279±0.020、0.8197±0.027、0.7027±0.020,其中對(duì)照組、PDTC組、PDTC預(yù)處理組p-p65蛋白表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),抗體陽(yáng)性組p-p65蛋白表達(dá)和其他三組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1抗AQP4抗體陽(yáng)性血清可通過(guò)激活NFκB途徑誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷,抑制NFκB活性對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞具有保護(hù)作用。2 NFκB信號(hào)通路的激活可能涉及NMOSD的發(fā)病機(jī)制。
【關(guān)鍵詞】：視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病 水通道蛋白-4 星形膠質(zhì)細(xì)胞 核轉(zhuǎn)錄因子κB
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R744.5
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-15
• 結(jié)果15-17
• 附圖17-20
• 討論20-22
• 結(jié)論22-23
• 參考文獻(xiàn)23-26
• 綜述 抗髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白抗體與中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘性疾病26-36
• 參考文獻(xiàn)31-36
• 致謝36-37
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷37

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本文編號(hào)：280637