【摘要】：目的:探究大鼠中腦內(nèi)TET2蛋白是否參與外周炎癥誘導(dǎo)中樞免疫激活的過程以及其與中腦內(nèi)IL-6等炎癥因子表達的關(guān)系。研究方法:將雄性SD大鼠隨機分為正常對照組(N組)、外周炎癥組(A組)和耗竭外周單核細(xì)胞組(B組)。N組不做任何預(yù)處理,A組一次性大劑量(5mg/kg)腹腔注射LPS誘發(fā)外周炎癥,B組鼠尾靜脈注射氯膦酸二鈉脂質(zhì)體耗竭外周單核細(xì)胞后腹腔注射等劑量LPS。分別于注射藥物后0.5小時、2小時、1天、7天殺鼠取中腦組織提取蛋白及RNA,并制作冰凍腦切片。RT-qPCR法檢測IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子的mRNA水平。免疫熒光雙染色檢測中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量及TET2蛋白表達情況。Western Blot法進行TET2蛋白表達的相對定量分析。結(jié)果:1.與正常對照組(N組)相比,一次性大劑量腹腔注射LPS誘發(fā)外周炎癥后(A組)大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量明顯增多,其形態(tài)從靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榘⒚装蜆拥募せ顮顟B(tài);中腦內(nèi)IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子的表達呈隨時間變化的明顯增高趨勢,均于1天達高峰(P0.05),后于7天下降。2.與A組相比,耗竭外周單核細(xì)胞組(B組)大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量明顯少于A組,且激活狀態(tài)明顯減輕;中腦內(nèi)IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子的表達呈相對平穩(wěn)的輕度增高趨勢,在各對應(yīng)時間點上均明顯低于A組(P0.05),且峰值明顯減低(P0.05)。3.與N組相比,A組大鼠中腦內(nèi)TET2蛋白的表達呈輕度降低趨勢,于1天時達最低點至N組的0.50±0.06倍(P0.05),于7天緩慢回升至N組水平;與N組相比,B組大鼠中腦內(nèi)TET2蛋白的表達呈明顯增高趨勢,于2小時點達最高值(約為N組的1.89±0.32倍,P0.05),后于7天緩慢回降至N組水平;B組在各時間點上TET2蛋白的表達始終明顯高于A組(P0.05)。4.通過對中腦內(nèi)TET2蛋白表達與IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表達的簡單相關(guān)性分析得,TET2蛋白的變化分別與IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA的變化呈負(fù)相關(guān)(P0.05),相關(guān)系數(shù)分別為r=-0.603,r=-0.485,r=-0.407。結(jié)論:外周炎癥可以引起大鼠中腦內(nèi)免疫激活,且外周血單核細(xì)胞的缺失可以減輕由外周炎癥誘發(fā)的腦內(nèi)炎癥狀態(tài)。大鼠中腦內(nèi)表達的TET2蛋白參與外周炎癥誘導(dǎo)中樞免疫激活的過程,并在不同的炎癥狀態(tài)下呈現(xiàn)不同的變化趨勢:外周炎癥誘導(dǎo)的腦內(nèi)低炎癥狀態(tài)存在TET2蛋白時間依存的表達增高;而外周炎癥誘導(dǎo)的腦內(nèi)高炎癥狀態(tài)存在TET2蛋白的減低。TET2蛋白與IL-6、TNF-α、IL-1β等促炎性因子的表達呈相反變化趨勢。TET2可能是負(fù)性調(diào)控腦內(nèi)炎癥狀態(tài)的重要因素之一。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R742.5
【圖文】：

3.1 大鼠中腦內(nèi) IL-6、IL-1β、TNF-α等炎癥因子的表達3.1.1 腹腔注射 LPS 可使大鼠中腦內(nèi)炎癥因子的表達明顯增高圖 1、2、3 分別為 RT-qPCR 法檢測大鼠中腦內(nèi) IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA相對表達情況。從圖中可見，A 組大鼠中腦內(nèi) IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA 的相對表達在不同時間點均明顯高于 N 組（健康對照組）（P<0.05），且呈隨時間進展的迅速且劇烈的遞增趨勢，于 1 天達高峰（P<0.05），后于 7 天呈緩慢下降趨勢。證實了腹腔注射 LPS 后，大鼠腦內(nèi)炎癥因子出現(xiàn)明顯增高過程。3.1.2 耗竭外周單核細(xì)胞可明顯降低由腹腔注射 LPS 引起的中腦內(nèi)炎癥因子表達從圖 1、2、3 分別可見，與 N 組相比，B 組大鼠中腦內(nèi) IL-6、IL-1β、TNF-α的 mRNA 的表達呈相對平穩(wěn)的輕度增高趨勢，并且在相對應(yīng)時間點上均明顯低于 A組，且峰值明顯減低（P<0.05）。

14圖 3 不同條件下大鼠中腦內(nèi) TNF-α mRNA 的相對表達3.2 大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量及形態(tài)3.2.1 腹腔注射 LPS 可使大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞明顯激活組圖 4 為大鼠中腦免疫熒光染色結(jié)果。圖（A、D、G）中的綠色熒光為大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞 IBa-1 的免疫熒光染色；其中，圖（A）為正常未注藥的大鼠中腦小膠質(zhì)細(xì)胞 IBa-1 的免疫熒光染色，圖（D）為腹腔注射 LPS 1 天的大鼠中腦小膠

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文質(zhì)細(xì)胞 IBa-1 的免疫熒光染色。從圖（A）可見正常大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量少且處于未激活狀態(tài)；從圖（D）中可見腹腔注射 LPS 1 天后大鼠中腦小膠質(zhì)細(xì)胞IBa-1 的數(shù)量明顯增多，并且形態(tài)呈雜亂無章的阿米巴樣激活狀態(tài)，證實了外周注射 LPS 引起的外周炎癥誘發(fā)了腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的明顯活化。比例尺均為 100μm。3.2.2 耗竭外周單核細(xì)胞可明顯減輕由腹腔注射 LPS 引起的中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化組圖 4 的圖（G）中綠色熒光為耗竭外周單核細(xì)胞后腹腔注射 LPS 1 天的大鼠中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞 IBa-1 的免疫熒光染色。從圖（G）可見：與圖（D）相比，B 組小膠質(zhì)細(xì)胞 IBa-1 的數(shù)量相對減少且激活狀態(tài)相對減輕；但與圖（A）相比，B 組小膠質(zhì)細(xì)胞 IBa-1 的數(shù)量仍比 N 組多。說明了耗竭外周單核細(xì)胞可明顯減輕由腹腔注射 LPS 引起的中腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞活化。比例尺均為 100μm。正常

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 畢振宇;武斌;劉陽;丁自海;楊宇超;歐陽鈞;;Wistar大鼠舌部毛細(xì)血管鑄型結(jié)構(gòu)[J];解剖學(xué)雜志;2016年05期

2 宋歌;呂月濤;狄林林;宗文納;陳伯旺;;早期腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥肺炎大鼠免疫功能的影響分析[J];中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版);2017年01期

3 葉敏;陳達柔;陳宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉鳳;唐s鉈

本文編號：2791060