【摘要】：目的1.建立中國(guó)人群接觸性熱痛誘發(fā)電位(CHEPs)正常參考值。2.采用CHEPs客觀評(píng)價(jià)虛擬現(xiàn)實(shí)(VR)的鎮(zhèn)痛作用,評(píng)價(jià)反復(fù)應(yīng)用VR其鎮(zhèn)痛作用是否降低。3.研究中國(guó)人群腓骨肌萎縮癥臨床和基因突變特點(diǎn)。4.探討中腦星形膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(MANF)在S63de1 MPZ突變RT4-6P2T施萬(wàn)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)中的作用。方法1.于2014年12月31日至2016年12月31日招募健康志愿者151名,分別在右前臂掌側(cè)、C7棘突右側(cè)、T12棘突右側(cè)以及右外踝上方進(jìn)行CHEPs檢查。探討不同刺激次數(shù)、不同基線溫度對(duì)CHEPs參數(shù)的影響;評(píng)價(jià)年齡、性別對(duì)CHEPs參數(shù)的影響,建立正常參考值;評(píng)價(jià)CHEPs短期、長(zhǎng)期重復(fù)性。2.于2016年3月1日至2016年12月31日招募健康志愿者76名,分別于基線水平和VR體驗(yàn)下進(jìn)行CHEPs檢查,并連續(xù)三周重復(fù)檢查;客觀評(píng)價(jià)VR的鎮(zhèn)痛作用,探討反復(fù)應(yīng)用VR其鎮(zhèn)痛作用是否減弱。3.收集2012年12月31日至2017年12月31日就診于解放軍總醫(yī)院且臨床診斷為CMT的患者151名,進(jìn)行病史采集、神經(jīng)系統(tǒng)查體、實(shí)驗(yàn)室檢查、神經(jīng)傳導(dǎo)檢查(NCS)以及高通量靶向測(cè)序,研究其臨床和基因突變特點(diǎn)。4.構(gòu)建慢病毒載體質(zhì)粒 pLVX-MPZ(MUT)-PGK-Puro 和 pLVX-PGK-Puro,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RT4-D6P2T細(xì)胞系。實(shí)驗(yàn)分組:空白對(duì)照組、空白對(duì)照+MANF組、慢病毒組、慢病毒+MANF 組、S63de1MPZ 組、S63delMPZ+MANF 組;MANF干預(yù)時(shí)間為24h。采用CCK8進(jìn)行細(xì)胞增值-毒性檢測(cè);采用Annexin-FITC/PI雙染、流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè);采用JC-1進(jìn)行線粒體膜電位檢測(cè)(△Ψm);檢測(cè)各組 MANF、GRP78、CHOP mRNA;Western Bloting 檢測(cè)各組MANF、GRP78、CHOP等蛋白表達(dá);使用共聚焦顯微鏡檢測(cè)各組MANF、GRP78、CHOP等蛋白表達(dá);ER-Tracker、mito-tracker觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體形態(tài);檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子濃度。結(jié)果1.(1)分別進(jìn)行3次、5次、10次刺激后發(fā)現(xiàn),N2-P2波幅(χ2 = 54.64,P0.001)隨刺激次數(shù)增加明顯下降;(2)年齡和性別的交互因素對(duì)右前臂掌側(cè)“N2波潛伏期/身高(msec/cm)”有顯著影響(P=0.017)。隨著年齡的增長(zhǎng),“N2波潛伏期/身高(msec/cm)”延長(zhǎng),;女性健康志愿者“N2波潛伏期/身高(msec/cm)”較男性健康志愿者縮短。年齡因素對(duì)T12處“P2波潛伏期/身高(msec/cm)”(P=0.015)以及右外踩上方N2-P2波幅有顯著影響(P0.001),隨著年齡的增長(zhǎng),“P2波潛伏期/身高(msec/cm)”延長(zhǎng);N2-P2波幅下降;(3)建立了中國(guó)人群CHEPs正常參考值;基線溫度升高至35℃時(shí),N2波潛伏期/身高明顯縮短(t = 5.45,P0.001),P2波潛伏期/身高明顯縮短(χ2 =-4.06,P0.001),N2-P2 波幅明顯升高(T =-5.01,P0.001);(4)CHEPs 具有良好的短期及長(zhǎng)期重復(fù)性。2.在VR環(huán)境下,N2波潛伏期/身高較基線水平明顯延長(zhǎng)(F = 9.497,P = 0.002),N2-P2波幅較基線水平明顯下降(F = 65.752,P0.001),VAS評(píng)分較基線水平明顯下降(F = 28.43,P0.001)。反復(fù)應(yīng)用VR其鎮(zhèn)痛作用并不減弱。VAS評(píng)分與N2-P2波幅呈中度相關(guān)關(guān)系(r = 0.532,P0.001)。3.120例臨床診斷為CMT的患者進(jìn)行了基因檢測(cè),41例攜帶已報(bào)道致病基因,明確診斷為CMT;16例攜帶未報(bào)道突變,考慮可能致病;23例攜帶未報(bào)道突變,考慮為非致病突變;10例證實(shí)或可能為其他疾病;30例未查到基因突變。在明確診斷為CMT的41例患者中,14(34%)例為PMP22基因重復(fù)突變,診斷為CMT1A;9(22%)例為GJB1基因突變,診斷為CMTX1;其中24例為CMT1型,占所有明確診斷CMT患者的59%;PMP22基因重復(fù)突變導(dǎo)致的CMT1A占CMT1的58%。4.(1)S63delMPZ組與前四組相比,細(xì)胞增殖能力下降(P0.001),凋亡增加(P0.001);S63delMPZ+MANF 組與 S63delMPZ 組相比,細(xì)胞增殖增多(P=0.005),凋亡減少(P0.001)。(2)S63del MPZ 組△Ψm下降(P0.001)(3)S63del MPZ 組 MANF、GRP78、CHOP mRNA 較前表達(dá)增加(P0.001);S63del MPZ+MANF 組與 S63del MPZ 組相比,GRP78、CHOP mRNA 表達(dá)下降(P0.001)。(4)在免疫印跡分析中,S63delMPZ 組 MANF、GRP78、CHOP、ATF6、P-PERK/PERK、P-IRE1/IRE1、Bax、Caspase3 表達(dá)上調(diào)(P0.001),Bc12 表達(dá)下調(diào)(P0.001);S63delMPZ+MANF 組與 S63delMPZ 組相比,GRP78、CHOP、ATF6、Bax、Caspase3 表達(dá)下調(diào)(P0.001),Bcl2 表達(dá)上調(diào)(P0.001)。(5)在免疫熒光分析中,S63delMPZ 組 MANF、GRP78、CHOP、Bax、Caspase3 表達(dá)上調(diào)(P0.001),Bc12 表達(dá)下調(diào)(P0.001);S63del MPZ+MANF 組與 S63del MPZ 組相比,GRP78、CHOP、Bax、Caspase3表達(dá)下調(diào)(P0.001),Bcl2 表達(dá)上調(diào)(P0.001)。(6)在 S63delMPZ 組,ERtracker、mito-tracker可見(jiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體形態(tài)改變。(7)在S63delMPZ組,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子濃度下降,S63del MPZ+MANF組與S63del MPZ組相比,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子濃度升高。結(jié)論1.(1)建立了不同年齡組、不同性別中國(guó)人群CHEPs正常參考值范圍;(2)CHEPs各項(xiàng)參數(shù)受年齡、性別影響;(4)提高基線溫度后,CHEPs潛伏期縮短、波幅升高;(5)CHEPs具有較好的短期和長(zhǎng)期重復(fù)性。2.(1)CHEPs客觀評(píng)價(jià)了 VR技術(shù)的鎮(zhèn)痛作用;(2)反復(fù)應(yīng)用VR其鎮(zhèn)痛作用不會(huì)降低。3.(1)豐富了我國(guó)CMT臨床和基因突變資料;(2)發(fā)現(xiàn)的未報(bào)道可能致病突變拓展了 CMT的基因譜。4.(1)S63del MPZ 突變 RT4-6P2T 施萬(wàn)細(xì)胞產(chǎn)生 ERS;(2)MANF 在 S63del MPZ突變RT4-D6P2T施萬(wàn)細(xì)胞ERS中具有保護(hù)性作用。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R746.4
【圖文】：

對(duì)其父母、姐姐進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)：父母均為雜合突變，姐姐為純和突變；攜帶逡逑ＹＡＲＳ（ｃ．ｌ７６Ｔ＞Ｃ）宋變的患者，母親攜帶這一突變，父親不攜帶這一突變；攜帶逡逑ＧＪＢｌＣｃ．４９０Ｃ＞Ｔ；）突變的患者，家族中多人患�。▓D１），家族中患者均攜帶這一逡逑突變。１６名患者基因突變情況見(jiàn)表４。逡逑邐■堒逡逑ｋ—Ｊ邋＾逡逑□—４邐ａ—－0邐６＾３逡逑■邐ｍ邐0逡逑／逡逑圖１攜帶未報(bào)道ＧＪＢｌ（ｃ．４９０Ｃ＞Ｔ）突變家系逡逑表４邋１６例未報(bào)道基因突變特點(diǎn)逡逑左側(cè)正中神經(jīng)逡逑編邐家族運(yùn)動(dòng)傳導(dǎo)速度逡逑號(hào)邐基因突變邐氨基酸改變邐史邐（ｍ／ｓ）邐疾病亞型逡逑＿１邐ＬＩＴＡＦ（ｃ．３２Ｃ＞Ｇ）邐ｐ．ＴｌｌＳ邐＋邐２８邐ＣＭＴ１Ｃ逡逑＿２邐ＰＭＰ２２（ｃ．ｌｌ７Ｇ＞Ｔ）邐ｐ．Ｗ３９Ｃ邐＋邐２３邐ＣＭＴ１Ｅ逡逑＿３邐ＮＥＦＬ（ｃ．２８０Ｃ＞Ｔ）邐ｐ．Ｌ９４Ｆ邐＋邐３２邐ＣＭＴ１Ｆ逡逑４邐ＭＦＮ２（ｃ．４９７Ｃ＞Ｔ）邐ｐ．Ａ１６６Ｖ邐＋邐４３邐ＣＭＴ２Ａ逡逑邐ＡＡＲＳ（ｃ．８２６Ｇ＞Ａ）邐ｐ．Ａ２７６Ｔ邐＋邐４１邐ＣＭＴ２Ｎ逡逑６邐ＤＹＮＣ１Ｈ１（ｃ．１１７６５Ｃ＞Ｔ）邐ｐ．Ｐ３９２２Ｌ邐－邐４１邐ＣＭＴ２０逡逑７邐ＬＲＳＡＭｌ（ｃ．ｌ９３０Ｇ＞Ｔ）邐ｐ．Ｇ６４４Ｃ邐－邐３９邐ＣＭＴ２Ｐ逡逑８邐ＬＲＳＡＭｌ（ｃ．ｌｌ７８Ｔ＞Ａ）邐ｐ邋N３９３Ｑ邐－邐４２邐ＣＭＴ２Ｐ逡逑５８逡逑

邐解放軍醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文邐逡逑結(jié)果逡逑１．各組細(xì)胞培養(yǎng)２４ｈ后的細(xì)胞形態(tài)逡逑各組ＲＴ４－Ｄ６Ｐ２Ｔ大鼠源性施萬(wàn)細(xì)胞于５％Ｃ０２，邋３７°Ｃ細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)２４邋ｈ逡逑后完全貼壁，細(xì)胞伸出偽足，呈不規(guī)則形，各組細(xì)胞形態(tài)、密度、生長(zhǎng)狀況無(wú)明逡逑顯差異（圖１）。逡逑

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本文編號(hào)：2735581