【摘要】：目的:通過(guò)建立慢性不可預(yù)見(jiàn)溫和應(yīng)激和慢性疼痛應(yīng)激大鼠模型,(1)觀察兩種不同應(yīng)激條件下大鼠行為的改變狀況;(2)根據(jù)兩種不同應(yīng)激后大鼠行為改變與前額皮質(zhì)炎性因子的關(guān)系,確定炎癥反應(yīng)是否為應(yīng)激的中樞機(jī)制;(3)同時(shí)比較大鼠左右前額皮質(zhì)炎性因子水平的改變情況,觀察心理與生理不同應(yīng)激導(dǎo)致的炎癥改變是否存在偏側(cè)化問(wèn)題;(4)觀察兩種不同應(yīng)激對(duì)大鼠前額皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)變化,確定其是否參與心理與生理不同應(yīng)激導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)過(guò)程;(5)同時(shí)比較大鼠左右前額皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)變化情況,進(jìn)一步觀察是否也存在偏側(cè)化的現(xiàn)象。方法:將雄性Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分配到空白組、心理應(yīng)激組、假手術(shù)組和疼痛應(yīng)激組,建立慢性心理應(yīng)激模型和慢性疼痛應(yīng)激模型。評(píng)價(jià)(1)一般生理指標(biāo)包括:大鼠每周的體重變化,痛覺(jué)閾限變化;(2)行為實(shí)驗(yàn)包括糖水偏好實(shí)驗(yàn)和痛敏實(shí)驗(yàn);(3)神經(jīng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)主要采用RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠前額皮質(zhì)中炎性因子水平(IL-1β、IL-6、TNF-α);(4)大鼠前額皮質(zhì)中小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化(胞體周長(zhǎng)、來(lái)源于胞體的分支數(shù)量、分支點(diǎn)、細(xì)胞分支總長(zhǎng)度和細(xì)胞表面積)。結(jié)果:(1)慢性心理和疼痛應(yīng)激都導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)抑郁樣行為改變,心理應(yīng)激組大鼠每周體重增加量都顯著低于空白組;糖水偏好實(shí)驗(yàn)中心理應(yīng)激組的糖水偏好顯著低于空白組,疼痛組的糖水偏好顯著低于假手術(shù)組;結(jié)果顯示兩種應(yīng)激均建模成功。(2)痛敏實(shí)驗(yàn)顯示,心理應(yīng)激組中左足(手術(shù))和右足(非手術(shù))的痛覺(jué)閾限相比空白組都顯著降低,疼痛組中手術(shù)腳的痛覺(jué)閾限相比假手術(shù)組顯著降低。(3)心理和疼痛應(yīng)激均導(dǎo)致大鼠前額皮質(zhì)中炎性因子水平發(fā)生改變,心理應(yīng)激組大鼠的IL-1β和TNF-α的mRNA表達(dá)顯著低于空白組,疼痛組中IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)顯著低于假手術(shù)組。(4)慢性心理和疼痛應(yīng)激條件下,大鼠前額皮質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,心理應(yīng)激組的Iba-1表達(dá)水平、小膠質(zhì)細(xì)胞胞體周長(zhǎng)、細(xì)胞分支點(diǎn)、細(xì)胞分支總長(zhǎng)度、來(lái)源于胞體的分支數(shù)和細(xì)胞表面積都顯著高于空白組,疼痛組的Iba-1表達(dá)水平、小膠質(zhì)細(xì)胞分支點(diǎn)、細(xì)胞分支總長(zhǎng)度、來(lái)源于胞體的分支數(shù)和細(xì)胞表面積都顯著高于假手術(shù)組。結(jié)論:(1)慢性應(yīng)激對(duì)大鼠行為的影響具有非特異性,主要表現(xiàn)為出現(xiàn)抑郁樣行為以及痛覺(jué)閾限的降低;(2)慢性應(yīng)激的中樞神經(jīng)機(jī)制表現(xiàn)為大鼠前額皮質(zhì)的炎癥反應(yīng),其中IL-1β是炎癥反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子;(3)大鼠前額皮質(zhì)中小膠質(zhì)細(xì)胞激活及細(xì)胞結(jié)構(gòu)重構(gòu)是慢性應(yīng)激誘發(fā)相關(guān)行為障礙的重要反應(yīng);(4)慢性應(yīng)激引起的前額皮質(zhì)炎性反應(yīng)及小膠質(zhì)細(xì)胞的重構(gòu)沒(méi)有偏側(cè)化現(xiàn)象。
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R741
【圖文】：

圖 2.1 技術(shù)路線圖3 材料和方法3.1 動(dòng)物及分組雄性 Sprague-Dawley 大鼠 104 只，體重為 280±20g。飼養(yǎng)于溫度為22±2℃、濕度為 50%～60%的恒溫恒濕環(huán)境中，通風(fēng) 8-15 次/h。正式試驗(yàn)前飼養(yǎng) 10 天以適應(yīng)環(huán)境，適應(yīng)期間每天進(jìn)行抓取訓(xùn)練，使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)者的操作。10天后隨機(jī)分為空白組、心理應(yīng)激組、疼痛組、假手術(shù)組�？瞻捉M、疼痛組、假手術(shù)組 2 只/籠群養(yǎng)，12/12h 晝夜循環(huán)，自由進(jìn)食進(jìn)水。心理應(yīng)激組采取孤養(yǎng)的方式，并參照 Willner 等的方法, 采用 35 天慢性不可預(yù)見(jiàn)性溫和應(yīng)激建立大鼠慢性應(yīng)激模型。疼痛組采用坐骨神經(jīng)損傷模型，35 天，12/12h 晝夜循環(huán)，自由

圖 4.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖：（M±SEM）糖水偏好=糖水?dāng)z入量/（糖水?dāng)z入量+水?dāng)z入量），*表示 p＜0.05。4.2 慢性應(yīng)激和慢性疼痛對(duì)大鼠痛敏的影響在大鼠的痛敏實(shí)驗(yàn)中，采用 Von Frey 法測(cè)得 50%機(jī)械性縮足閾值，通過(guò) 檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激開始之后，每一周空白組的左足（手術(shù)足）痛敏閾限都顯著高于心理應(yīng)激組（第一周 t（22）=4.432，p<0.001；第二周 t（22）=5.138，p<0.001；第三周 t（22）=4.982，p<0.001；第四周 t（22）=3.434，p<0.001；第五周 t（22）=5.815，p<0.001）、假手術(shù)組的左足痛敏閾限都顯著高于疼痛組（第一周 t（21）=4.495，p<0.001；第二周 t（21）=4.568，p<0.001；第三周 t（21）=7.018，p<0.001；第四周 t（21）=5.151，p<0.001；第五周 t（21）=6.118，p<0.001）。

p<0.001），其他三組組內(nèi)左右足之間痛敏沒(méi)有顯著性差異。表 4.3 大鼠痛敏實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果（M±SEM）別 空白組 心理應(yīng)激組 假手術(shù)組 疼痛組 12 12 11 12左足 右足 左足 右足 左足 右足 左足 右足始 4.5±0.6 5.0±0.5 5.2±0.5 5.2±0.5 4.9±0.6 5.4±0.7 4.3±0.5 4.7±0.6一周 4.1±0.5 5.2±0.6 1.8±0.2***1.7±0.1***2.1±0.4 2.3±0.3 0.5±0.04###2.1±0.3+++二周 4.5±0.5 5.0±0.5 1.7±0.2***2.4±0.4***2.1±0.4 2.7±0.6 0.5±0.03###2.6±0.5+++三周 4.7±0.6 4.3±0.4 1.5±0.1***2.0±0.3***3.7±0.5 4.0±0.7 0.4±0.1###2.8±0.4+++四周 4.8±0.7 5.7±0.7 2.1±0.4***2.4±0.4***3.5±0.6 3.7±0.6 0.4±0.04###3.2±0.6+++五周 4.8±0.4 5.5±0.7 2.0±0.3***2.2±0.3***3.4±0.5 3.3±0.6 0.4±0.04###3.7±0.6+++注： ***表示與空白組同側(cè)足組相比 p<0.001， ###表示與假手術(shù)組同側(cè)足組相比 p<0.001，+++表示與疼痛組左側(cè)足組相比 p<0.001。

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