本文關(guān)鍵詞：bFGF調(diào)控IL-6表達(dá)的機(jī)制及bFGF-siRNA增強(qiáng)膠質(zhì)瘤化療敏感性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,它的特點(diǎn)是高致殘率和致死率。由于膠質(zhì)瘤在顱內(nèi)腦組織中呈浸潤、侵襲生長的特性,手術(shù)很難完全將其切除,加上膠質(zhì)瘤細(xì)胞異常的增殖能力,常常是復(fù)發(fā)的根源。此外,由于錯(cuò)綜復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境能夠營造適應(yīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的溫床,使其對放化療產(chǎn)生一種抵抗能力。由于這種特性的存在,手術(shù)加上放、化療并不能徹底清除殘余膠質(zhì)瘤細(xì)胞,從而導(dǎo)致膠質(zhì)瘤的復(fù)發(fā),使治療失敗,這是膠質(zhì)瘤患者治療失敗的主要原因。隨著各項(xiàng)生物技術(shù)研究水平的提高,與膠質(zhì)瘤密切相關(guān)的分子及其作用機(jī)制逐漸得到深入的研究,并且生產(chǎn)了許多針對特定分子的藥物來進(jìn)行治療的手段。此外,新發(fā)現(xiàn)的生物標(biāo)記物對于臨床腫瘤的惡性程度分級以及預(yù)后有重要價(jià)值,并且為我們的研究提供了很好的方向。因此,我們針對膠質(zhì)瘤特定分子標(biāo)記物進(jìn)行研究,希望能夠提供新的治療方案,從而指導(dǎo)臨床治療。目的:腫瘤微環(huán)境猶如肥沃的土壤,腫瘤細(xì)胞相當(dāng)于種子,這種特定的微環(huán)境的存在導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的生成、繁殖、遷移以及血管生成能力較正常組織更為活躍。結(jié)合本課題組前期發(fā)現(xiàn),b FGF作為膠質(zhì)瘤中高表達(dá)的細(xì)胞因子,對膠質(zhì)瘤細(xì)胞生存的微環(huán)境的維持有重要作用。此外,我們發(fā)現(xiàn)b FGF與膠質(zhì)瘤惡性程度相關(guān)的另一重要的細(xì)胞因子IL-6存在相互調(diào)控的關(guān)系。二者對于膠質(zhì)瘤惡性程度的維持有重要作用,并且存在相互調(diào)控的關(guān)系,因此,我們試圖通過破壞膠質(zhì)瘤細(xì)胞生存的微環(huán)境能夠削弱對化療藥物的抵抗能力。方法:我們將此研究分為兩部分:第一部分:重點(diǎn)研究在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中,外分泌的b FGF調(diào)控IL-6的表達(dá)機(jī)制。利用b FGF-si RNA技術(shù)沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞b FGF的表達(dá),另外一組加入重組人b FGF刺激膠質(zhì)瘤細(xì)胞后,檢測兩種干擾因素對IL-6的m RNA表達(dá)水平以及蛋白水平的改變,確定b FGF對IL-6的表達(dá)存在調(diào)控關(guān)系。進(jìn)一步,為明確b FGF通過何種機(jī)制調(diào)控IL-6的表達(dá),我們加入重組人b FGF之后,檢測MAPK(ERK1/2、p38、JNK)信號(hào)通路的磷酸化水平改變情況,確定b FGF的下游調(diào)控機(jī)制。此外,進(jìn)一步檢測IL-6相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子(AP-1、CREB、C/EBPβ)磷酸化水平以及是否NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核的情況。最后,我們預(yù)先利用特異性阻斷劑分別阻斷ERK1/2、p38、JNK信號(hào)通路,然后給予b FGF刺激,檢測下游IL-6的轉(zhuǎn)錄因子的活化水平。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定上下游關(guān)系,總結(jié)歸納出膠質(zhì)瘤微環(huán)境中b FGF調(diào)控IL-6表達(dá)的具體機(jī)制。第二部分:沉默b FGF的表達(dá)對增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤化療敏感性的研究。首先利用b FGF-si RNA下調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中b FGF的表達(dá),從而改變腫瘤微環(huán)境中的b FGF含量。轉(zhuǎn)染小干擾RNA的24小時(shí)后給予替莫唑胺治療,繼續(xù)化療48小時(shí)治療結(jié)束。然后,通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測到聯(lián)合治療組的膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖受到抑制情況最顯著;其次,通過流式細(xì)胞儀檢測到聯(lián)合組的細(xì)胞凋亡明顯增加,并且細(xì)胞周期在G0/G1期收到阻滯;然后,通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測到治療后聯(lián)合組的膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移能力明顯受到抑制;最后,經(jīng)Western Blot檢測凋亡和遷移相關(guān)蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平降低,而拮抗Bcl-2的蛋白Bax表達(dá)水平上調(diào),遷移相關(guān)蛋白MMP-2、MMP-9的表達(dá)水平的降低。結(jié)果:第一部分1、轉(zhuǎn)染b FGF-si RNA后,IL-6的m RNA的表達(dá)水平降低。給予b FGF刺激后IL-6的m RNA表達(dá)水平增加。2、轉(zhuǎn)染b FGF-si RNA后,IL-6的蛋白表達(dá)水平降低,給予b FGF刺激后IL-6的蛋白表達(dá)水平增加。3、給予b FGF刺激后,MAPK信號(hào)通路活化水平增強(qiáng),IL-6轉(zhuǎn)錄因子的活化增強(qiáng)。4、阻斷ERK1/2、JNK信號(hào)通路后,轉(zhuǎn)錄因子AP-1的磷酸化水平降低。阻斷p-38信號(hào)通路后,NF-κB的磷酸化水平降低。5、分別阻斷ERK1/2、p38、JNK通路,膠質(zhì)瘤細(xì)胞的IL-6蛋白表達(dá)水平明顯降低。第二部分1、聯(lián)合應(yīng)用b FGF-si RNA能夠增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制作用。2、聯(lián)合應(yīng)用b FGF-si RNA能夠增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用。3、聯(lián)合應(yīng)用b FGF-si RNA和替莫唑胺能夠?qū)е履z質(zhì)瘤細(xì)胞周期G0/G1期阻滯。4、聯(lián)合應(yīng)用b FGF-si RNA能夠增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移的抑制作用。5、b FGF-si RNA能夠增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞毒性的作用機(jī)制可能與MAPK信號(hào)通路相關(guān)。結(jié)論:1.b FGF通過MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)NF-κB和AP-1的磷酸化,進(jìn)而調(diào)控IL-6的表達(dá)。2.沉默b FGF的表達(dá)能夠增強(qiáng)替莫唑胺對膠質(zhì)瘤細(xì)胞的化療敏感性。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤堿性成纖維細(xì)胞因子(bFGF)IL-6 替莫唑胺聯(lián)合化療
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.41
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 縮略語/符號(hào)說明12-13
• 前言13-15
• 研究現(xiàn)狀、成果13
• 研究目的、方法13-15
• 一、膠質(zhì)瘤微環(huán)境中bFGF調(diào)控IL-6 表達(dá)機(jī)制的研究15-39
• 1.1 材料15-17
• 1.1.1 主要試劑15-17
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-27
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)17-19
• 1.2.2 利用小干擾RNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞以及重組bFGF刺激細(xì)胞19-20
• 1.2.3 通過RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測IL-6 mRNA表達(dá)水平的改變20-22
• 1.2.4 通過ELISA實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-6 蛋白的表達(dá)量22-23
• 1.2.5 通過Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測酸目的蛋白的磷化水平23-26
• 1.2.6 免疫熒光檢測NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核的情況26-27
• 1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析27
• 1.3 結(jié)果27-34
• 1.4 討論34-38
• 1.5 小結(jié)38-39
• 二、bFGF-siRNA促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞化療敏感性的研究39-55
• 2.1 材料39-41
• 2.1.1 主要試劑39-41
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備41
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法41-45
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)41
• 2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及藥物治療41-42
• 2.2.3 MTT實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖42
• 2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡42-43
• 2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期43-44
• 2.2.6 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力44-45
• 2.2.7 Western blot法檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)水平及磷酸化水平的改變45
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 2.3 結(jié)果45-51
• 2.3.1 聯(lián)合化療對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制45-46
• 2.3.2 聯(lián)合化療對膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響46-48
• 2.3.3 聯(lián)合化療對膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期的影響48
• 2.3.4 聯(lián)合化療對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移能力的影響48-49
• 2.3.5 檢測凋亡、遷移相關(guān)蛋白的表達(dá)水平的改變49-50
• 2.3.6 MAPK信號(hào)通路磷酸化水平的改變50-51
• 2.4 討論51-53
• 2.5 小結(jié)53-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-64
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明64-65
• 綜述 膠質(zhì)瘤耐藥性相關(guān)分子機(jī)制的研究進(jìn)展65-72
• 綜述參考文獻(xiàn)69-72
• 致謝72-74
• 個(gè)人簡歷74

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王淑杰;王金環(huán);張益?zhèn)?徐新女;劉宏勝;;堿性成纖維細(xì)胞生長因子小分子干擾RNA對膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U251增殖與凋亡的影響[J];癌癥;2008年09期

2 ;MAPK signal pathways in the regulation of cell proliferation in mammalian cells[J];Cell Research;2002年01期

  本文關(guān)鍵詞：bFGF調(diào)控IL-6表達(dá)的機(jī)制及bFGF-siRNA增強(qiáng)膠質(zhì)瘤化療敏感性的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：275462