【摘要】：目的:(1)觀察載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein-E knockout,ApoE KO)小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變;(2)觀察Apo E KO小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)微管相關(guān)蛋白-2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)和Tau蛋白(Tau protein)表達變化。方法:對照組(control組,C組)為10只野生型C57BL/6J小鼠,Apo E基因敲除組(Apo E-KO組)為10只Apo E基因敲除的野生型C57BL/6J小鼠,普通飼料喂養(yǎng)3個月。水合氯醛麻醉后,下腔靜脈采血,分光光度計檢測血脂變化;取兩組小鼠腦組織,HE染色觀察海馬CA3區(qū)神經(jīng)元結(jié)構(gòu)改變,尼氏染色觀察海馬CA3區(qū)神經(jīng)元尼氏體含量的變化,電鏡技術(shù)觀察海馬CA3區(qū)神經(jīng)元胞體、神經(jīng)纖維和突觸結(jié)構(gòu)改變,免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察兩組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元內(nèi)MAP-2蛋白和Tau蛋白表達變化,采用計算機圖像分析系統(tǒng)處理,檢測兩種蛋白的平均光密度(optical density,OD)值。結(jié)果:(1)血脂變化:C組小鼠血脂指標為血漿總膽固醇(4.08±0.31)mmol/L、血漿甘油三酯(1.86±0.39)mmol/L、低密度脂蛋白(1.27±0.38)mmol/L,而Apo E-KO組小鼠血脂指標為血漿總膽固醇(10.56±2.43)mmol/L、血漿甘油三酯(2.64±0.63)mmol/L、低密度脂蛋白(2.51±0.57)mmol/L。兩組血脂指標含量比較,Apo E-KO組小鼠明顯升高,差異有顯著性(P0.05,P0.01)。(2)HE染色結(jié)果:C組海馬CA3區(qū)錐體細胞層的神經(jīng)元排列緊密,胞體呈錐體形,神經(jīng)元的細胞核大而圓,著色淺;Apo E-KO組小鼠海馬CA3區(qū)錐體細胞排列稍顯紊亂。(3)尼氏染色結(jié)果:與C組比較,Apo E-KO組海馬神經(jīng)元內(nèi)胞質(zhì)中尼氏體含量明顯減少,染色變淺。(4)電鏡結(jié)果:與C組比較,Apo E-KO組海馬神經(jīng)元內(nèi)線粒體腫脹變性,嵴消失;神經(jīng)纖維髓鞘松懈;突觸小泡數(shù)量減少,突觸間隙模糊等。(5)免疫組織化學(xué)結(jié)果:MAP-2免疫陽性物質(zhì)主要位于小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)胞質(zhì)和樹突,免疫組化染色呈現(xiàn)棕黃色顆�；螯S色顆粒,C組小鼠海馬神經(jīng)元胞質(zhì)和樹突呈黃色-黃褐色顆粒,Apo E-KO組小鼠則呈淺黃色顆粒,且著色顆粒較少。磷酸化的Tau蛋白免疫陽性物質(zhì)主要沉積在小鼠海馬神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi),C組小鼠不著色或呈淺黃色,而Apo E-KO組小鼠則呈黃色-黃褐色,且著色顆粒明顯增多。(6)計算機圖像分析結(jié)果:與C組小鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元內(nèi)尼氏體含量的平均光密度值(0.864±0.027)相比,Apo E-KO組小鼠海馬CA3區(qū)錐體細胞中尼氏體含量的平均光密度值(0.213±0.076)下降,兩組比較差異有顯著性(P0.01);MAP-2蛋白含量(0.489±0.065)、磷酸化的Tau蛋白含量(0.139±0.047)比較,Apo E-KO組小鼠海馬神經(jīng)元中MAP-2蛋白含量(0.326±0.081)下降,磷酸化的Tau蛋白含量(0.472±0.037)上升,平均光密度值比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05)。結(jié)論:(1)Apo E基因敲除小鼠普通飲食3個月后血脂水平明顯升高;(2)Apo E基因敲除小鼠海馬CA3區(qū)錐體細胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,線粒體腫脹變性,胞質(zhì)內(nèi)微絲、微管紊亂;神經(jīng)纖維髓鞘結(jié)構(gòu)不完整、松懈,密度降低;突觸小泡減少,突觸間隙模糊;(3)Apo E基因敲除小鼠較普通飲食小鼠海馬神經(jīng)元MAP-2表達降低,磷酸化的Tau蛋白表達升高。該研究為進一步探究神經(jīng)退行性病變發(fā)病機制提供形態(tài)實驗依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R741
【圖文】：

圖 1 ApoE-KO 組及對照組小鼠血脂相關(guān)指標 TC、TG、LDL 檢測結(jié)果比較標水平以均值±標準（mmol/L）表示，采用 t 檢驗比較兩組間差異，*P＜0.05，** Comparision of the serum lipid indices (TC, TG and LDL) in mice from group C and E-KO.Data are expressed as means±SEM (mmol/L)，t-test were performed to to anal

圖 3 小鼠海馬 CA3 區(qū)神經(jīng)元（HE，400×）A:C 組小鼠海馬 CA3 區(qū)神經(jīng)元；B:ApoE-KO 組小鼠海馬 CA3 區(qū)神經(jīng)元Fig 3 Neurons in hippocampal CA3 region of mice（HE staining，100×）A: C group; B: ApoE-KO group

Fig2 Hippocampus of mice brain（HE staining，100×）A: C group; B: ApoE-KO groupC 組海馬 CA3 區(qū)錐體細胞層的神經(jīng)元排列緊密，胞體呈錐體形，神經(jīng)元胞核大而圓，著色淺（圖 3A）；ApoE-KO 組小鼠海馬 CA3 區(qū)錐體細胞排列稍亂（圖 3B）。

【參考文獻】

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本文編號：2790402