【摘要】：目的:1.初步驗證p53-VEGFR2在人腦膠質瘤細胞中存在合成致死作用;2.探討p53-VEGFR2合成致死在抑制人腦膠質瘤細胞生長中的初步作用。研究內容及方法:選取p53野生型和突變型人腦膠質瘤細胞U87和U251并培養(yǎng),首先通過蛋白質印記法(Western Blotting,WB)驗證兩者是否為p53野生型和p53突變型細胞。設計并合成針對血管內皮細胞生長因子受體2(Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2,VEGFR2)的3種不同條帶的siRNA,用脂質體包裹VEGFR2-siRNA并分別轉染至U87和U251細胞中。每種細胞共分四組:空白對照組(blank control,BC)不轉染脂質體,陰性對照組(negative control,NC)轉染無義序列-siRNA,脂質體轉染組(Liposome transfection,LT)轉染空白脂質體,實驗組(VEGFR2-siRNA transfection,VT)分別轉染3種不同條帶的VEGFR2-siRNA。通過Western Blotting篩選出抑制率最高的siRNA序列及該序列的最適濃度。使用空白對照組和實驗組進行以下實驗:1、Western blotting檢測U87和U251細胞轉染siRNA前后蛋白表達水平;2、CCK-8法檢測細胞增殖能力;3、劃痕實驗檢測細胞遷移性;4、Transwell小室法檢測細胞侵襲能力;5、平板細胞克隆形成實驗檢測細胞聚集性。結果:1、轉染siRNA后,U87和U251細胞VEGFR2蛋白表達均降低,U251蛋白表達水平明顯低于U87。2、CCK-8檢測到U87和U251細胞轉染siRNA后,兩者的增殖能力均減弱,U251增殖受抑制率明顯高于U87。3、劃痕實驗結果顯示U87和U251轉染siRNA后遷移能力均下降,U251遷移能力下降較U87更明顯。4、Transwell小室法的結果顯示,轉染siRNA的U87和U251細胞的侵襲能力均下降,U251侵襲能力U87相比顯著下降。5、細胞平板細胞克隆形成實驗結果表明,轉染siRNA的U87和U251細胞的集落形成能力均下降,U251細胞轉染后聚集能力明顯低于U87。結論:1、p53和VEGFR2在人腦膠質瘤細胞中存在合成致死作用;2、p53-VEGFR2合成致死對人腦膠質瘤細胞的生長有明顯的抑制作用。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

需要處理的圖像采用 image J7 進行分析和處理；統(tǒng)計學分析誤（mean+SEM）表示。組內比因素方差分析(two-wayANOV 時認為差異具有統(tǒng)計學意義。含量U251 GAPDH 表達明顯高于 U7。結合背景知識，可以確認 p53 蛋白；U251 為 p53 突變型后續(xù)實驗提供真實可靠的細胞

天津醫(yī)科大學碩士學位論文對照組及脂質體轉染組 VEGFR2 蛋白相對表達量無明顯差異，而轉染siRNA1 的 U87 細胞 VEGFR2 蛋白表達明顯低于空白對照組及陰性對照組P＜0.05，有統(tǒng)計學意義。從而我們可以認為在三種 siRNA 序列中，siRNA對 U87 的轉染效率最高，調控蛋白表達最明顯。因此對于轉染 U87 細胞而言，后續(xù)實驗采用 siRNA1 行轉染處理。

【相似文獻】

相關碩士學位論文 前1條

1 梁賽;p53-VEGFR2合成致死抑制膠質瘤細胞生長的初步研究[D];天津醫(yī)科大學;2019年

本文編號：2734211