【摘要】：目的:吉蘭-巴雷綜合征(Guillain-Barrés syndrome,GBS)是一種自身免疫性疾病,是目前世界上引起急性肢體遲緩性癱瘓的最主要原因之一,目前治療方法主要為血漿置換(plasma exchange,PE)及靜注免疫球蛋白(intravenousimmunoglobulin,IVIg),盡管接受上述治療,仍有患者預后不良或留有嚴重后遺癥,因此GBS新的治療方法的探索仍是目前神經(jīng)病學亟待解決的問題。本研究擬通過觀察銀杏內(nèi)酯在EAN中的作用及其可能機制,為未來GBS治療新方法的探索奠定一定的理論基礎。我們通過建立其動物模型,即實驗性自身免疫性神經(jīng)炎(experimental autoimmune neuritis,EAN),根據(jù)EAN的臨床評分、坐骨神經(jīng)病理及免疫學指標來評價銀杏內(nèi)酯在GBS的潛在治療作用。研究方法:(1)實驗動物及分組:選擇6-8周雄性C57BL/6小鼠,體重約18-20g,購于北京維通利華實驗動物技術有限公司,動物隨機分為對照組:EAN+PBS組(n=7),EAN+銀杏內(nèi)酯低劑量(5mg/kg/d)組(n=7),EAN+銀杏內(nèi)酯高劑量(10mg/kg/d)組(n=7)。(2)EAN模型的建立及臨床評分:百日咳毒素(pertussis toxin,PTX),溶解于PTbuffer后尾靜脈注射,將P0180-189的肽段、不完全弗氏佐劑及結核分枝桿菌菌素充分乳化,于背部皮下注射。(3)實驗動物的干預:在EAN造模第六天,按照分組,腹腔注射PBS或者銀杏內(nèi)酯注射液,高峰期同時處死三組小鼠。(4)實驗取材及觀察指標:(1)在第一次皮下注射P0后開始觀察小鼠皮毛、尾部張力、步態(tài)情況及小鼠體重變化情況,根據(jù)評分標準每天對小鼠進行臨床評分。(2)取小鼠脊坐骨神經(jīng)近脊髓段,通過HE和LFB病理染色,觀察EAN小鼠坐骨神經(jīng)炎癥及髓鞘脫失的情況;(3)分離EAN小鼠脾臟,通過流式細胞術檢測脾臟單個核細胞懸液(the mononuclear cells,MNCs)中Th1、Th2、Th17、Treg細胞在CD4~+T細胞的比例。結果:(1)臨床評分:在發(fā)病過程中,銀杏內(nèi)酯治療組小鼠臨床評分均低于對照組。在建立模型第9天,低劑量銀杏內(nèi)酯治療組臨床評分較對照組低(p0.05),第14-15天,低劑量和高劑量銀杏內(nèi)酯治療組臨床評分均比對照組低(p0.05)。(2)EAN小鼠坐骨神經(jīng)病理結果:對照組小鼠坐骨神經(jīng)炎性細胞浸潤及髓鞘缺失最嚴重,銀杏內(nèi)酯高劑量組次之,銀杏內(nèi)酯低劑量組最輕。(3)CD4+T細胞的測定:(1)銀杏內(nèi)酯低劑量組可下調(diào)MNCs中Th17細胞的比例,較對照組明顯降低(P0.05),也可下調(diào)脾臟MNCs中Th1細胞的比例(P0.05)。(2)高劑量銀杏內(nèi)酯也可下調(diào)MNCs中Th17及Th1細胞的比例,較對照組減低(P0.05)(3)銀杏內(nèi)酯低劑量組和銀杏內(nèi)酯高劑量組MNCs中Treg細胞的比例較對照組升高(P0.05)。(4)銀杏內(nèi)酯低劑量組MNCs中Th2細胞比例較對照組減低(P0.05),銀杏內(nèi)酯高劑量組MNCs中Th2細胞比例較對照組升高(P0.05)。結論:(1)低劑量銀杏內(nèi)酯可以有效治療小鼠EAN,降低臨床評分,延緩高峰期,減輕周圍神經(jīng)炎性浸潤和髓鞘脫失等周圍神經(jīng)組織損害。(2)低劑量銀杏內(nèi)酯可減輕小鼠EAN病情,可能主要通過抑制Th17細胞來發(fā)揮作用。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R745.43
【圖文】：

第 4 章 實驗結果4.1 臨床評分將 21 只小鼠隨機分為 3 組，每組 7 只，即對照組；EAN+銀杏內(nèi)酯 5mgEAN+銀杏內(nèi)酯 10mg/kg/d 組，從造模第 6 天開始按照上述實驗方案進行干用 PBS 處理的小鼠的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的高峰時間平均在第 12 天，銀杏內(nèi)酯治小鼠神經(jīng)癥狀的高峰時間平均在第 13 天(如圖 4.1 所示)。 在建立模型第 9低劑量銀杏內(nèi)酯治療組臨床評分較對照組低（p <0.05），第 14-15 天，低劑高劑量銀杏內(nèi)酯治療組臨床評分均比對照組低（p <0.05）。

圖 4.2 各組小鼠坐骨神經(jīng) HE 和 LFB 染色A、B、C 分別為 EAN 組、銀杏內(nèi)酯低劑量組、銀杏內(nèi)酯高劑量組小鼠坐骨神經(jīng) HE染色， D、E、F 分別為 EAN 組、銀杏內(nèi)酯低劑量組、銀杏內(nèi)酯高劑量組小鼠坐骨神經(jīng) LFB染色。A、B、C、 D、E、F 光學顯微鏡下觀察（100×）。4.3 高峰期小鼠脾臟單個核細胞懸液 Th1、Th2、Th17 及 Treg細胞水平通過流式細胞術來檢測各組小鼠脾臟 MNCs 中 Th1，Th2，Th17 和 Treg 細胞在 CD4 + T 中的比例。我們可以看出(如表 4.1 ，圖 4.3),銀杏內(nèi)酯可以下調(diào)脾臟 MNCs 中 Th17 細胞的比例。與對照組相比，低劑量治療組脾臟 MNCs 中 Th17細胞比例顯著降低，（p <0.05），而高劑量治療組也有減少，但無統(tǒng)計學意義

圖 4.3 小鼠 Th17 細胞在 CD4+T 細胞的比例流式圖A 為對照組，B 為銀杏內(nèi)酯低劑量組，可見對照組 Th17 細胞比例明顯高于銀杏內(nèi)酯低劑量組。表 4.1 各組小鼠 MNCs 中 Th1,Th2,Th17 和 Treg 細胞的比例（%）組別 Th1 Th17 Th2 Treg對照組 13.92±3.55 0.62(0.57,0.88) 0.91±0.50 0.28±0.14低劑量治療組 8.95±3.63▲0.33±0.15*0.57±0.34▲0.28±0.12▲高劑量治療組 12.06±4.60▲0.52±0.36▲1.02±0.79▲0.40±0.23▲注：*P<0．05 VS 對照組，▲P>0.05 VS 對照組

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 楊世龍;馬小芳;;銀杏葉中銀杏內(nèi)酯的制備與檢測研究進展[J];四川林業(yè)科技;2018年06期

2 孟祥男;張建梅;王愛明;邵梅;王東凱;;銀杏內(nèi)酯片的制備工藝研究[J];中國藥劑學雜志(網(wǎng)絡版);2019年01期

3 崔龍;胡少銀;高進;周小波;尚強;;銀杏內(nèi)酯K的制備工藝研究[J];中國醫(yī)藥導報;2019年04期

4 黃維玲;馬宇昕;劉靖;李國營;;銀杏內(nèi)酯A對中樞神經(jīng)系統(tǒng)作用及機制的研究進展[J];解剖學研究;2017年02期

5 王懷安;高晉生;;銀杏內(nèi)酯B用于治療惡性腫瘤的研究進展[J];光明中醫(yī);2017年17期

6 劉媛媛;康凱;楊威;彭相虹;楊松柳;趙鳴雁;;銀杏內(nèi)酯B對星形膠質(zhì)細胞氧化損傷的保護作用[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2016年16期

7 張小麗;韋晟;;銀杏內(nèi)酯B抑制血小板活化研究[J];全科醫(yī)學臨床與教育;2015年02期

8 劉艷茹;張國斌;于曉云;李曉曉;張博愛;;銀杏內(nèi)酯B對實驗性動脈粥樣硬化的抗氧化作用研究[J];中國藥師;2014年07期

9 姜寧玲;秦正敏;付先利;譚才宏;;銀杏內(nèi)酯B對中腦神經(jīng)細胞損傷的保護作用[J];江蘇醫(yī)藥;2014年16期

10 崔風云;刁英;楊名慧;;銀杏內(nèi)酯B抗小鼠早孕作用的實驗研究[J];中國婦幼保健;2013年23期

相關會議論文 前10條

1 聶珍貴;王文杰;;銀杏內(nèi)酯B對大鼠多形核白細胞功能的影響[A];第七屆全國生化藥理學術討論會論文摘要集[C];2000年

2 黃沛力;秦亞萍;馮高謙;張磊;;GC-MS測定家犬血漿中銀杏內(nèi)酯A、B的含量[A];2004年全國有機質(zhì)譜學術交流會論文集[C];2004年

3 王永紅;高宇;石永江;劉宏亮;王永紅;羅雪;姚忠祥;;不同濃度銀杏內(nèi)酯B對神經(jīng)干細胞的細胞形態(tài)學影響[A];中華醫(yī)學會第九次全國物理醫(yī)學與康復學學術會議論文集[C];2007年

4 馬駿;季亢挺;南金良;錢魯;陳邢玉;唐疾飛;;銀杏內(nèi)酯B對內(nèi)皮祖細胞氧化損傷的保護作用及機制研究[A];2011年浙江省心電生理與起搏學術年會論文匯編[C];2011年

5 錢魯;南金良;邢程;季亢挺;唐疾飛;;銀杏內(nèi)酯B對內(nèi)皮祖細胞的保護作用及機制研究[A];2012年浙江省心電生理與起搏學術年會論文集[C];2012年

6 朱俐;金淑儀;吳小梅;陳宏山;;銀杏內(nèi)酯對模擬高原缺氧腦損傷的防治作用及機理[A];中國藥理學會第八次全國代表大會暨全國藥理學術會議論文摘要匯編[C];2002年

7 黃建;鄒興菊;朱浩;劉之榮;;銀杏內(nèi)酯B促進少突膠質(zhì)前體細胞分化、降低凋亡并減輕炎性反應的實驗研究[A];第四屆全國癡呆與認知障礙學術研討會及高級講授班論文匯編[C];2015年

8 林宇;崔紅霞;趙學梅;孫超;;銀杏內(nèi)酯B對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用[A];第十五屆中國神經(jīng)精神藥理學學術會議論文摘要[C];2012年

9 劉永剛;李芳君;王婧;王曉東;;銀杏內(nèi)酯B對大鼠腦缺血/再灌注損傷炎癥反應的影響[A];2010年廣東省藥師周大會論文集[C];2011年

10 張碩峰;賈占紅;吳金英;石少明;;銀杏內(nèi)酯B注射液對局造性腦缺血的保護作用[A];第六次全國中西醫(yī)結合血瘀證及活血化瘀研究學術大會論文匯編[C];2005年

相關重要報紙文章 前10條

1 程書權;中藥化學成分抗內(nèi)毒素研究現(xiàn)狀[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

2 記者　 陳國東　徐水元;我國首個銀杏內(nèi)酯B單體制劑進入Ⅱ期臨床[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

3 冬青　映平;原研藥銀杏內(nèi)酯B注射液完成Ⅲ期臨床[N];中國醫(yī)藥報;2010年

4 本報記者 孟巖峰;銀杏內(nèi)酯獲批未定 康緣藥業(yè)增持踩點精準[N];21世紀經(jīng)濟報道;2012年

5 王曉東　郭仲強;以高技術搶占中藥領域制高點[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

6 本報特約撰稿 鏡陸;第四批臨床自查名單詳析[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2016年

7 史秀麗 傅佳 李光武;防治缺血性心腦血管疾病 血小板靶向中藥值得期待[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 霍效忠 周劍工;超臨界二氧化碳萃取取得成果[N];中國知識產(chǎn)權報;2001年

9 廣州市花城制藥廠;進行產(chǎn)學研合作 創(chuàng)中藥國際新品牌[N];科技日報;2008年

10 本報記者 賀橋;廣州新花城公司增資擴股[N];中國證券報;2009年

相關博士學位論文 前9條

1 黃賤英;銀杏內(nèi)酯B抗腦缺血作用及機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2005年

2 吳澤宇;銀杏內(nèi)酯B前藥設計、合成及腦靶向性研究[D];合肥工業(yè)大學;2012年

3 魏恩會;銀杏內(nèi)酯B和前胡丙素對動脈粥樣硬化的防護機制及酵母雙雜交實驗體系篩選清道夫受體胞漿域結合蛋白[D];南京醫(yī)科大學;2002年

4 梁麗U

本文編號：2803339