【摘要】：目的:1.初步驗(yàn)證p53-VEGFR2在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中存在合成致死作用;2.探討p53-VEGFR2合成致死在抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)中的初步作用。研究?jī)?nèi)容及方法:選取p53野生型和突變型人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U87和U251并培養(yǎng),首先通過(guò)蛋白質(zhì)印記法(Western Blotting,WB)驗(yàn)證兩者是否為p53野生型和p53突變型細(xì)胞。設(shè)計(jì)并合成針對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2,VEGFR2)的3種不同條帶的siRNA,用脂質(zhì)體包裹VEGFR2-siRNA并分別轉(zhuǎn)染至U87和U251細(xì)胞中。每種細(xì)胞共分四組:空白對(duì)照組(blank control,BC)不轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體,陰性對(duì)照組(negative control,NC)轉(zhuǎn)染無(wú)義序列-siRNA,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組(Liposome transfection,LT)轉(zhuǎn)染空白脂質(zhì)體,實(shí)驗(yàn)組(VEGFR2-siRNA transfection,VT)分別轉(zhuǎn)染3種不同條帶的VEGFR2-siRNA。通過(guò)Western Blotting篩選出抑制率最高的siRNA序列及該序列的最適濃度。使用空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):1、Western blotting檢測(cè)U87和U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA前后蛋白表達(dá)水平;2、CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;3、劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移性;4、Transwell小室法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力;5、平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞聚集性。結(jié)果:1、轉(zhuǎn)染siRNA后,U87和U251細(xì)胞VEGFR2蛋白表達(dá)均降低,U251蛋白表達(dá)水平明顯低于U87。2、CCK-8檢測(cè)到U87和U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA后,兩者的增殖能力均減弱,U251增殖受抑制率明顯高于U87。3、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示U87和U251轉(zhuǎn)染siRNA后遷移能力均下降,U251遷移能力下降較U87更明顯。4、Transwell小室法的結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染siRNA的U87和U251細(xì)胞的侵襲能力均下降,U251侵襲能力U87相比顯著下降。5、細(xì)胞平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染siRNA的U87和U251細(xì)胞的集落形成能力均下降,U251細(xì)胞轉(zhuǎn)染后聚集能力明顯低于U87。結(jié)論:1、p53和VEGFR2在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中存在合成致死作用;2、p53-VEGFR2合成致死對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.41
【圖文】：

需要處理的圖像采用 image J7 進(jìn)行分析和處理；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析誤（mean+SEM）表示。組內(nèi)比因素方差分析(two-wayANOV 時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。含量U251 GAPDH 表達(dá)明顯高于 U7。結(jié)合背景知識(shí)，可以確認(rèn) p53 蛋白；U251 為 p53 突變型后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供真實(shí)可靠的細(xì)胞

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文對(duì)照組及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組 VEGFR2 蛋白相對(duì)表達(dá)量無(wú)明顯差異，而轉(zhuǎn)染siRNA1 的 U87 細(xì)胞 VEGFR2 蛋白表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從而我們可以認(rèn)為在三種 siRNA 序列中，siRNA對(duì) U87 的轉(zhuǎn)染效率最高，調(diào)控蛋白表達(dá)最明顯。因此對(duì)于轉(zhuǎn)染 U87 細(xì)胞而言，后續(xù)實(shí)驗(yàn)采用 siRNA1 行轉(zhuǎn)染處理。

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1 梁賽;p53-VEGFR2合成致死抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的初步研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2734211