發(fā)布時(shí)間：2020-07-26 15:33

【摘要】：目的:在我國(guó),腦卒中的發(fā)病率和死亡率均明顯高于心血管疾病,其中約70%為缺血性腦卒中(Ischemic stroke,IS)�，F(xiàn)有研究顯示遺傳因素在IS發(fā)病中起重要作用,提出IS是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的復(fù)雜性疾病。近年來,國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)分析、全基因組掃描等方法已經(jīng)報(bào)告了一些與IS有關(guān)的新的易感基因,但針對(duì)這些候選基因在不同地區(qū)、針對(duì)不同種族的關(guān)聯(lián)性研究尚未得到有效的重復(fù)和肯定。動(dòng)脈粥樣硬化的形成是IS的重要病理基礎(chǔ),而炎癥反應(yīng)可損傷動(dòng)脈內(nèi)膜、參與粥樣斑塊的形成和破裂過程,促進(jìn)動(dòng)脈管腔內(nèi)血栓的形成。炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化的過程中起著關(guān)鍵作用。因此,本研究著眼于中國(guó)北方漢族人群,選擇了炎癥相關(guān)的FCGR2A基因和參與動(dòng)脈粥樣硬化形成的TBXAS1基因作為候選基因,采用病例-對(duì)照研究的方法,比較FCGR2A基因的多態(tài)性位點(diǎn)(rs6427595、rs6696854、rs7512140)及TBXAS1基因的多態(tài)性位點(diǎn)(rs2267682、rs6962291、rs10487667)的基因型、等位基因及單倍型在IS組和對(duì)照組中的頻率分布差異,從而探討FCGR2A基因和TBXAS1基因多態(tài)性與中國(guó)北方漢族人群IS之間的關(guān)聯(lián),以期為尋找IS相關(guān)的易感基因提供一定的分子遺傳學(xué)方面的證據(jù)。研究方法:病例組選自2010年10月-2011年3月就診于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科、遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的中國(guó)北方漢族IS患者,均無親緣關(guān)系,納入研究370例,其中男220例,女150例,年齡47-81歲,依據(jù)TOAST分型標(biāo)準(zhǔn)分為2個(gè)亞組:大動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死組(Large-artery atherosclerosis,LAA)和小動(dòng)脈閉塞性腦梗死組(Small-artery occlusion,SAO);對(duì)照組來自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院體檢中心,共計(jì)340例,其中男性193例,女性147例,年齡、性別與病例組相匹配,均為漢族,彼此無親緣關(guān)系。選取FCGR2A基因rs6427595、rs6696854、rs7512140及TBXAS1基因rs2267682、rs6962291、rs10487667位點(diǎn)為候選SNP,應(yīng)用多重單堿基延伸SNP分型技術(shù)(Multiplex SNaPshot)檢測(cè)上述位點(diǎn)多態(tài)性,以期明確這兩個(gè)基因與中國(guó)北方漢族人群缺血性卒中的關(guān)聯(lián)。通過?~2擬合優(yōu)度檢驗(yàn)驗(yàn)證每個(gè)位點(diǎn)SNP的基因型在抽樣群體中的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。應(yīng)用?~2 Fisher’s精確概率法檢驗(yàn)各SNP位點(diǎn)的基因型、等位基因在IS組與對(duì)照組中的頻率分布差異及風(fēng)險(xiǎn)度,采用條件Logistic回歸方法排除傳統(tǒng)混雜因素的干擾,P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。應(yīng)用SHEsis在線軟件完成上述基因的連鎖不平衡和單倍型分析。結(jié)果:1、本研究所選取SNP位點(diǎn)的基因型在抽樣群體中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P0.05),說明該樣本具備人群代表性。2、FCGR2A基因(rs6427595、rs7512140、rs6696854)位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布在IS組與對(duì)照組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.。3、IS各亞組與對(duì)照組相比較,FCGR2A基因(rs6427595、rs7512140、rs6696854)的多態(tài)性頻率分布亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、單倍型分析顯示對(duì)照組AGC和AGT單倍型頻率明顯高于IS組,攜帶AGC和AGT單倍型的個(gè)體發(fā)生IS的風(fēng)險(xiǎn)分別降低0.337和0.349倍(OR=0.337,95%CI:0.185-0.616,P0.001;OR=0.349,95%CI:0.155-0.785,P=0.007)。在男性IS組與男性對(duì)照組構(gòu)建的4個(gè)單倍體,男性IS組AAC單倍型分布頻率明顯高于對(duì)照組,攜帶AAC單倍型的男性個(gè)體罹患IS的風(fēng)險(xiǎn)率增加至1.452倍(OR=1.452,95%CI:1.030-2.049,P=0.032)。在女性IS組與女性對(duì)照組構(gòu)建出4個(gè)單倍型,在女性IS組中GAC單倍型的分布頻率明顯高于對(duì)照組(OR=3.899,95%CI:1.112-13.669,P=0.022),AGC單倍型在女性IS組中的分布頻率明顯低于對(duì)照組(OR=0.172,95%CI:0.060-0.498,P0.001)。AGC單倍型在LAA組的分布頻率明顯低于對(duì)照組(OR=0.241,95%CI:0.095-0.611,P=0.001),在SAO組的分布頻率也明顯低于對(duì)照組(OR=0.422,95%CI:0.208-0.852,P=0.013)。5、IS組TBXAS1基因rs2267682位點(diǎn)的TT基因型和T等位基因的頻率明顯高于對(duì)照組(P=0.026,P=0.021)。攜帶TT基因型的個(gè)體發(fā)生IS的危險(xiǎn)是GG+GT基因型的1.8倍(OR=1.800,95%CI:1.162-2.786,P=0.008),校正各種混雜因素后發(fā)病的相對(duì)危險(xiǎn)度為1.943(OR=1.943,95%CI:1.134-3.329,P=0.016)。6、不同IS亞型的TBXAS1基因rs2267682位點(diǎn)基因型與等位基因的頻率分布:在LAA組中rs2267682位點(diǎn)TT基因型和T等位基因明顯高于對(duì)照組(P=0.004,P=0.015)。攜帶TT基因型的個(gè)體發(fā)生LAA的危險(xiǎn)是GG+GT基因型的2.157倍(OR=2.157,95%CI:1.299-3.582,P=0.003),校正各種混雜因素后發(fā)病危險(xiǎn)度為2.199倍(OR=2.199,95%CI:1.158-4.177,P=0.016)。rs2267682位點(diǎn)基因型與等位基因的頻率分布在SAO組和對(duì)照組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.269,P=0.154)。7、IS組與對(duì)照組比較,TBXAS1基因(rs6962291、rs10487667)位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。8、TBXAS1基因單倍型在IS組與對(duì)照組中頻率分布:由rs2267682、rs6962291、rs10487667組建單倍型,在IS組與對(duì)照組共構(gòu)建出7個(gè)單倍型,TAT單倍型在IS組中的分布頻率明顯高于對(duì)照組,攜帶TAT單倍型的個(gè)體罹患IS的風(fēng)險(xiǎn)增加至1.737倍(OR=1.737,95%CI:1.128-2.675,P=0.011)。結(jié)論:1、在中國(guó)人群中,FCGR2A基因rs6427595、rs6696854、rs7512140位點(diǎn)的多態(tài)性與該地區(qū)IS的發(fā)病無相關(guān)性。2、FCGR2A基因AGC單倍型、AGT單倍型可能是IS的保護(hù)性單倍型,攜帶上述單倍型可能降低中國(guó)北方漢族人群罹患IS的風(fēng)險(xiǎn)。3、FCGR2A基因AAC單倍型可能使中國(guó)北方漢族男性罹患IS的風(fēng)險(xiǎn)增加。4、FCGR2A基因GAC單倍型可能增加中國(guó)北方漢族女性罹患IS的風(fēng)險(xiǎn)。5、TBXAS1基因rs2267682位點(diǎn)TT基因型和T等位基因可能增加中國(guó)北方漢族人群罹患IS的風(fēng)險(xiǎn),尤其是大動(dòng)脈粥樣硬化腦梗死的風(fēng)險(xiǎn)。6、TBXAS1基因rs6962291、rs10487667位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)人群IS發(fā)病無相關(guān)性。7、TBXAS1基因TAT單倍型可能是預(yù)測(cè)中國(guó)北方漢族人群IS發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)單體型。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R743.3
【圖文】：

中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文表 2.1 FCGR2A 基因 SNP 位點(diǎn)SNPs Locus Chr. Position Allelers6427595 5’上游區(qū)域 Chr1(q23) G/Ars6696854 5’上游區(qū)域 Chr1(q23) C/Trs7512140 5’上游區(qū)域 Chr1(q23) G/A2.4 多重單堿基延伸 SNP 分型技術(shù)檢測(cè) FCGR2A 基因各位點(diǎn)的多態(tài)性2.4.1 確定 SNP 和 Multiplex SNaPshot 技術(shù)rs6427595、rs6696854 和 rs7512140 的詳細(xì)序列信息見圖 2.1-2.3。這三個(gè)位點(diǎn)均位于 FCGR2A 的 5’上游區(qū)域，為了更準(zhǔn)確的進(jìn)行基因分型，我們選擇了準(zhǔn)確度僅亞于直接測(cè)序的多重單堿基延伸 SNP 分型技術(shù)（Multiplex SNaPshot）進(jìn)行目的基因多態(tài)性的檢測(cè)。

2.4 多重單堿基延伸 SNP 分型技術(shù)檢測(cè) FCGR2A 基因各位點(diǎn)的多態(tài)性2.4.1 確定 SNP 和 Multiplex SNaPshot 技術(shù)rs6427595、rs6696854 和 rs7512140 的詳細(xì)序列信息見圖 2.1-2.3。這三個(gè)位點(diǎn)均位于 FCGR2A 的 5’上游區(qū)域，為了更準(zhǔn)確的進(jìn)行基因分型，我們選擇了準(zhǔn)確度僅亞于直接測(cè)序的多重單堿基延伸 SNP 分型技術(shù)（Multiplex SNaPshot）進(jìn)行目的基因多態(tài)性的檢測(cè)。圖 2.1 rs6427595 的二等位基因

僅亞于直接測(cè)序的多重單堿基延伸 SNP 分型技術(shù)（Multiplex SNaPshot）進(jìn)行目的基因多態(tài)性的檢測(cè)。圖 2.1 rs6427595 的二等位基因圖 2.2 rs6696854 的二等位基因

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2770946