【摘要】：背景及目的腦梗死是最常見的卒中類型,目前有效治療的手段有限。研究顯示,哺乳動物大腦室管膜下區(qū)(subventricular zone,SVZ)的神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs),在生理條件下處于相對靜止?fàn)顟B(tài),其在腦梗死后被激活,增殖并遷移至腦梗死區(qū)周圍,可分化為成熟神經(jīng)元以修復(fù)受損腦組織,提示SVZ神經(jīng)發(fā)生可能是治療腦梗死的重要靶點。我們前期研究證實,SVZ內(nèi)表達(dá)膽堿乙�；D(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的神經(jīng)元可調(diào)控腦梗死后SVZ神經(jīng)發(fā)生。ChAT~+神經(jīng)元主要通過乙酰膽堿受體(acetylcholine receptors,AChRs)發(fā)揮作用,但其促進(jìn)NSCs增殖的具體機(jī)制尚不明確。Src是表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)的上游信號,EGFR通路是NSCs增殖的經(jīng)典信號通路之一。本研究通過應(yīng)用多奈哌齊(膽堿酯酶抑制劑)上調(diào)小鼠腦內(nèi)膽堿能水平,應(yīng)用KX-01(Src特異性阻斷劑)阻斷Src信號通路,旨在探討AChRs信號通路與Src及EGFR信號通路的關(guān)系,并分析腦梗死后Src在多奈哌齊促進(jìn)SVZ內(nèi)神經(jīng)發(fā)生過程中的作用。實驗方法將成年雄性昆明小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)+溶劑組、腦梗死+溶劑組、腦梗死+多奈哌齊組和腦梗死+多奈哌齊+KX-01組。用線栓法建立小鼠大腦中動脈閉塞模型。模型成功24h后,灌胃給予同等體積的多奈哌齊(5mg/kg)、KX-01(1mg/kg)和生理鹽水,每天一次,連續(xù)七天。用改良神經(jīng)功能評分(modified Neurological Severity Scores,mNSS)評價tMCAO小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)情況,分值越大表明改良的神經(jīng)功能恢復(fù)情況越差。采用Ki67標(biāo)記增殖細(xì)胞,雙腎上腺皮質(zhì)激素(Double Cortin,DCX)標(biāo)記神經(jīng)母細(xì)胞,通過免疫熒光法觀察各組小鼠SVZ內(nèi)Ki67~+/DCX~+細(xì)胞的表達(dá)情況。應(yīng)用Western blot方法測量各組小鼠SVZ中Ki67、p-EGFR、p-Raf、Src和p-Akt蛋白表達(dá)量的變化。先后使用重復(fù)測量和多因素方差分析各組間mNSS評分情況,單因素方差分析各組間免疫熒光各組新生神經(jīng)母細(xì)胞數(shù)量及Western blot各蛋白表達(dá)量,組間比較采用LSD檢驗。P0.05認(rèn)為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.腦梗死+多奈哌齊+KX-01組小鼠mNSS分值顯著高于腦梗死+多奈哌齊組小鼠。2.免疫熒光結(jié)果顯示,腦梗死+溶劑組小鼠SVZ內(nèi)Ki67~+/DCX~+細(xì)胞數(shù)較假手術(shù)+溶劑組明顯增多,腦梗死+多奈哌齊組Ki67~+/DCX~+細(xì)胞數(shù)較腦梗死+溶劑組和腦梗死+多奈哌齊+KX-01組顯著增多。3.Western blot結(jié)果顯示,腦梗死+溶劑組小鼠SVZ中Ki67、p-EGFR、p-Raf、Src和p-Akt表達(dá)量較假手術(shù)+溶劑組明顯升高。腦梗死+多奈哌齊組上述蛋白表達(dá)量較腦梗死+溶劑組和腦梗死+多奈哌齊+KX-01組顯著升高。結(jié)論1.膽堿能信號增強(qiáng)可促進(jìn)腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)。2.膽堿能信號增強(qiáng)能夠促進(jìn)腦梗死后SVZ神經(jīng)發(fā)生。3.多奈哌齊通過Src信號上調(diào)EGFR從而調(diào)控神經(jīng)發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743.3
【圖文】：

圖 1 梗死組小鼠神經(jīng)功能缺損評分表 1 各組小鼠 mNSS 評分差異（分, x±s）腦梗死+溶劑組(n=6)腦梗死+多奈哌齊組(n=6)腦梗死+多奈哌齊+KX-01 組(n=6)F 值/卡13.83±1.47 13.83±2.04 14.50±1.98 1.09012.50±2.07 9.33±2.50 12.00±2.83 2.810 10.17±1.94a6.33±2.58 10.33±3.08a4.631 9.00±2.00a4.83±2.32 9.00±3.29a5.165 1 改良神經(jīng)功能評分法評價各腦梗死組小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)情況。在術(shù)后 1 天，腦梗鼠行為學(xué)評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義；隨后腦梗死+多奈哌齊組小鼠術(shù)后神經(jīng)功能恢復(fù)明另外兩組，與腦梗死+多奈哌齊組比較（aP<0.05）。腦梗死+溶劑組和腦梗死+多奈KX-01 組小鼠 mNSS 評分整體下降情況無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。表 1 運用單因素方，各組在每個時間差異。

17天后，各組小鼠 SVZ 中 Ki67+/DCX＋細(xì)胞數(shù)（免疫熒光，，免疫熒光結(jié)果顯示，各組小鼠 SVZ 新生神經(jīng)母細(xì)胞數(shù)Z 新生神經(jīng)母細(xì)胞數(shù)量定量分析，腦梗死+溶劑組 Ki67+顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（aP<0.05）；腦梗死+多數(shù)較腦梗死+多奈哌齊組明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（DCX＋細(xì)胞數(shù)較假手術(shù)+溶劑組明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)假手術(shù)+溶劑組；MCAO+Vehicle，腦梗死+溶劑組；M+D-01，腦梗死+多奈哌齊+KX-01 組。

p-EGFR,p-Raf,Src 和 p-Akt 表達(dá)量c，p-EGFR，p-Raf 和 p-Akt 蛋白光密度比較( x±+溶劑組=6)腦梗死+多奈哌齊組(n=6)腦梗死+多奈哌齊+KX-01 組(n=6)0.12ab1.39±0.23 0.84±0.26a0.15ab1.42±0.19 0.94±0.26a0.10ab0.88±0.13 0.73±0.15a0.12ab1.14±0.19 0.71±0.18a0.11ab1.04±0.19 0.81±0.19at 結(jié)果顯示，各組小鼠 SVZ 中 Ki67,p-EGFR,p-Raf,，各組小鼠 SVZ 中 Ki67,p-EGFR,p-Raf,Src 和 p Ki67 蛋白表達(dá)量差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）與假手術(shù)＋溶劑組比較，bP=0.000。各組小鼠 SVZ

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本文編號：2764486