【摘要】：目的:探討運(yùn)動訓(xùn)練是否通過調(diào)控miR-124-CREB-BDNF-ERK信號通路促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)增殖以改善腦梗死大鼠神經(jīng)功能及其機(jī)制的研究,從而為臨床康復(fù)治療提供新靶點(diǎn)。方法:1.本實(shí)驗(yàn)共分為4章,其中第1和第2章分組:SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(S)、模型組(C)和運(yùn)動訓(xùn)練組(E);第3章分組:1.假手術(shù)組(S)、模型組(C)、模型+U0126組(CU)、運(yùn)動訓(xùn)練組(E)和運(yùn)動訓(xùn)練+U0126組(EU),2.假手術(shù)組(S)、模型組(C)、模型+k252a組(CK)、運(yùn)動訓(xùn)練組(E)和運(yùn)動訓(xùn)練+k252a組(EK);第4章分組:假手術(shù)組(S)、模型組(C)、模型+miR-124激動劑(CM)、運(yùn)動訓(xùn)練組(E)、運(yùn)動訓(xùn)練+miR-124激動劑組(EM)。每組術(shù)后第7、14和21天再隨機(jī)分為3個亞組,第1和第2章每個亞組各6只,第3和第4章每個亞組各8只。2.制備大鼠大腦中動脈阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,鑒定模型成功后,運(yùn)動訓(xùn)練組大鼠術(shù)后24h給予電動跑臺訓(xùn)練,0度平板,速度為10-20m/min,30min/次,1次/天,5次/周。其余各組大鼠不予訓(xùn)練。3.造模前30min,CU和EU組按0.5mg/kg自尾靜脈注入U0126;CK和EK組注入7μl k252a于側(cè)腦室;CM和EM組注入7μ1 miR-124激動劑于側(cè)腦室。C和E組注射同體積DMSO作為陰性對照。第2、3和4章中,大鼠處死前三天予腹腔注射5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU,50mg/kg體重),每天3次,8小時注射一次,最后一次注射24小時后處死大鼠。4.在相應(yīng)時間點(diǎn)進(jìn)行改良神經(jīng)功能缺損程度評定(mNSS)和Catwalk步態(tài)分析;免疫熒光法檢測海馬區(qū)BrdU+和BrdU+/Nestin+的表達(dá);免疫印跡法檢測海馬cyclinD1、CDK4、Rb、p16、BDNF、p-TrkB、p-erk1/2、c-fos和p-CREB蛋白水平;RT-PCR法檢測海馬miR-124、CREBmRNA和BDNFmRNA表達(dá)情況。結(jié)果:1.相比于模型組,運(yùn)動訓(xùn)練組降低mNSS評分,減少持續(xù)時間,增加大鼠左側(cè)肢體的爪印面積、最大接觸面積、最大壓強(qiáng),四肢的步長及兩后肢擺動速度(p0.05)。2.相比于模型組,運(yùn)動訓(xùn)練組增加腦梗死大鼠海馬齒狀回BrdU+和BrdU+/Nestin+陽性細(xì)胞數(shù),上調(diào)cyclinD1、CDK4和Rb,下調(diào)p16(p0.05)。3.相比于模型組,運(yùn)動訓(xùn)練組上調(diào)p-erk1/2和c-fos蛋白表達(dá),增加BrdU+/Nestin+陽性細(xì)胞數(shù)(p0.05),而應(yīng)用ERK信號通路抑制劑U0126后可抑制p-erk1/2和c-fos蛋白表達(dá)和NSCs的增殖(p0.05);相比于模型組,運(yùn)動訓(xùn)練組上調(diào)BDNF、p-TrkB和p-erk1/2蛋白表達(dá),增加BrdU+/Nestin+陽性細(xì)胞數(shù)(p0.05),而應(yīng)用BDNF-TrKB信號通路抑制劑k252a后可抑制BDNF、p-TrkB和p-erk1/2蛋白表達(dá)和NSCs的增殖(p0.05)。4.相比于模型組,運(yùn)動訓(xùn)練組下調(diào)miR-124,上調(diào)p-CREB和BDNF蛋白及CREBmRNA和BDNFmRNA的表達(dá),增加BrdU+//Nestin+陽性細(xì)胞數(shù)(p0.05),而應(yīng)用miR-124激動劑后可抑制p-CREB和BDNF蛋白及CREBmRNA和BDNFmRNA的表達(dá)和NSCs的增殖(p0.05)。結(jié)論:運(yùn)動訓(xùn)練可通過調(diào)控miR-124-CREB-BDNF-ERK信號通路促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖以改善腦梗死大鼠的神經(jīng)功能。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3
【圖文】：

神經(jīng)可塑性，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖分化［２９］。神經(jīng)營養(yǎng)因子通過酪氨酸激酶受逡逑體（ｔｙｒｏｓｉｎｅ邋ｋｉｎａｓｅ，ＴＲＫ）和神經(jīng)營養(yǎng)素受體邋ｐ７５邋（ｐ７５ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ，逡逑ｐ７５ＮＴＲ）發(fā)揮其在神經(jīng)系統(tǒng)的生物學(xué)效應(yīng)（見圖１）邋［３０］，而ＢＤＮＦ可以作為逡逑信號傳導(dǎo)通路的配體與其受體酪氨酸蛋白激酶（ＴｒｋＢ）結(jié)合［３１，３２］后可激活ＥＲＫ逡逑信號傳導(dǎo)通路以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化，提氋突觸可塑性等［３３－３６］。作為逡逑神經(jīng)生長因子受體下游的激酶，ＥＲＫ通過神經(jīng)生長因子受體介導(dǎo)的連續(xù)激活，逡逑促進(jìn)神經(jīng)再生［３７］。而由此我們推測運(yùn)動訓(xùn)練可能通過調(diào)控ＢＤＮＦ－ＴｒｋＢ信號通逡逑路進(jìn)而激活ＥＲＫ信號通路參與介導(dǎo)腦梗死大鼠內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞行為的改變從逡逑而改善大鼠的運(yùn)動功能。而若以上假說成立，那么關(guān)于運(yùn)動訓(xùn)練調(diào)控ＢＤＮＦ－ＴｒＫＢ逡逑信號通路的上游蛋白或上游信號通路

可以捕獲真實(shí)的腳印，實(shí)時足跡圖像被記錄在計算機(jī)中，ＣａｔＷａｌｋ邋ＸＴ邋９．０邋（Ｎｏｌｄｕｓ逡逑Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ邋Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司，荷蘭）軟件自動將爪印識別并分類，然后自動產(chǎn)生逡逑一系列步態(tài)參數(shù)，從而計算出步態(tài)指標(biāo)。（見圖１－２）。逡逑８．ｃ？＞ｗ＊ｘｒ．ａｉ邐■邐－邐＾邐邐邋■邐．邐．邋ｙ．邋＞逡逑＾邋．邋Ａ逡逑ｆ３ｔ邋Ｗｎ＞邋ｓ？！ｕｐ邋ｔｃｑｕｉｆｆ邋ＰｒｏｆｉＳ？邐Ｈｅｌｐ邐？逡逑Ｃｌａｓｓｓｆｉｃａｔｏｎ逡逑」ｓ？ｔ邐邐邐邐邐邐邐邐逡逑丨如邐———邐…逡逑」了％邐Ｘｒｉｔｌｉｎｕ邋［１／１０］邋ＵａｉｅｅｌＯＯＯｌ．邋ｆｔｒｔｉａｌｌｒ邐ｆｔｆｄｉｌｌｒ邋ｅｌｕｖ邋？邋Ｔｒｔｆｌｉ邋Ａｎ：邋１０邋Ｅｂ￡Ｃ７＞邋Ｃａｓｐｌｉａｅｔ，邐＊邋ＯｕＡｏｎ邋Ｘ：００：０５邋Ｔ８２逡逑ｊ邋ＴｎａｌＯＯＯＩ邋｜１／１０｜邐Ｃｏｗｆｃｒｔ邋ｆＵｎ邋１邐Ａ＞ｇ邋？ｎｅｄ邋Ｓ邋Ｓ９邋（ｓ／＞）逡逑？＊ＲｎＸ－－逡逑＾邋ｖｒｙＡ邐＾．Ａａｌｃ邋Ｑｕｔｉｆｙ邋Ｖ邐＊邋；邋，邋－ｒ邋５＊？邋－－邐＇邋－邋ｌ？Ｍｔ邋Ｔｒｍ？邋ｔｎｔｉ邋ｈｘ逡逑

線栓由ＣＣＡ插入頸內(nèi)動脈，然后緩慢放開動脈夾，慢慢將線栓送入至大腦中動逡逑脈起始部，進(jìn)線長度為１９±０．５ｍｍ，遇到少許阻力時停止進(jìn)線，固定線栓，覆蓋逡逑無菌紗布。２邋ｈ后將線栓拉出，逐層縫合（見圖１－３）。逡逑假手術(shù)組僅鈍性分離血管但不結(jié)扎，亦不插線，余處理同前。所有大鼠手逡逑術(shù)完成后置于２５°Ｃ室溫環(huán)境里蘇醒，正常飲水飲食。逡逑：＾邋％逡逑Ａ術(shù)前準(zhǔn)備邐Ｂ線栓成功插入逡逑圖１－３ＭＣＡＯ模型的制作逡逑Ｆｉｇ邋１－３邋Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｍｉｄｄｌｅ邋ｃｅｒｅｂｒａｌ邋ａｒｔｅｒｙ邋ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ邋ｍｏｄｅｌ逡逑１０逡逑

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 石海杉;吳文;徐建蘭;林廣勇;;不同頻率磁刺激對局部腦缺血再灌注大鼠海馬內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞激活、增殖的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2015年01期

2 蔡世昌;白波;張秋玲;;神經(jīng)再生與缺血性腦卒中的研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2011年12期

3 湯浩;項(xiàng)永生;郭陽;蔡穎謙;姜曉丹;陳鎮(zhèn)洲;徐如祥;;CatWalk步態(tài)分析系統(tǒng)分析大鼠大腦中動脈阻塞模型的行為學(xué)特征[J];中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志;2011年12期

4 彭濤;賈延R

本文編號：2788960