【摘要】：第一章長鏈非編碼RNA在急性缺血性腦卒中的表達(dá)譜及其臨床價(jià)值研究目的:長鏈非編碼RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)在缺血性腦卒中(ischemic stroke,IS)的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,本研究旨在探討急性IS患者的外周血單個(gè)有核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中l(wèi)ncRNAs的表達(dá)特征及其作為IS診斷標(biāo)志物的臨床價(jià)值。方法:本研究納入四個(gè)獨(dú)立隊(duì)列,包括206例急性缺血性腦卒中、179例健康志愿者和55例短暫性腦缺血發(fā)作(transient ischemic attack,TIA)。lncRNA微陣列芯片篩選PBMCs中差異表達(dá)的lncRNAs,并通過qRT-PCR進(jìn)行后續(xù)的樣本驗(yàn)證,利用logistic回歸構(gòu)建了lncRNAs的聯(lián)合診斷指數(shù)combination index。結(jié)果:1.lncRNA微陣列芯片分析顯示在缺血性腦卒中患者中有70個(gè)上調(diào)的lncRNAs和128個(gè)下調(diào)的lncRNAs(fold-chang2,P0.05)。2.qRT-PCR結(jié)果顯示在缺血性腦卒中l(wèi)inc-DHFRL1-4、SNHG15和lincFAM98A-3的表達(dá)水平是高于短暫性腦缺血發(fā)作和健康人群的(P0.05)。3.縱向隨訪分析顯示缺血性腦卒中的linc-FAM98A-3在第7天恢復(fù)到正常人水平(P0.05),SNHG15在90天后仍然高于健康對照組(P0.05)。4.ROC曲線分析顯示lncRNAs的聯(lián)合診斷指數(shù)combination index在診斷缺血性腦血管疾病時(shí)是優(yōu)于單個(gè)lncRNA和血清BDNF及NSE,且AUC均大于0.84(P0.05)。5.lncRNAs的聯(lián)合診斷指數(shù)combination index與缺血性腦卒中的神經(jīng)功能缺損的嚴(yán)重程度密切相關(guān)(r=0.427,P0.001)。結(jié)論:lncRNAs的差異表達(dá)與缺血性腦血管疾病密切相關(guān),可作為一個(gè)新的潛在診斷方法。第二章長鏈非編碼RNA SNHG15在卒中后免疫抑制中的作用及其分子機(jī)制研究目的:本研究旨在探討長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA)SNHG15在卒中后免疫抑制中的作用及其分子機(jī)制。方法:通過磁珠分選、熒光定量PCR(q RT-PCR)以及免疫熒光分析SNHG15在缺血性腦卒中PBMCs各細(xì)胞中的表達(dá)情況;RNA pull-down和RNA免疫共沉淀檢測SNHG15與p-STAT6蛋白的結(jié)合能力,隨后Western blot分析SNHG15對STAT6磷酸化的作用;ELISA及q RT-PCR檢測SNHG15對細(xì)胞因子的影響;最后,利用q RT-PCR、熒光素酶基因報(bào)告實(shí)驗(yàn)和CHIP檢測p-STAT6與SNHG15啟動(dòng)子區(qū)的結(jié)合能力。結(jié)果:1.SNHG15在缺血性腦卒中的單核巨噬細(xì)胞中明顯高表達(dá)(P0.001)。2.SNHG15可與p-STAT6相互作用,并促進(jìn)STAT6的磷酸化作用。3.SNHG15過表達(dá)可部分抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型轉(zhuǎn)化,降低SNHG15可部分抑制IL-4誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化。4.p-STAT6入核后與SNHG15啟動(dòng)子區(qū)(~842-~856)結(jié)合,促進(jìn)SNHG15的轉(zhuǎn)錄。結(jié)論:SNHG15在單核巨噬細(xì)胞中通過促進(jìn)p-STAT6的合成參與調(diào)控巨噬細(xì)胞的極化,并且入核后的p-STAT6與SNHG15的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合,進(jìn)一步促進(jìn)SNHG15的表達(dá),從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型分化。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3
【圖文】：

候選lncRNAs篩選及驗(yàn)證流程

為了篩選出與急性缺血性腦卒中有關(guān)的 lncRNAs，本研究采用“HumanLncRNA Array v4”分析 5 對缺血性腦卒中和健康對照組的外周血單個(gè)有核細(xì)胞中的lncRNAs表達(dá)譜，結(jié)果顯示差異表達(dá)兩倍以上的lncRNAs有198個(gè)（圖1.3），其中有 70 個(gè) lncRNAs 上調(diào)，128 個(gè) lncRNAs 下調(diào)，詳細(xì)見表 1.11。圖 1.3 缺血性腦卒中 PBMCs 中差異表達(dá)的 lncRNAs注：A 5 對缺血性腦卒中和健康對照組篩選出差異表達(dá)的 lncRNAs 繪制的熱圖，紅色代表上調(diào)，綠色代表下調(diào)；B 散點(diǎn)圖顯示有 70 個(gè) lncRNAs 上調(diào)，128 個(gè) lncRNAs 下調(diào)；C 火山圖。表 1.11 lncRNAs 芯片篩選出的差異表達(dá)的 lncRNAs（fold change>2; P<0.05）NO. Regulation lncRNA ID Gene Symbol Chromosome Strand Start End1 up TCONS_00007196 linc-DHFRL1-4 3 - 96335998 963370602 up ENST00000576489.1 MIR22HG 17 - 1615873 1619504

NAs 微陣列芯片（A）和 qRT-PCR（B）檢測 5 個(gè) lncR1,***P<0.001. IS, ischemic stroke; HC, healthy control.的篩選和驗(yàn)證 8 個(gè)上調(diào)的候選 lncRNAs，本研究通過 qRT-PCR照組的 PBMCs 中進(jìn)一步檢測它們的表達(dá)水平。性腦卒中后明顯差異表達(dá)（P<0.05）（圖 1.5A）；性腦卒中患者中進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn) 3 個(gè) lncRNA（slc-FAM98A-3）在經(jīng)過治療后明顯下調(diào)（P<0.05）（

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本文編號：2755644