【摘要】：研究背景:近年來(lái),我國(guó)心腦血管疾病的發(fā)病率逐漸上升,腦出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)等重大疾病嚴(yán)重威脅著人民的生命健康。臨床應(yīng)對(duì)腦出血的治療方案以內(nèi)科保守治療和外科手術(shù)為主,但仍有較高的死亡率和殘疾率。因此,預(yù)防仍是降低該病危險(xiǎn)性的關(guān)鍵。腦出血是指非外傷性腦部血管破裂出血造成的腦組織損傷,其發(fā)病原因以高血壓、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化、遺傳因素為主。基因多態(tài)性是遺傳因素影響疾病的主要表現(xiàn)形式,因此,研究關(guān)鍵基因多態(tài)性與疾病之間的關(guān)系及其機(jī)制對(duì)疾病的及早預(yù)防具有重要意義。有研究表明,膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CholesterylEsterTransfer Protein,CETP)基因參與心血管、脂代謝類(lèi)疾病的發(fā)生,因此其多態(tài)性可能與腦出血易感性相關(guān)。目前研究對(duì)于CETP基因多態(tài)性與腦出血相關(guān)性的研究尚不多見(jiàn),關(guān)于不同基因型影響疾病的機(jī)制也未有明確結(jié)論。因此,探討CETP多態(tài)性與腦出血易感性是否相關(guān)以及其可能存在的疾病影響機(jī)制,對(duì)于腦出血的及早預(yù)防和治療具有積極的臨床意義。第一部分CETP基因型檢測(cè)及與腦出血相關(guān)性分析研究目的:初步探討CETP基因TaqIB(rs708272),I405V(rs5882),D442G(rs2303790),R451Q(rs1800777)和A373P(rs5880)5個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與腦出血發(fā)病的相關(guān)性。研究方法:1.收集236例腦出血患者為病例組,284例健康體檢者為對(duì)照組,統(tǒng)計(jì)兩組的一般資料并比較,包括性別、年齡、家族史、受教育程度、吸煙、飲酒以及過(guò)往合并疾病,并根據(jù)病例組患者入院時(shí)的病情判斷oICH(originalICH score)腦出血臨床等級(jí),分為輕度、中度和重度三類(lèi);2.測(cè)量?jī)山M研究對(duì)象的血壓、血糖等指標(biāo),檢測(cè)血脂指標(biāo)總膽固醇(Total Cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),并根據(jù)血壓、血糖和血脂情況判斷研究對(duì)象是否合并有高血壓、糖尿病和高血脂;3.分別檢測(cè)兩組研究對(duì)象的CETP TaqIB、I405V、D442G、R451Q、A373P位點(diǎn)的基因型,檢驗(yàn)兩組基因型分布是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡,而后比較兩組間基因型和基因頻率分布的差異,并比較不同臨床等級(jí)腦出血患者之間的基因型分布差異,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;4.合并一般資料和基因型等進(jìn)行多因素Logistic回歸,以分析腦出血易感的獨(dú)立危險(xiǎn)因素以及腦出血臨床等級(jí)的獨(dú)立影響因素;5.采用haploview進(jìn)行各位點(diǎn)之間的連鎖不平衡反應(yīng)和單倍體基因型分析。研究結(jié)果:1.病例組和對(duì)照組在一般資料中家族史、吸煙、高血壓、高血脂因素上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);病例組中不同臨床等級(jí)患者間高血脂因素有差異(P0.05);2.兩組各基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。病例組和對(duì)照組TaqIB位點(diǎn)B1B1、B1B2、B2B2基因型分布頻率分別為84(35.6%)、113(47.9%)、39(16.5%)和88(31.0%)、144(50.7%)、52(18.7%),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=1.270,P=0.530);I405V位點(diǎn)II、IV、VV基因型分布頻率分別為56(23.7%)、138(58.5%)、42(17.8%)和94(33.1%)、152(53.5%)、38(13.4%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=6.124,P=0.047);D442G位點(diǎn)DD、DG、GG位點(diǎn)基因型分布頻率分別為218(92.4%)、18(7.6%)、0(0%)和272(95.8%)、12(4.2%)、0(0%),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=2.744,P=0.098)。兩組研究對(duì)象在R451Q和A373P位點(diǎn)的基因型均分別為RR和AA,未發(fā)現(xiàn)突變型個(gè)體;3.病例組不同腦出血病情等級(jí)間I405V位點(diǎn)基因型和基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ~2=16.109,P=0.003),其余位點(diǎn)分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);4.Logistic回歸結(jié)果顯示,高血壓、高血脂、吸煙及I405V位點(diǎn)攜帶V等位基因是腦出血發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR1,P0.05);高血脂、405V基因型、442G基因型可能是腦出血不同臨床病情等級(jí)的影響因素;5.連鎖不平衡分析表明,TaqIB和I405V位點(diǎn)之間存在弱連鎖不平衡反應(yīng),I405V和D442G之間存在中度連鎖不平衡(D'0.5),單倍型分布頻率由高到底依次為B1-I-D(34.8%)、B2-V-D(22.1%)、BI-V-D(21.5%)、B2-I-D(19.6%)、B1-I-G(2%),其中B1-V、I-D、V-D、B1-V-D型在病例組和對(duì)照組間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。研究結(jié)論:1.高血壓、高血脂、吸煙及CETP基因I405V多態(tài)性位點(diǎn)可能是腦出血發(fā)病的獨(dú)立影響因素,高血脂及CETP I405V是腦出血發(fā)病嚴(yán)重程度的影響因素,D442G對(duì)腦出血的發(fā)生和發(fā)展可能也有一定影響。2.CETP基因TaqIB、I405V和D442G位點(diǎn)之間存在不同程度的連鎖不平衡反應(yīng)。第二部分CETP基因多態(tài)性與腦出血相關(guān)性的生物學(xué)機(jī)制研究研究目的:分析CETP各多態(tài)性位點(diǎn)與血脂代謝指標(biāo)之間的關(guān)系,并結(jié)合生物信息學(xué)分析各SNP位點(diǎn)影響腦出血的可能機(jī)制。研究方法:1、采用ELISA檢測(cè)兩組研究對(duì)象的血漿CETP濃度,而后分析各基因型對(duì)應(yīng)的血漿CETP水平差異;比較各基因型對(duì)應(yīng)的血脂指標(biāo)TC、TG、LDL-C、HDL-C水平的差異;2、采用相關(guān)性系數(shù)分析基因型、CETP濃度和各血脂指標(biāo)之間的相關(guān)性。3、對(duì)CETP基因及其多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,包括NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)基本信息查詢、ProtParam基本理化性質(zhì)分析、PSORT亞細(xì)胞定位、KEGGPathway信號(hào)通路分析、3D Ligand受體分析等了解CETP基本性質(zhì)和功能,而后利用Phyre、RCSB PDB數(shù)據(jù)庫(kù)、Smart結(jié)構(gòu)域分析等了解CETP基本結(jié)構(gòu)特點(diǎn),并利用Quark構(gòu)建CETP多態(tài)性位點(diǎn)的局部結(jié)構(gòu)模型,并比較不同基因型對(duì)應(yīng)蛋白的結(jié)構(gòu)差異。研究結(jié)果:1.病例組和對(duì)照組對(duì)應(yīng)血漿CETP水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2.23±1.58ug/ml vs 2.30±1.30ug/ml,P0.05);病例組和對(duì)照組內(nèi)各基因型間對(duì)應(yīng)CETP水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);2.各基因型對(duì)應(yīng)血脂指標(biāo)比較結(jié)果顯示,病例組內(nèi)I405V位點(diǎn)不同基因型對(duì)應(yīng)TC和LDL-C水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余各位點(diǎn)對(duì)應(yīng)血脂指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.相關(guān)性分析顯示,TaqIB位點(diǎn)與血漿CETP水平有相關(guān)性(r=0.105,P=0.0160.05);血漿CETP水平與LDL-C呈正相關(guān)性(r=0.091,P=0.0390.05);I405V位點(diǎn)基因型與TC及LDL-C呈相關(guān)性,攜帶V基因型的TC及LDL-C高于I基因型攜帶者;D442G與各血脂指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性(P0.05)。4.生物信息學(xué)結(jié)果顯示:CETP親脂疏水,結(jié)構(gòu)穩(wěn)定,主要定位于細(xì)胞外,參與膽固醇代謝信號(hào)通路,主要功能為促進(jìn)不同密度脂蛋白之間的轉(zhuǎn)化。CETP主要由兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成,I405V及D442G位點(diǎn)位于其中的N端結(jié)構(gòu)域中,且位于CETP與糖脂代謝產(chǎn)物的結(jié)合位點(diǎn)附近。I405V突變前后局部結(jié)構(gòu)發(fā)生了變化,D442G突變前后結(jié)構(gòu)未發(fā)生顯著變化。研究結(jié)論:1.CETP基因TaqIB位點(diǎn)多態(tài)性可能影響CETP的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),但I(xiàn)405V及D442G位點(diǎn)不影響其表達(dá)水平。2.I405V多態(tài)性位點(diǎn)對(duì)血脂TC和LDL-C水平的影響可能是其與腦出血產(chǎn)生相關(guān)性的原因。3.I405V位點(diǎn)可能通過(guò)影響CETP的局部結(jié)構(gòu)而改變了CETP與受體結(jié)合的活性,通過(guò)影響CETP在脂代謝中的功能發(fā)揮來(lái)改變血脂水平,從而影響了相關(guān)疾病如腦出血的發(fā)生發(fā)展。全文結(jié)論本文整體研究結(jié)論如下:CETP基因型的I405V位點(diǎn)與腦出血的發(fā)生和發(fā)展有一定相關(guān)性,其機(jī)制可能是不同基因型對(duì)應(yīng)的局部結(jié)構(gòu)差異導(dǎo)致的CETP與脂代謝產(chǎn)物結(jié)合活性改變,影響血脂指標(biāo)TC和LDL-C的水平,從而影響血管相關(guān)疾病腦出血的發(fā)生和發(fā)展。D442G與腦出血之間也存在一定相關(guān)性,其機(jī)制可能與D422G與I405V位點(diǎn)之間的連鎖不平衡反應(yīng)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R743.34
【圖文】：

輕度腦出血患者CT表現(xiàn)

中度腦出血患者CT表現(xiàn)

圖 3.3 重度腦出血患者 CT 表現(xiàn)3.2 標(biāo)本采集采集兩組研究對(duì)象的清晨空腹靜脈血 10ml，5ml 送檢驗(yàn)科進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)，另 5ml 抗凝保存于-20°C 冰箱中，用于批量基因分型檢測(cè)。3.3 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)檢測(cè)指標(biāo)包括血壓、血糖、脂蛋白等。血壓：血壓采用歐姆龍電子血壓計(jì)測(cè)量，測(cè)量時(shí)間為患者入院時(shí)和入院一周后，取平均值。明確患者入院前有高血壓病史，當(dāng)兩次測(cè)量血壓收縮壓超過(guò)140mm Hg，舒張壓均超過(guò) 90mm Hg，補(bǔ)充為高血壓患者。血糖、總膽固醇（Total Cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2765409