本文關(guān)鍵詞：LPS誘導(dǎo)大腦皮層Ast的活化及對(duì)Kir-4.1表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本實(shí)驗(yàn)通過(guò)LPS作用于體外培養(yǎng)的SD大鼠大腦皮層Ast,探索LPS對(duì)Ast活化的最佳條件;探討LPS對(duì)Ast的IL-1β分泌和Kir-4.1表達(dá)的影響及后兩者間可能存在的關(guān)系,為預(yù)防和治療癲癇提供新方法。方法:1)取24 h內(nèi)出生的SD大鼠,打開(kāi)顱骨取大腦半球皮質(zhì)區(qū),剝離腦膜和血管獲取大腦皮層,用剪刀將其剪碎,用含0.25%的胰蛋白酶進(jìn)行消化,用含10%的血清培養(yǎng)液吹打終止消化,移至離心管離心后棄上清液,用種植培養(yǎng)基將其制備成單細(xì)胞懸液。經(jīng)過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)并差速貼壁處理后,接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,用DMEM/F12培養(yǎng)基原代培養(yǎng)7~10 d。待細(xì)胞鋪滿整個(gè)瓶底,純化18 h后,在超凈臺(tái)內(nèi)經(jīng)過(guò)消化后進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)3次傳代可獲得較高純度的Ast細(xì)胞,采用免疫細(xì)胞化學(xué)法對(duì)其進(jìn)行純度檢測(cè)。2)應(yīng)用MTT法檢測(cè)LPS對(duì)Ast的活化作用:將培養(yǎng)好的細(xì)胞分成實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組用不同濃度LPS(1.25μg/ml、2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)分別處理Ast不同時(shí)間(12 h、24 h、36 h、48 h)后,采用MTT法進(jìn)行細(xì)胞活性檢測(cè);對(duì)照組為同一條件下沒(méi)有作任何處置的Ast細(xì)胞。3)應(yīng)用ELISA法檢測(cè)中LPS誘導(dǎo)Ast的IL-1b分泌情況。實(shí)驗(yàn)組用LPS(5μg/ml)處理Ast不同時(shí)間(12 h、24 h、36 h、48 h)后,采用ELISA法進(jìn)行細(xì)胞分泌情況檢測(cè);對(duì)照組為同一條件下沒(méi)有作任何處置的Ast細(xì)胞。4)應(yīng)用RT-PCR技術(shù),檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中Kir-4.1、IL-1bmRNA的表達(dá)情況。結(jié)果:1)GFAP免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定結(jié)果顯示,GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞較多,純度可達(dá)到95.50%,由此說(shuō)明培養(yǎng)的細(xì)胞可以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。2)LPS對(duì)Ast的活化作用:通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的Ast活化,并且呈濃度和時(shí)間依賴性。3)ELISA法檢測(cè)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比較,LPS(5μg/ml)處理Ast不同時(shí)間(12h、24h、36h)后,細(xì)胞培養(yǎng)上清中的il-1b水平顯著升高。(p0.05)4)經(jīng)半定量rt-pcr檢測(cè)結(jié)果顯示:隨著lps處理時(shí)間的延長(zhǎng),kir-4.1mrna的表達(dá)逐漸下降、而il-1bmrna的表達(dá)則逐漸上升。結(jié)論:1)使用原代分離培養(yǎng)、純化傳代的方法可獲得較高純度的ast。2)lps可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的ast活化,且當(dāng)lps濃度為5μg/ml,處理時(shí)間為36h時(shí)ast呈現(xiàn)最佳激活狀態(tài)。3)lps誘導(dǎo)活化的ast中,kir4.1mrna表達(dá)的變化可能受il-1b的調(diào)節(jié)。
【關(guān)鍵詞】：星形膠質(zhì)細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 白介素1 beta 內(nèi)向整流鉀離子通道4.1
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R742.1
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-25
• 討論25-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-34
• 附錄A 主要英文縮略詞表34-35
• 附錄B 常用試劑配制35-37
• 附錄C 致謝37-38
• 附錄D 綜述 脂多糖導(dǎo)致癇性發(fā)作及其機(jī)制的研究進(jìn)展38-46
• 參考文獻(xiàn)44-46

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 項(xiàng)紅兵,田玉科;星形膠質(zhì)細(xì)胞與疼痛敏化調(diào)控[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2003年09期

2 劉慧,王小軍,胡榮,楊忠,蔡文琴;星形膠質(zhì)細(xì)胞[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2004年01期

3 張敬軍;;星形膠質(zhì)細(xì)胞的研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2006年07期

4 陳彬;劉寬;王偉;;成年大鼠神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子表達(dá)的差異研究[J];卒中與神經(jīng)疾病;2007年05期

5 沈維高;何欣;王振江;;星形膠質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)功能及其與疾病的關(guān)系研究進(jìn)展[J];北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2008年06期

6 ;英國(guó)科學(xué)家確定星形膠質(zhì)細(xì)胞新功能[J];中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥;2010年27期

7 靳哲;趙忠新;;星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇發(fā)病中的作用研究[J];世界臨床藥物;2012年01期

8 李軍杰,張致身;短暫性腦缺血發(fā)作后海馬區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年04期

9 解旭東,田國(guó)紅;星形膠質(zhì)細(xì)胞與癲癇[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;1999年01期

10 莫永炎,姜勇,陳瑗;腦星形膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2002年01期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉慶瑩;趙珠峰;朱長(zhǎng)庚;;星形膠質(zhì)細(xì)胞在癲癇復(fù)發(fā)中的作用[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

2 唐愛(ài)輝;王同飛;王世強(qiáng);;星形膠質(zhì)細(xì)胞鈣活動(dòng):腦細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)中的第二興奮系統(tǒng)?[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

3 池美珠;陳超;錢(qián)燕;李劍敏;吳步猛;;產(chǎn)前重復(fù)激素治療對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)育的影響[A];浙江省圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

4 魏爾清;;半胱氨酰白三烯受體對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第九次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨全國(guó)藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

5 吳建云;王鮮忠;王劍;諶劍波;范光麗;張家驊;;大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

6 趙玉武;程曉娟;;星形膠質(zhì)細(xì)胞與腦水腫的形成[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)神經(jīng)免疫大會(huì)2013論文匯編[C];2013年

7 董其平;柴真;;谷氨酸對(duì)培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的鈣活動(dòng)的影響[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國(guó)生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

8 曾俊;李康生;;柯薩奇病毒感染星形膠質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞因子變化研究[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2010年

9 鮑歡;徐曉云;顧曉波;徐霞紅;胡暉;;缺氧后水通道蛋白4在體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 熊加祥;白云;宋敏;王艷艷;楊曉亞;;星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)免疫分子維持大腦免疫穩(wěn)態(tài)[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 記者 胡德榮;星形膠質(zhì)細(xì)胞由“天使”變“魔鬼”原因找到[N];健康報(bào);2012年

2 記者 劉海英;星形膠質(zhì)細(xì)胞可調(diào)節(jié)呼吸強(qiáng)度[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

3 劉霞;腦內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)室培育成功[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

4 汪敏華;大腦星形膠質(zhì)細(xì)胞有兩種新功能[N];解放日?qǐng)?bào);2003年

5 吳一福;黃芪可調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞“時(shí)間模式”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

6 南方日?qǐng)?bào)記者 曹斯　實(shí)習(xí)生 趙莞 張寧 通訊員 鄒瑩 張淼;用ATP對(duì)抗不快樂(lè)[N];南方日?qǐng)?bào);2013年

7 記者 班瑋;德國(guó)腦細(xì)胞再生研究取得新進(jìn)展[N];人民日?qǐng)?bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 曾招;離子通道TRPM7調(diào)節(jié)細(xì)胞生理的分子機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

2 黃維一;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌因子對(duì)缺血性腦卒中后星形膠質(zhì)細(xì)胞活性及功能的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 楊俊華;星形膠質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的ATP促進(jìn)丘腦中的突觸刪除[D];浙江大學(xué);2015年

4 鄧雅婷;龍膽苦苷鎮(zhèn)痛與抗抑郁的中樞作用及機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 李新;星形膠質(zhì)細(xì)胞NDRG2在七氟烷預(yù)處理神經(jīng)保護(hù)作用中的機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 高蓓;視上核星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)急性腹腔高滲刺激引起的神經(jīng)元反應(yīng)的調(diào)節(jié)及其機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

7 李學(xué)忠;星形膠質(zhì)細(xì)胞在脂多糖誘導(dǎo)的多巴胺神經(jīng)元損傷中的作用[D];蘇州大學(xué);2008年

8 曹旭;1，5-二咖啡酰奎寧酸預(yù)處理對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞腦缺血模型的保護(hù)作用及機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

9 黃曉佳;5-脂氧酶和半胱氨酰白三烯受體在大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞缺氧缺糖損傷中的作用[D];浙江大學(xué);2007年

10 王萍;星形膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2006年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 龔佩佩;磷酸化MSK1在星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥活化過(guò)程中的作用的研究[D];南通大學(xué);2013年

2 何潔玉;糖皮質(zhì)激素對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GnRH的調(diào)控機(jī)制[D];西南大學(xué);2015年

3 張麗麗;脂肪基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)程中線粒體凋亡與自噬的關(guān)系[D];河北聯(lián)合大學(xué);2014年

4 燕茹;高同型半胱氨酸血癥致ApoE~(-/-)小鼠腦血管、星形膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元損傷作用研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2015年

5 米鵬霞;P物質(zhì)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化作用及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊志奇;小鼠皮層內(nèi)移植膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)及功能重建研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 陳雅南;敲除星形膠質(zhì)細(xì)胞的dicer對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響[D];杭州師范大學(xué);2015年

8 馬輝;星形膠質(zhì)細(xì)胞上酸敏感離子通道1a在顳葉癲癇發(fā)生中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 周亞蘭;IFN-γ介導(dǎo)T細(xì)胞參與炎性痛慢性化機(jī)制的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 鄧子輝;瘦素抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞縫隙連接蛋白-43表達(dá)改善腦缺血再灌注損傷的機(jī)制研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：LPS誘導(dǎo)大腦皮層Ast的活化及對(duì)Kir-4.1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：278113