發(fā)布時間：2020-07-28 09:26

【摘要】：目的缺血性腦卒中是人類主要死亡原因之一,同時它也是致使成年人肢體殘障的重要因素。在此,我們以氧糖剝奪/復氧復糖(Oxygenglucose deprivation/Reoxygen,OGD/R)為模型探討長鏈非編碼RNA(LncRNA)Snhg12在腦缺氧缺糖損傷中的作用以及信號傳導機制。方法以原代神經(jīng)元細胞為實驗對象。使用PCR檢測Snhg12在各不同處理的原代神經(jīng)元中的表達。應用原位雜交實驗檢測Snhg12在原代神經(jīng)元內(nèi)的定位。神經(jīng)元細胞毒性損傷程度以及存活率使用MTT比色分析實驗、乳酸脫氫酶(LDH)活力測定實驗、Western blot檢測Bcl-2/Bax來分析。Western blot檢測下游靶基因Akt的表達改變。結(jié)果OGD/R處理對原代神經(jīng)元造成細胞毒性作用:LDH釋放增加死亡率上升、存活率下降,且損傷隨著缺氧缺糖和復氧復糖時間的增加而加重。其中以缺氧缺糖12h和復氧復糖24h對原代神經(jīng)元細胞產(chǎn)生的細胞毒性損傷最為顯著。Snhg12在OGD12h/R24h處理后表達水平達到最高。Snhg12在原代神經(jīng)元的細胞核與細胞質(zhì)中均大量廣泛表達。Snhg12敲減后的原代神經(jīng)元在OGD/R處理后,細胞毒性損傷增加:LDH釋放增加死亡率上升、存活率下降、Bcl-2水平下降、Bax水平升高、Bcl-2/Bax比值下降。Snhg12敲減組原代神經(jīng)元細胞在OGD/R處理后,Akt總水平不變、p-Akt減少、p-Akt/Akt比值下降。結(jié)論OGD/R處理導致原代神經(jīng)元細胞毒性損傷,Snhg12在細胞遭受OGD/R損傷后顯著升高產(chǎn)生保護作用,且Snhg12通過調(diào)節(jié)Akt磷酸化從而介導OGD/R誘導的原代神經(jīng)元毒性損傷的保護。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R743
【圖文】：

13圖 1. 原代神經(jīng)元細胞接種后不同時間光鏡下的形態(tài)改變Figure 1. Changes of primary neuron under optical microscope-OGD 組接種后 2h。b.Non-OGD 組接種后 4h。c.Non-OGD 組接種后 1 天。d.No后 3 天。e. Non-OGD 組接種后 7 天。f. OGD12h/R24h 組接種后 7 天。 不同缺氧缺糖和復氧復糖時間誘導原代神經(jīng)元產(chǎn)生細胞毒性損傷了驗證 OGD/R 處理對原代神經(jīng)元產(chǎn)生細胞毒性損傷的影響。我們控與缺氧缺糖時間中的一項不變，改變另一項，運用 MTT 比色分析實驗和測定實驗檢測 OGD/R 對原代神經(jīng)元產(chǎn)生的細胞毒性損傷。BLANK 組性對照組，Non-OGD 組為未經(jīng) OGD/R 處理的對照組。氧缺糖時間分別為 2h、4h、8h、12h，復氧復糖時間為 24h。LDH 活顯示各組死亡率為 0.85 0.16%（Non-OGD）、35.97 3.11%（OGD2h/R

15圖 2. 不同缺氧缺糖和復氧復糖時間誘導原代神經(jīng)元產(chǎn)生細胞毒性損傷Figure 2. Different time of OGD/R induces neuronal damagea. 控制缺氧缺糖時間分別為 2h、4h、8h、12h，復氧復糖時間為 24h，檢測各組 LDH 釋放程度，即細胞死亡率（**p<0.01）。b. 控制缺氧缺糖時間分別為 2h、4h、8h、12h，復氧復糖時間為 24h，MTT 比色分析實驗檢測各組神經(jīng)元存活率（**p<0.01）c. 控制復氧復糖時間分別為 6h、12h、24h，缺氧缺糖時間為 12h，檢測各組 LDH 釋放程度，即細胞死亡率（**p<0.01）d. 控制復氧復糖時間分別為 6h、12h、24h，缺氧缺糖時間為 12h，MTT 比色分析實驗檢測各組神經(jīng)元存活率（**p < 0.01）。1.4 討論在臨床上，腦卒中是圍術(shù)期非常嚴重的并發(fā)癥，發(fā)病率在0.05%-7%，也是患者在圍術(shù)期死亡的重要原因之一。在心臟以及腦部手術(shù)中，腦卒中的發(fā)生的主要機制是灌注不足、栓塞和血液稀釋[11-13]。在非心臟及腦部手術(shù)中，機制主要有：

圖 3. pGMLV-SC5 RNAi 慢病毒載體Figure 3. Lentiviral vector針對本課題需要的目標基因靶基因序列，設(shè)計 3 個 shRNA 靶點（表 8）表 8. 針對目標基因靶基因序列設(shè)計 3 個 shRNA 靶點Table 8. Target sequencesNO. TargetSeq1 GCCTTGTACTTCTACCCAACG2 GGACAACGATACAGCAGAAGG3 GCCTGGCCTACATTGAGAAAC設(shè)計合成 shRNA 寡聚單鏈 DNA，Oligo 序列見表 9。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁君銘;曾寬;鄒堂斌;;S1P通路在膽鹽所致HL-7702細胞毒性損傷中的作用[J];中國醫(yī)學創(chuàng)新;2015年20期

2 王曉虹;孫長凱;王蘇平;范明;丁愛石;吳燕;馬輝;王祿;;谷胱甘肽抗谷氨酸誘導海馬神經(jīng)元損傷鈣超載機制研究[J];中國現(xiàn)代應用藥學;2006年01期

3 袁傳順;陳吉慶;陸超;徐莉;陳新躍;杜娟;張子前;;不同模式光療對高膽紅素血癥新生兒的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2009年08期

4 張子理;扶正補血膏和扶正補血沖劑臨床療效對比觀察[J];蘭州醫(yī)學院學報;1995年02期

5 李保森;孫穎;;藥物性肝損傷的研究現(xiàn)狀及存在問題[J];傳染病信息;2013年05期

6 彭雙清,鄒玉寶,劉洪英,宮澤輝;刺尾魚毒素細胞毒性損傷特征與細胞信號傳導[J];中國藥理學與毒理學雜志;2003年04期

7 王驍;劉泉波;;抗結(jié)核藥物性肝損害機制的研究進展[J];兒科藥學雜志;2019年12期

8 任光民,趙鳴武,唐朝樞;香煙煙霧提取物對兔氣道平滑肌細胞毒性損傷及對一氧化氮生成的影響[J];徐州醫(yī)學院學報;1998年03期

9 張飛飛;陳玉英;王占祥;;腦出血干預相關(guān)因子研究進展[J];福建醫(yī)科大學學報;2011年02期

10 馬驕;俞丹;毛萌;童煜;;神經(jīng)絲氨酸蛋白酶抑制劑對新生大鼠神經(jīng)元損傷的保護作用[J];實用兒科臨床雜志;2010年24期

相關(guān)會議論文 前2條

1 王桂斌;劉運海;;依達拉奉對缺血缺氧酸中毒誘導的細胞毒性損傷分子機制研究[A];中華醫(yī)學會第十七次全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編（下）[C];2014年

2 阮鋒凱;張永興;何承勇;;黑磷量子點誘導氧化應激和細胞周期阻滯介導肺細胞毒性損傷[A];2019全國呼吸毒理與衛(wèi)生毒理學術(shù)研討會論文集[C];2019年

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 方琪;凝血酶對實驗鼠腦細胞毒性損傷機制的研究[D];蘇州大學;2002年

相關(guān)碩士學位論文 前5條

1 程燕詠;Snhg12在腦缺氧缺糖損傷中的作用及機制研究[D];上海交通大學;2018年

2 鄧皓月;白藜蘆醇通過誘導自噬改善Aβ_(25-35)引起的神經(jīng)細胞損傷的作用及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

3 甘燕青;�；撬釋�(nèi)毒素性心肌損傷的保護作用及機制初步研究[D];南華大學;2014年

4 唐莎;自噬在氟致人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞毒性損傷中的作用研究[D];華中科技大學;2017年

5 王姍姍;苦馬豆素致BRL-3A細胞毒性損傷及“棘防E號”和Fe~(2+)保護效應研究[D];西北農(nóng)林科技大學;2014年

本文編號：2772688