【摘要】：目的C5L2基因位于19號(hào)染色體長(zhǎng)臂,由337個(gè)氨基酸構(gòu)成,其中698CT位點(diǎn)突變引起第233位密碼子編碼的氨基酸由脯氨酸變?yōu)榱涟彼?901GT位點(diǎn)突變則引起第300位密碼子編碼的精氨酸被谷氨酰胺所置換。C5L2是一種G蛋白偶聯(lián)受體,是促�；鞍椎墓δ苁荏w,Asp-C5L2可介導(dǎo)調(diào)節(jié)葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn)及脂質(zhì)的代謝、儲(chǔ)存。另外,C5L2也曾被認(rèn)為是C5a的啞巴受體,在動(dòng)脈粥樣硬化的晚期階段,C5L2高表達(dá)與高水平的促炎細(xì)胞因子直接相關(guān)。本研究旨在探討C5L2基因的SNP位點(diǎn)C698T及G901A的多態(tài)性及其與大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死的相關(guān)性。方法本研究采集全血進(jìn)行DNA的提取、采用PCR-基因片段多態(tài)性的方法對(duì)254例大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死患者和228名對(duì)照就C698T及G901A兩個(gè)基因位點(diǎn)進(jìn)行基因型鑒定。首先于研究對(duì)象全血樣本中提取DNA樣本,然后利用PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)目的DNA的體外擴(kuò)增,并根據(jù)目的基因的堿基序列選擇恰當(dāng)?shù)腄NA限制性?xún)?nèi)切酶,通過(guò)酶切將不同基因型的目的基因切為長(zhǎng)短不同的片段,最后通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳觀察酶切片段的數(shù)量及大小,來(lái)判斷基因型。結(jié)果(1)對(duì)于C698T位點(diǎn),病例組CT基因型攜帶頻率為40(15.75%),對(duì)照組CT型基因攜帶頻率為16(7.02%),采用卡方檢驗(yàn),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.477,95%CI=1.346~4.558,P=0.003);(2)對(duì)于G901A位點(diǎn),病例組AG基因型攜帶頻率為14(5.51%),對(duì)照組AG型基因攜帶頻率為19(8.33%),采用卡方檢驗(yàn),差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=0.642,95%CI=0.314~1.311,P=0.221);(3)采用非條件logistic回歸分析,在調(diào)整體重指數(shù)、腰臀比、低密度脂蛋白、高血壓病史、糖尿病病史、吸煙史等混雜因素后,C698T位點(diǎn)在兩組間的CT基因型分布頻率差別仍具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(OR=2.520,95%CI=1.076~5.317,P=0.033);(4)交互作用分析顯示,C698T位點(diǎn)與吸煙及高血壓病均不存在交互作用(相對(duì)超危險(xiǎn)度比RERI95%CI包含0)。結(jié)論(1)C5L2基因C698T與大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死的患病相關(guān),為大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死的危險(xiǎn)因素;(2)G901A位點(diǎn)與大動(dòng)脈粥樣硬化型腦梗死的患病無(wú)關(guān)聯(lián)性;(3)C698T位點(diǎn)與吸煙及高血壓病均不存在交互作用。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R743.3
【圖文】：

研究?jī)?nèi)容與方法mm 下的 A260 值和 A280 值，然后計(jì)算 A260/A280 比值（OD 值）。DNA：OD 值在 1.7~1.9 之間，證明 DNA 純度較高，且無(wú)蛋白質(zhì)及 RNA 污染合標(biāo)準(zhǔn)的合格 DNA 提取產(chǎn)物置于-80℃冰箱中備用。 PCR 反應(yīng)體系及反應(yīng)條件查閱文獻(xiàn)及預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整，C5L2 基因 C698T 和 G901A 兩個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引條件如表 3、表 4，其過(guò)程主要包括預(yù)變性、變性、退火、延伸、再延為 25ul，包括 DNA 產(chǎn)物 1ul、上游引物 1ul、下游引物 1ul、2×PoweterMix 12.5ul，不足部分雙蒸水補(bǔ)足。

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文PCR 產(chǎn)物電泳鑒定配置 2%的瓊脂糖凝膠，方法同前。按順序依次將 PCR 產(chǎn)物加樣，加樣量為 5ul，同時(shí)選擇一個(gè)加樣孔加ul 作為參照，判斷目的基因的位置；將加樣后凝膠置于電泳池中，電泳液沒(méi)過(guò)凝膠約 1mm，100V 電泳 3紫外燈下曝光顯影。根據(jù) DNA Marker 條帶判斷 PCR 產(chǎn)物位置是否根據(jù) PCR 產(chǎn)物條帶是否清晰、單一、有無(wú)彌散及拖尾判斷 PCR 產(chǎn)物位點(diǎn)的 PCR 產(chǎn)物顯影結(jié)果如圖 2（C698T 位點(diǎn)）、圖 3（G901A 位點(diǎn)

紫外燈下曝光顯影。根據(jù) DNA Marker 條帶判斷 PCR 產(chǎn)物位置是否據(jù) PCR 產(chǎn)物條帶是否清晰、單一、有無(wú)彌散及拖尾判斷 PCR 產(chǎn)物點(diǎn)的 PCR 產(chǎn)物顯影結(jié)果如圖 2（C698T 位點(diǎn)）、圖 3（G901A 位點(diǎn)圖 2：C698T 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物電泳凝膠顯影結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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1 牛媛;王建林;;常染色體顯性遺傳病伴皮質(zhì)下梗死和白質(zhì)腦病的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)際遺傳學(xué)雜志;2017年03期

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本文編號(hào)：2785472