【摘要】：目的:通過檢測miR-34a與MMP2在腦膠質瘤細胞株中的表達情況,探討miR-34a通過其靶基因MMP2對腦膠質瘤細胞侵襲遷移的影響。方法:采用熒光定量PCR檢測miR-34a,熒光定量PCR及western blot檢測MMP2在腦膠質瘤細胞株中的表達情況;選取U87與A172,使用miR-34a摸擬物、miR-34a抑制劑進行分組轉染,通過qRT-PCR觀察miR-34a,qRT-PCR及western blot觀察MMP2的表達水平;應用mRNA數據庫預測miR-34a結合MMP2區(qū)域,然后構建出野生型與突變型MMP2 3’UTR熒光素酶質粒以及miR-34a質粒,采用熒光素酶報告基因實驗;通過Transwell侵襲以及劃痕實驗對U87細胞侵襲遷移能力進行觀察。結果:(1)各株腦膠質瘤細胞株內MMP2蛋白含量均高表達,其中以U87、A172最明顯,MMP2的mRNA表達水平與其蛋白基本一致,但miR-34a的mRNA水平的表達相對偏低,miR-34a的mRNA表達水平與MMP2呈負相關,MMP2可能為miR-34a下游靶基因。(2)將miR-34a mimic、抑制劑轉染U87與A172細胞后,轉染mimic細胞株內MMP2的蛋白及mRNA水平均明顯降低,轉染抑制劑細胞株內MMP2的蛋白及mRNA水平均明顯升高。(3)將野生型與突變型MMP2 3’UTR區(qū)的熒光素酶質粒分別與pcDNA5-miR-34a質粒轉入U87與A172細胞后,實驗組突變型MMP2 3’UTR區(qū)熒光素酶活性與空白對照組無明顯差異,但實驗組野生型MMP2 3’UTR區(qū)熒光素酶活性較空白對照組明顯下降。(4)通過Transwell侵襲實驗與劃痕實驗檢測細胞侵襲遷移顯示,miR-34a可抑制腫瘤侵襲遷移,且可逆轉因MMP2增強的侵襲遷移能力使其下降。結論:(1)miR-34a的mRNA表達水平與MMP2的mRANA表達呈負相關,MMP2可能為miR-34a下游靶基因。(2)腦膠質瘤細胞株內miR-34a可通過結合MMP2 3’UTR區(qū)的特定序列來下調MMP2的蛋白及mRNA表達水平。(3)腦膠質瘤內miR-34a為抑癌基因,其通過下調MMP2的表達來對腦膠質瘤細胞的侵襲遷移產生抑制作用。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4
【圖文】：

采用 western blot 法檢測 MMP2 蛋白在各株腦膠質瘤細胞株內的表達情況，并以 HEB 細胞作為參照。結果顯示，MMP2 蛋白在各株腦膠質瘤細胞株內呈高表達，其中以U87及A172的MMP2蛋白表達最為顯著，見圖3.1A。通過qRT-PCR技術檢測 miR-34a 與 MMP2 mRNA 的表達水平，結果顯示 MMP2 的 mRNA 表達水平與其蛋白表達水平大致相同，對于 miR-34a 的 mRNA 則呈低表達水平，miR-34a 與 MMP2 的 mRNA 表達呈現出負相關的關系，見圖 3.1B�？梢酝茰ymiR-34a 在腦膠質瘤細胞株內的 mRNA 表達水平與 MMP2 呈負相關的關系，MMP2 可能為 miR-34a 的下游靶基因。A：各腦膠質瘤細胞株內 MMP2 蛋白的表達水平；B：各腦膠質瘤細胞株內 miR-34a 與 MMP2的 mRNA 表達水平圖 3.1：miR-34a 與 MMP2 在各種腦膠質瘤細胞株內的表達情況3.2 下調 miR-34a 對 MMP2 蛋白及 mRNA 表達的影響篩選 MMP2 表達水平相對較高的 U87 與 A172 細胞以更好地觀察 MMP2 蛋白及 mRNA 表達變化情況。分別向 U87、A172 細胞轉染 miR-34a mimic 與抑制劑，采用qRT-PCR法明確miR-34a的mRNA高表達及產生抑制作用后（圖3.2A），然后再通過 qRT-PCR 法、western blot 法提取 MMP2 蛋白及 mRNA

miR-34a通過與MMP2mRNA3’UTR結合來下調MMP2的表達

miR-34a通過調控MMP2的表達對腦膠質瘤侵襲遷移能力產生的影響……

【參考文獻】

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1 曾志青;劉洪;;巨噬細胞移動抑制因子和基質金屬蛋白酶2在膠質瘤組織中的表達及其臨床意義[J];實用心腦肺血管病雜志;2014年07期

2 陳磊峰;劉天德;杜曉紅;胡俊文;黃子曦;邵江華;;原發(fā)性肝癌細胞中Rock2調控MMP2對其侵襲遷移的作用[J];腫瘤防治研究;2014年01期

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4 王萍;馬騰;劉云會;趙麗妮;馬s

本文編號：2805640