【摘要】：目的:通過建立慢性不可預見溫和應激和慢性疼痛應激大鼠模型,(1)觀察兩種不同應激條件下大鼠行為的改變狀況;(2)根據兩種不同應激后大鼠行為改變與前額皮質炎性因子的關系,確定炎癥反應是否為應激的中樞機制;(3)同時比較大鼠左右前額皮質炎性因子水平的改變情況,觀察心理與生理不同應激導致的炎癥改變是否存在偏側化問題;(4)觀察兩種不同應激對大鼠前額皮質小膠質細胞的形態(tài)變化,確定其是否參與心理與生理不同應激導致的炎癥反應過程;(5)同時比較大鼠左右前額皮質小膠質細胞的形態(tài)變化情況,進一步觀察是否也存在偏側化的現象。方法:將雄性Sprague-Dawley大鼠隨機分配到空白組、心理應激組、假手術組和疼痛應激組,建立慢性心理應激模型和慢性疼痛應激模型。評價(1)一般生理指標包括:大鼠每周的體重變化,痛覺閾限變化;(2)行為實驗包括糖水偏好實驗和痛敏實驗;(3)神經生物學實驗主要采用RT-PCR實驗檢測大鼠前額皮質中炎性因子水平(IL-1β、IL-6、TNF-α);(4)大鼠前額皮質中小膠質細胞形態(tài)結構變化(胞體周長、來源于胞體的分支數量、分支點、細胞分支總長度和細胞表面積)。結果:(1)慢性心理和疼痛應激都導致大鼠出現抑郁樣行為改變,心理應激組大鼠每周體重增加量都顯著低于空白組;糖水偏好實驗中心理應激組的糖水偏好顯著低于空白組,疼痛組的糖水偏好顯著低于假手術組;結果顯示兩種應激均建模成功。(2)痛敏實驗顯示,心理應激組中左足(手術)和右足(非手術)的痛覺閾限相比空白組都顯著降低,疼痛組中手術腳的痛覺閾限相比假手術組顯著降低。(3)心理和疼痛應激均導致大鼠前額皮質中炎性因子水平發(fā)生改變,心理應激組大鼠的IL-1β和TNF-α的mRNA表達顯著低于空白組,疼痛組中IL-1β和IL-6的mRNA表達顯著低于假手術組。(4)慢性心理和疼痛應激條件下,大鼠前額皮質小膠質細胞的形態(tài)結構發(fā)生變化,心理應激組的Iba-1表達水平、小膠質細胞胞體周長、細胞分支點、細胞分支總長度、來源于胞體的分支數和細胞表面積都顯著高于空白組,疼痛組的Iba-1表達水平、小膠質細胞分支點、細胞分支總長度、來源于胞體的分支數和細胞表面積都顯著高于假手術組。結論:(1)慢性應激對大鼠行為的影響具有非特異性,主要表現為出現抑郁樣行為以及痛覺閾限的降低;(2)慢性應激的中樞神經機制表現為大鼠前額皮質的炎癥反應,其中IL-1β是炎癥反應的重要調節(jié)因子;(3)大鼠前額皮質中小膠質細胞激活及細胞結構重構是慢性應激誘發(fā)相關行為障礙的重要反應;(4)慢性應激引起的前額皮質炎性反應及小膠質細胞的重構沒有偏側化現象。
【學位授予單位】：浙江理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R741
【圖文】：

圖 2.1 技術路線圖3 材料和方法3.1 動物及分組雄性 Sprague-Dawley 大鼠 104 只，體重為 280±20g。飼養(yǎng)于溫度為22±2℃、濕度為 50%～60%的恒溫恒濕環(huán)境中，通風 8-15 次/h。正式試驗前飼養(yǎng) 10 天以適應環(huán)境，適應期間每天進行抓取訓練，使其適應實驗者的操作。10天后隨機分為空白組、心理應激組、疼痛組、假手術組�？瞻捉M、疼痛組、假手術組 2 只/籠群養(yǎng)，12/12h 晝夜循環(huán)，自由進食進水。心理應激組采取孤養(yǎng)的方式，并參照 Willner 等的方法, 采用 35 天慢性不可預見性溫和應激建立大鼠慢性應激模型。疼痛組采用坐骨神經損傷模型，35 天，12/12h 晝夜循環(huán)，自由

圖 4.2 糖水偏好實驗結果圖：（M±SEM）糖水偏好=糖水攝入量/（糖水攝入量+水攝入量），*表示 p＜0.05。4.2 慢性應激和慢性疼痛對大鼠痛敏的影響在大鼠的痛敏實驗中，采用 Von Frey 法測得 50%機械性縮足閾值，通過 檢驗發(fā)現，應激開始之后，每一周空白組的左足（手術足）痛敏閾限都顯著高于心理應激組（第一周 t（22）=4.432，p<0.001；第二周 t（22）=5.138，p<0.001；第三周 t（22）=4.982，p<0.001；第四周 t（22）=3.434，p<0.001；第五周 t（22）=5.815，p<0.001）、假手術組的左足痛敏閾限都顯著高于疼痛組（第一周 t（21）=4.495，p<0.001；第二周 t（21）=4.568，p<0.001；第三周 t（21）=7.018，p<0.001；第四周 t（21）=5.151，p<0.001；第五周 t（21）=6.118，p<0.001）。

p<0.001），其他三組組內左右足之間痛敏沒有顯著性差異。表 4.3 大鼠痛敏實驗數據結果（M±SEM）別 空白組 心理應激組 假手術組 疼痛組 12 12 11 12左足 右足 左足 右足 左足 右足 左足 右足始 4.5±0.6 5.0±0.5 5.2±0.5 5.2±0.5 4.9±0.6 5.4±0.7 4.3±0.5 4.7±0.6一周 4.1±0.5 5.2±0.6 1.8±0.2***1.7±0.1***2.1±0.4 2.3±0.3 0.5±0.04###2.1±0.3+++二周 4.5±0.5 5.0±0.5 1.7±0.2***2.4±0.4***2.1±0.4 2.7±0.6 0.5±0.03###2.6±0.5+++三周 4.7±0.6 4.3±0.4 1.5±0.1***2.0±0.3***3.7±0.5 4.0±0.7 0.4±0.1###2.8±0.4+++四周 4.8±0.7 5.7±0.7 2.1±0.4***2.4±0.4***3.5±0.6 3.7±0.6 0.4±0.04###3.2±0.6+++五周 4.8±0.4 5.5±0.7 2.0±0.3***2.2±0.3***3.4±0.5 3.3±0.6 0.4±0.04###3.7±0.6+++注： ***表示與空白組同側足組相比 p<0.001， ###表示與假手術組同側足組相比 p<0.001，+++表示與疼痛組左側足組相比 p<0.001。

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