【摘要】：研究背景與目的:視神經(jīng)脊髓炎(Neuromyelitis optica,NMO)是一種由體液免疫紊亂介導(dǎo),細(xì)胞免疫廣泛參與的以視神經(jīng)和脊髓受累為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病。2015年Wingerchuk等人正式提出視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorder,NMOSD)的國(guó)際診斷標(biāo)準(zhǔn)。其發(fā)病多以青壯年女性居多,年患病率約為(1-5)/10萬(wàn),易感人群為非高加索人種,復(fù)發(fā)率及致殘率較高。目前已有的傳統(tǒng)治療方案不能有效控制疾病的復(fù)發(fā)及進(jìn)展,亟須探索新的免疫治療靶點(diǎn)。濾泡輔助性T細(xì)胞(follicular helper T,Tfh)是近來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新型CD4+T細(xì)胞亞群,主要在次級(jí)淋巴組織生發(fā)中心(Germinal Center,GC)中發(fā)揮免疫輔助作用,參與GC的形成、B細(xì)胞分化為成熟漿細(xì)胞、記憶細(xì)胞和抗體的生成等關(guān)鍵體液免疫應(yīng)答過(guò)程。因此,目前認(rèn)為T(mén)fh數(shù)量和功能的平衡紊亂可影響體液免疫,Tfh細(xì)胞的過(guò)度激活或相關(guān)分子的過(guò)度表達(dá)可導(dǎo)致自身免疫性疾病的發(fā)生。研究表明Tfh細(xì)胞和Tfh細(xì)胞相關(guān)免疫分子、免疫因子的過(guò)度激活和表達(dá)參與了許多自身免疫病的發(fā)病和復(fù)發(fā)。Tfh細(xì)胞表達(dá)特異性轉(zhuǎn)錄因子為B細(xì)胞淋巴瘤6(B cell lymphoma 6,Bcl-6),表面有多種免疫標(biāo)記分子,如趨化因子CXC基序受體5(chemokine C-X-C motif receptor 5,CXCR5)、程序死亡-1(programmed death-1,PD-1)、可誘導(dǎo)共刺激因子(inducible T-cell costimulatory,ICOS)、CD40配體(CD40 Ligand)等分子,并可分泌IL-4、IL-21等細(xì)胞因子,其中表面表達(dá)CD4,CXCR5,PD-1分子的Tfh細(xì)胞為循環(huán)血液中的Tfh細(xì)胞表型之一。CXCL13,(chemokine C-X-C motif ligand 13),又稱B淋巴細(xì)胞趨化因子-1(B lymphocyte chemoattractant-1,BLC-1),是趨化因子家族的重要代表成員之一,對(duì)次級(jí)淋巴組織中B細(xì)胞的增殖分化及吸引遷移至生發(fā)中心等過(guò)程發(fā)揮關(guān)鍵作用。同時(shí)最新研究表明CXCL13可作為GC的一種血漿標(biāo)志物,可反映Tfh細(xì)胞輔助B細(xì)胞免疫的效應(yīng)程度。本研究通過(guò)檢測(cè)視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病患者外周血CD4~+CXCR5~+PD-1~+Tfh細(xì)胞的比例及血清CXCL13水平,分析其與NMOSD分期、分型和臨床特點(diǎn)的關(guān)系,及Tfh細(xì)胞與CXCL13之間的相關(guān)關(guān)系和相互作用機(jī)制,探討Tfh和CXCL13在NMOSD發(fā)病和復(fù)發(fā)中的免疫作用,進(jìn)而為探索新的免疫治療靶點(diǎn)提供依據(jù)。方法:收集2016年10月至2017年12月期間于鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院的并診斷為NMOSD的患者外周血及血清,采集臨床資料及實(shí)驗(yàn)室檢查,其中NMOSD急性期患者30例,緩解期患者26例,其它非炎性神經(jīng)疾病組(other non-inflammatory neurological disorders,ONND)患者20例,包括8例短暫性腦缺血發(fā)作(transient ischemic attack,TIA),5例良性位置性眩暈(benign paroxysmal positional vertigo,BPPV),4例特發(fā)性癲癇,3例多系統(tǒng)萎縮。同一時(shí)期我院體檢的健康志愿者(healthy control,HC)20例作為對(duì)照組。分別采用流式細(xì)胞分析法和酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測(cè)定病例組和對(duì)照組外周血CD4~+CXCR5~+PD-1~+Tfh細(xì)胞比例及血清CXCL13的水平。采用spss24軟件處理數(shù)據(jù),使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差或中位數(shù)(P25,P75)形式表示計(jì)數(shù)資料。χ2檢驗(yàn)比較分類資料,兩獨(dú)立樣本間比較用t檢驗(yàn),多組定量資料比較用單因素方差分析或Kruskal-Wallis方法,隨后進(jìn)行組間兩兩比較。當(dāng)P0.05時(shí),認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.NMOSD組、ONND組和對(duì)照組之間外周血Tfh細(xì)胞比例的比較NMOSD急性期組、NMOSD緩解期組、ONND組和HC組中外周血CD4~+CXCR5~+PD-1~+Tfh細(xì)胞比例分別為(10.38±3.81)%,(6.07±2.03)%,(5.57±2.42)%,(3.95±2.00)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),急性期組顯著高于緩解期組、ONND組、HC組(P0.01,P0.001,P0.001)。2.NMOSD組、ONND組和對(duì)照組之間血清CXCL13水平的比較NMOSD急性期組、NMOSD緩解期組、ONND組和HD組中血清CXCL13水平分別為233.57±116.81pg/ml,158.64±61.08pg/ml,71.80±31.97pg/ml,46.10±24.48pg/ml,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且NMOSD急性期組和緩解期組均顯著高于ONND組、HC組(P0.001,P0.001;P0.01,P0.001)。3.NMOSD患者外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平與AQP4抗體和脊髓病變的關(guān)系NMOSD急性期、緩解期AQP4-IgG(+)組外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平高于AQP4-IgG(-)組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001,P=0.013;P=0.047,P=0.049)。NMOSD急性期、緩解期組長(zhǎng)節(jié)段脊髓病變(病變節(jié)段≥3)組外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平明顯高于短節(jié)段脊髓病變(病變節(jié)段3)(P0.001,P=0.003;P0.001,P=0.003)。4.NMOSD患者外周血Tfh細(xì)胞比例與血清CXCL13水平的相關(guān)關(guān)系NMOSD急性期、緩解期外周血Tfh細(xì)胞比例和血清CXCL13水平之間均呈正相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.796,P0.01;r=0.736,P0.01)。5.NMOSD患者外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平與EDSS評(píng)分和ARR的相關(guān)關(guān)系NMOSD急性期患者外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平與EDSS評(píng)分均呈正相關(guān)性關(guān)系(r=0.688,P0.001;r=0.740,P0.001=。緩解期Tfh與EDSS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.464,P=0.017),而CXCL13與EDSS評(píng)分之間無(wú)明顯關(guān)系(r=0.148,P=0.469)。急性期患者外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平與ARR均呈正相關(guān)性關(guān)系(r=0.522,P=0.003;r=0.503,P=0.005)。緩解期外周血Tfh細(xì)胞比例與ARR評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.429,P=0.029),而CXCL13與ARR評(píng)分之間無(wú)明顯關(guān)系(r=0.304,P=0.131)。6.NMOSD急性期患者外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平與腦脊液蛋白、細(xì)胞數(shù)的相關(guān)關(guān)系NMOSD急性期患者外周血Tfh細(xì)胞比例、血清CXCL13水平與腦脊液蛋白含量均呈正相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.543,P=0.005;r=0.467,P=0.019)。而與腦脊液細(xì)胞數(shù)與Tfh、CXCL13均無(wú)顯著關(guān)系(r=0.299,P=0.147;r=0.112,P=0.595)。結(jié)論:1.外周血Tfh細(xì)胞、血清CXCL13參與NMOSD的發(fā)病過(guò)程,并與疾病活動(dòng)性相關(guān),二者可作為NMOSD的生物學(xué)標(biāo)志物。2.CXCL13可作為T(mén)fh細(xì)胞和B細(xì)胞免疫活性的標(biāo)志物,推測(cè)Tfh細(xì)胞-B細(xì)胞紊亂是參與NMOSD致病的重要環(huán)節(jié)。3.外周血Tfh細(xì)胞、血清CXCL13可作為反映疾病嚴(yán)重程度、病變特點(diǎn)和預(yù)后的指標(biāo)。4.Tfh細(xì)胞、CXCL13可能通過(guò)增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫反應(yīng)參與疾病發(fā)病過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R744.52
【圖文】：

12圖 1 NMOSD 急性期、NMOSD 緩解期、ONND 組和 HC 組外周血濾泡輔助性 T 細(xì)胞比（A.外周血細(xì)胞分布；B.以 FSC 和 CD4 設(shè)門(mén)，圈出 CD4+T 細(xì)胞;C-F:以 PD-1 和 CXCR門(mén)圈出 Tfh 細(xì)胞，C:NMOSD 急性期，D：NMOSD 緩解期，E:ONND 組，F(xiàn)：HC 組）

圖 2 NMOSD 急性期、NMOSD 緩解期、ONND 組和 HC 組外周血濾泡輔助性 T 細(xì)胞比例（A.散點(diǎn)圖；B.柱狀圖；NMOSDA: NMOSD 急性期；NMOSD R： NMOSD 緩解期；** P＜0.01；*** P＜0.001）3.3 NMOSD 急性期組、NMOSD 緩解期組、ONND 組和 HC 組中血清 CXCL13 水平的比較（表 5、圖 3）經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后，NMOSD 急性期組、NMOSD 緩解期組、ONND 組和 HD 組中 血 清 CXCL13 水 平 均 符 合 正 態(tài) 分 布 ， 分 別 為 233.57±116.81pg/ml ，158.64±61.08pg/ml，71.80±31.97pg/ml，46.10±24.48pg/ml，采用 Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，經(jīng) Bonferroni 法兩兩比較后，NMOSD急性期組與 ONND 組、HC 組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001，P＜0.001＝，NMOSD 緩解期組與 ONND 組、HC 組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，P＜0.001）。表 5 NMOSD 急性期、NMOSD 緩解期、ONND 組和 HC 組血清 CXCL13 水平

圖 3 NMOSD 急性期、NMOSD 緩解期、ONND 組和 HC 組血清 CXCL13 水平（A.散點(diǎn)圖；B.柱狀圖；NMOSD A: NMOSD 急性期；NMOSD R： NMOSD 緩解期；** P＜0.01；*** P＜0.001）3.4 NMOSD 患者中 AQP4-IgG（+）組與 AQP4-IgG（-）組中外周血濾泡輔助性 T 細(xì)胞比例的比較（表 6、圖 4）NMOSD 急 性 期 患 者 的 外 周 血 Tfh 細(xì) 胞 比 例 為 ： AQP4-IgG(+) 組（11.81±3.58）%，AQP4-IgG(-)組（7.04±1.68）%，兩組經(jīng) t 檢驗(yàn)后，AQP4-IgG(+)組外周血 Tfh 細(xì)胞比例明顯高于 AQP4-IgG(-)組（P＜0.001）。NMOSD 緩解期患者的外周血 Tfh 細(xì)胞比例為:AQP4-IgG(+)組(6.64±1.90)%，AQP4-IgG(-)組(4.99±1.91)%，t 檢驗(yàn)后 AQP4-IgG(+)組外周血 Tfh 細(xì)胞比例顯著高于 AQP4-IgG(-)組（P=0.047）。表 6 NMOSD 組中 AQP4(+)組和 AQP4(-)組外周血濾泡輔助性 T 細(xì)胞比例

【參考文獻(xiàn)】

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1 楊彬彬;吳茜;孫林;郁迪;劉磊;喬志新;王佳偉;;NMOSD患者外周血濾泡輔助性T細(xì)胞及其亞群的表達(dá)研究[J];中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志;2017年06期

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本文編號(hào)：2751637