【摘要】：目的:探討予ENT1(平衡型核苷轉(zhuǎn)運體-1)特異性抑制劑NBTI(硝基苯硫嘌呤核苷)預(yù)處理后,腦缺血再灌注(IR)大鼠的神經(jīng)功能評分及腦組織中腺苷A1受體的表達情況。方法:運用單側(cè)大腦中動脈閉塞(MCAO)法建立大鼠腦組織缺血再灌注模型,我們將成年雄性SD大鼠隨機分為正常組、假手術(shù)組、MCAO模型組(腦組織缺血再灌注后3 h、6 h、12 h、24 h、72 h)、NBTI組、DMSO(二甲基亞砜溶劑對照)組,其中每組n=10。造模成功后,通過平衡木實驗及運動機能測試對實驗鼠神經(jīng)功能缺損進行評估;HE染色觀察病理改變;Western Bloting和免疫組化檢測腺苷A1受體在不同組別大鼠腦組織海馬中的表達。結(jié)果:1.神經(jīng)功能缺損評估:1.1平衡木實驗評估結(jié)果:我們將平衡木實驗中評分為2-4分者納入正式實驗。除正常及假手術(shù)組,MCAO模型組及NBTI組、DMSO組均有不同程度的神經(jīng)功能缺損,且與正常組相比較,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。其中將予NBTI預(yù)處理后的腦缺血再灌注后24 h的實驗鼠行平衡木實驗后,我們可以發(fā)現(xiàn)NBTI組神經(jīng)功能缺損評分明顯低于IR 24h組(圖1)(P0.05)。1.2運動機能測試結(jié)果:在運動機能測試中較低的傾斜角度表明腦缺血再灌注損傷更嚴(yán)重。與正常組及假手術(shù)組相比較,MCAO模型組及NBTI組、DMSO組運動機能均較前者下降(P0.05)。其中NBTI組運動機能測試中傾斜角角度明顯高于MCAO后24h組(圖2)(P0.05)。2.HE染色結(jié)果:本部分實驗選擇正常組、IR 24h組及NBTI組大鼠腦組織標(biāo)本進行HE染色,我們發(fā)現(xiàn):正常組大鼠海馬神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)整齊、細胞分布繁密,層次分明,而在IR 24h組中見腦組織神經(jīng)細胞間隙增大、水腫,甚至存在神經(jīng)細胞壞死,細胞分布及結(jié)構(gòu)紊亂,核固縮;NBTI組也可見壞死的神經(jīng)細胞,程度較IR 24h減輕。3.Western Blot和免疫組化檢測腺苷A1受體在不同組別大鼠腦組織海馬中的表達3.1 Western Blot結(jié)果:各組均可見腺苷A1受體的表達;在MCAO模型組中,IR 3h組中腺苷A1受體的表達較正常組及假手術(shù)組減少(P0.05),隨著時間的延伸,腺苷A1受體表達漸減少,但在IR 12h組中腺苷A1受體的表達上升,在IR 72h組中腺苷A1受體的表達水平接近基礎(chǔ)水平(P0.05)(圖3)。在NBTI預(yù)處理后IR 24h組中腺苷A1受體仍有表達,且高于IR 24h組、低于正常組(均為P0.05)。DMSO組中腺苷A1受體的表達較IR 24h組無明顯差異。3.2免疫組化技術(shù)檢測正常組、IR 24h組及NBTI組中腺苷A1受體的表達情況:實驗鼠海馬中腺苷A1受體陽性染色的細胞主要為神經(jīng)細胞(圖5);另外,在IR 24h組中腺苷A1受體表達陽性細胞數(shù)較正常組明顯減少,細胞染色變淡;與IR 24h組相比,NBTI組腺苷A1受體表達增多,但與正常組相比,陽性細胞數(shù)數(shù)目仍有減少。結(jié)論:對IR大鼠予以ENT1特異性抑制劑NBTI預(yù)處理后,大鼠神經(jīng)功能得到改善,可能機制是抑制ENT1后可以增加腺苷A1受體的表達。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3
【圖文】：

圖 1 大鼠腦缺血再灌注后不同組別的平衡木實驗評分Fig.1 Balance group experimental scores of different groia reperfusion in ratshere was statistical significance in the difference of Balance group experimentad with the model group 24h after IR（#P ＜ 0.05)，*Compared with the Normal or Sha大鼠腦組織缺血再灌注不同組別（時間點）運動機能在對不同組別的 SD 大鼠進行平衡木實驗完成神經(jīng)功能缺損評 NBTI 預(yù)處理的實驗鼠其神經(jīng)功能損害有所降低，因為平衡木，故為進一步驗證，我們采用運動機能測試間接反應(yīng)實驗鼠

碩士學(xué)位論文 大鼠腦缺血再灌注后不同組別的機能測試中傾斜角角度（ x±S） tilt angle of different groups in the functional tests after ceS）oups n The tilt angle of digroups(degree)10 80.6±3.85tion 10 79.8±4.9710 35.6±4.88*10 53.0±6.32*#10 33.6±3.3*ed with the IR 24h group(#P ＜ 0.05)；*Compared with the Normal or Sham opera

大鼠腦缺血再灌注后不同組別、正常組及假手術(shù)組中腺苷 A1 受體灰度值e gray value ratio (adenosine A1 receptor/β-actin）of IR rats in difbasic expression of adenosine A1 receptor was found in the brain tissueation groups. The expression of adenosine A1 receptor in IR 3h group was lowd sham-operated groups in IR mice (P ＜ 0.05). With the extension of time, adeno gradually, but the expression of adenosine A1 receptor increased in brain t group, adenosine A1 receptor the level of body expression was close to the b no significant difference between normal group and sham operation group n of adenosine A1 in brain tissue of IR 3h, IR 6h and IR 12h IR 24h groups wan that of the normal and sham operation groups (P ＜ 0.05), but also signific of IR 72h group (P ＜ 0.05).

【參考文獻】

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本文編號：2753179