發(fā)布時(shí)間：2020-08-18 10:14

【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)糖尿病腦病(Diabetic Encephalopathy,DE)大鼠海馬組織中及大鼠原代海馬神經(jīng)元中microRNA表達(dá)變化,探討其在DE的發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:我們利用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)選取10只大鼠為對(duì)照組,其余30只為造模組。應(yīng)用鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)大鼠模型,并淘汰未成模大鼠。在造模第22周,利用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),比較各組大鼠的逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)。逃避潛伏期延長(zhǎng),說(shuō)明DM大鼠學(xué)習(xí)能力受損,穿越平臺(tái)次數(shù)增多,說(shuō)明DM大鼠記憶能力受損。從已成模的DM大鼠中篩選DE大鼠模型,設(shè)定為DE組,其余成模大鼠為DM組。在造模第24周,對(duì)各組大鼠進(jìn)行麻醉,剝離并凍存完整大鼠海馬組織。同時(shí),取出生24小時(shí)內(nèi)的SD新生鼠,剝離出完整的海馬組織進(jìn)行原代海馬神經(jīng)元分離培養(yǎng),并應(yīng)用特異性標(biāo)志物微管相關(guān)蛋白2(Microtubule-associated protein 2,MAP-2)進(jìn)行細(xì)胞鑒定。利用不同濃度的H_2O_2、高糖、甘露醇孵育原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞建立細(xì)胞損傷模型。應(yīng)用TargetScan軟件篩選出可能與DE相關(guān)的miRNAs,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)DE大鼠模型海馬組織和原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞損傷模型中的目標(biāo)miRNAs分別進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果:6只DM大鼠發(fā)展為DE大鼠。各組逃避潛伏期均逐漸縮短,第1~2天,各組大鼠逃避潛伏期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),第3-5天,DE組與CON組和DM組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)(見(jiàn)圖2)。通過(guò)第6天空間探索實(shí)驗(yàn),CON組大鼠與DM組、DE大鼠穿越平臺(tái)路程比率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組之間穿越平臺(tái)次數(shù)有下降趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)(見(jiàn)圖3)。對(duì)培養(yǎng)第9天的原代海馬神經(jīng)元進(jìn)行MAP-2免疫熒光染色,鏡下可見(jiàn)大量海馬神經(jīng)元(見(jiàn)圖1)。應(yīng)用TargetScan軟件可篩選出10個(gè)可能與DE相關(guān)的目標(biāo)microRNA,分別為:miR-132、mi R-30、miR-138、miR-124、miR-128、miR-155、miR-182、mi R-103、miR-107、miR-15。應(yīng)用Real-time PCR對(duì)DE大鼠海馬組織和原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞損傷模型中的目標(biāo)miRNAs進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示,mi R-15、miR-132在組織和細(xì)胞中表達(dá)量較對(duì)照組均明顯下降。(見(jiàn)圖5、圖6)結(jié)論:糖尿病腦病大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力明顯下降,認(rèn)知功能明顯受損。糖尿病腦病大鼠海馬組織和細(xì)胞中miR-15b,mi R-132表達(dá)一致,均降低。mi R-15、miR-132表達(dá)的下降可能參與了糖尿病腦病發(fā)生的分子生物學(xué)過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R747.9
【圖文】：

圖 1 SD 新生鼠海馬原代神經(jīng)元的免疫熒光染色Fig.l Immunofluorescent staining of primary hippocampal neurons in neonatalSD ratsCells were stained with anti-MAP2 antibody and MAP2-positive neurons

圖 2 水迷宮前 5 天平均潛伏期Fig.2 Latency of Morris water maze test in first five days was significant difference between CON group and DE grou.05) ，significant difference between DE group and DM group( P<0.05 was no significant difference between DM group and CON grou

圖 3 穿越平臺(tái)路程比（A）和穿越平臺(tái)次數(shù)（B）Fig.3 Latency (A) and crossing platform times (B)re was significant difference in the distances across the platformN group, DM group and DE group (P<0.05). There was no

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2796095