本文關(guān)鍵詞：Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-125a-5p與Foxp3及miR-548k與CXCL13相互作用的研究與重癥肌無力發(fā)病的關(guān)系，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分Jurkat細(xì)胞體外培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及其總RNA提取、測定目的Jurkat細(xì)胞(CD4+T細(xì)胞)體外培養(yǎng)并以miR-125a-5p 和 miR-548k的模擬物和抑制物分別轉(zhuǎn)染jurkat細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA并測其濃度、純度,為后期實(shí)驗(yàn)做好充分準(zhǔn)備。方法Jurkat細(xì)胞接種于RPMI-1640培養(yǎng)基中,于含5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞以106/mL的濃度接種于6孔板中,分別轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照模擬物、miR-125a-5p(或miR-548k)的模擬物、陰性對(duì)照抑制物及miR-125a-5p(或miR-548k)的抑制物。TRIzol法分提取細(xì)胞總RNA。結(jié)果Jurkat細(xì)胞在培養(yǎng)基中抱團(tuán)懸浮生長,且生長旺盛,2～3天即傳代,傳至4～5代后,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后,細(xì)胞生長狀態(tài)好、生長旺盛。提取的總RNA濃度控制在300～500 ng/ul泛圍內(nèi)；總RNA的A260/A280比值一般在1.8～2.0范圍內(nèi)。結(jié)論1、Jurkat細(xì)胞適合用于本實(shí)驗(yàn)的后續(xù)研究。2、本研究所提的總RNA濃度適宜,質(zhì)量好,有利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。第二部分Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-125a-5p 與 Foxp3相互作用的研究及與重癥肌無力發(fā)病的關(guān)系目的本研究利用熒光定量PCR和蛋白免疫印跡法(Western Blotting)檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中miR-125a-5p、Foxp3 mRNA及蛋白的表達(dá)量,證明miR-125a-5p對(duì)其靶基因Foxp3的調(diào)控關(guān)系。方法熒光定量PCR法檢測miR-125a-5p及Foxp3 mRNA的相對(duì)表達(dá)。蛋白免疫印跡法測Foxp3蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。結(jié)果1.MiRNA熒光定量PCR結(jié)果顯示,相比模擬物陰性對(duì)照組,miR-125a-5p模擬物組的miRNA表達(dá)顯著上調(diào),相比抑制物陰性對(duì)照組,miR-125a-5p抑制物組的1miRN A表達(dá)顯著下降。2.MRNA熒光定量PCR結(jié)果顯示,相比模擬物陰性對(duì)照組,miR-125a-5p模擬物組的mRNA表達(dá)明顯下降,相比抑制物陰性對(duì)照組,IniR-125a-5p抑制物組的mRNA表達(dá)明顯升高。3.Western blotting結(jié)果顯示,相比模擬物陰性對(duì)照組,miR-125a-5p模擬物組的Foxp3蛋白表達(dá)減少,相比抑制物陰性對(duì)照組,miR-125a-5p抑制物組的Foxp3蛋白表達(dá)增加。結(jié)論1、MiR-125a-5p參與調(diào)節(jié)jurkat細(xì)胞內(nèi)Foxp3的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)。2、Jurkat細(xì)胞內(nèi)1miR-125a-5p通過轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制調(diào)控靶基因Foxp3 mRNA表達(dá)降低,從而降低Foxp3蛋白表達(dá)。第三部分Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-548k與CXCL13相互作用的研究及與重癥肌無力發(fā)病的關(guān)系目的本研究利用熒光定量PCR和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測細(xì)胞中miR-548k. CXCL13mRNA及細(xì)胞培養(yǎng)液中CXCL13蛋白的表達(dá),證明miR-548k對(duì)其靶基因CXCL13的調(diào)控關(guān)系。方法熒光定量PCR法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中niR-548k 及 CXCL13 mRNA的相對(duì)表達(dá)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法,測細(xì)胞培養(yǎng)液中CXCL 13蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果1.MiRNA熒光定量PCR結(jié)果顯示,miR-548k模擬物組的miRNA表達(dá)比模擬物陰性對(duì)照組顯著上調(diào),miR-548k抑制物組的miRNA表達(dá)比抑制物陰性對(duì)照組顯著下降。2.MRNA熒光定量PCR結(jié)果顯示,與模擬物陰性對(duì)照組比,miR-548k模擬物組的mRNA表達(dá)明顯下降,與抑制物陰性對(duì)照組比,miR-548k抑制物組的mRNA表達(dá)明顯升高。3.ELISA結(jié)果顯示,miR-548k模擬物組的CXCL13表達(dá)較模擬物陰性對(duì)照組減少,miR-548k抑制物組的CXCL13表達(dá)較抑制物陰性對(duì)照組增加。結(jié)論1、miR-548k參與調(diào)節(jié)jurkat細(xì)胞內(nèi)CXCL13的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)。2、Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-548k通過轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制調(diào)控靶基因CXCL13 mRNA,使其表達(dá)降低,從而降低CXCL13蛋白表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：重癥肌無力 Jurkat細(xì)胞 miR-125a-5p-Foxp3 miR-548k CXCL13
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R746.1
【目錄】：

• 個(gè)人簡歷3-6
• 中英文縮寫對(duì)照表6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-16
• 第一部分 Jurkat細(xì)胞體外培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及其總RNA提取、測定16-30
• 1. 研究目的16
• 2. 材料與方法16-23
• 3. 結(jié)果23-27
• 4. 討論27-29
• 5. 結(jié)論29-30
• 第二部分 Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-125a-5p與Foxp3相互作用的研究及與重癥肌無力發(fā)病的關(guān)系30-46
• 1.研究目的30
• 2.材料與方法30-39
• 3.結(jié)果39-42
• 4.討論42-45
• 5.結(jié)論45-46
• 第三部分 Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-548k與CXCL13相互作用的研究及與重癥肌無力發(fā)病的關(guān)系46-58
• 1.研究目的46
• 2.材料與方法46-52
• 3.結(jié)果52-54
• 4.討論54-57
• 5.結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 綜述63-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 致謝71-73
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄73

【參考文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 杜偉偉;重癥肌無力伴胸腺瘤患者胸腺內(nèi)microRNA-125a-5p對(duì)FOXP3基因表達(dá)調(diào)控的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：Jurkat細(xì)胞內(nèi)miR-125a-5p與Foxp3及miR-548k與CXCL13相互作用的研究與重癥肌無力發(fā)病的關(guān)系，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：276215