【摘要】：目的:檢測和明確腫瘤-睪丸相關(guān)抗原ACRBP ORF的選擇性剪接區(qū)mRNA的存在,檢測此剪接異構(gòu)體在不同類型的惡性腦腫瘤組織中的表達(dá)情況,探討ACRBP的剪接異構(gòu)體的表達(dá)與惡性腦腫瘤類型、ACRBP基因的相關(guān)性。方法:(1)臨床腫瘤標(biāo)本收集:2013年-2018年住院并手術(shù)的腦腫瘤患者膠質(zhì)瘤63例(星形細(xì)胞瘤33例,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤30例),髓母細(xì)胞瘤29例。(2)細(xì)胞培養(yǎng):選擇實驗室穩(wěn)定傳代的細(xì)胞株SHG-44(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)、Hep G2(肝癌細(xì)胞)、SMMC7721(人肝癌細(xì)胞)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。(3)通過選擇性剪接相關(guān)數(shù)據(jù)庫(Alternative Splicing Database,ASD)對ACRBP基因可能存在的選擇性剪接異構(gòu)體進(jìn)行預(yù)測。針對預(yù)測結(jié)果,使用Primer Premier 5.0和Oligo 6.0軟件設(shè)計目標(biāo)選擇性剪接異構(gòu)體的PCR引物,使用RT-PCR技術(shù)檢測預(yù)測剪接異構(gòu)體在腦腫瘤樣本和細(xì)胞株中的表達(dá)情況。對表達(dá)結(jié)果陽性的細(xì)胞株樣本的PCR擴增產(chǎn)物送公司測序。應(yīng)用計算機軟件對測序結(jié)果進(jìn)行序列的比對分析,經(jīng)過驗證從細(xì)胞株樣本中提取的mRNA序列與生物信息學(xué)預(yù)測的序列一致,確定為新的剪接異構(gòu)體后,對表達(dá)結(jié)果陽性的腦腫瘤樣本采用實時定量PCR反應(yīng),檢測目標(biāo)剪接異構(gòu)體在腦腫瘤組織中的表達(dá)情況,分析ACRBP的剪接異構(gòu)體與臨床參數(shù)的相關(guān)性。結(jié)果:(1)TA克隆測序證實了RT-PCR擴增產(chǎn)物為目的基因;(2)成功設(shè)計了ACRBP-V5a的特異性引物;(3)從預(yù)測的選擇性剪接異構(gòu)體中篩選并證實了一種新型的人類ACRBP基因的剪接異構(gòu)體——V5a的存在;(4)Hep G2(肝癌細(xì)胞),SMMC7721(人肝癌細(xì)胞)表達(dá)ACRBP-V5a剪接異構(gòu)體;(5)不同類型的腦腫瘤組織中,該剪接異構(gòu)體表達(dá)陽性率,結(jié)果如下:星形細(xì)胞瘤30.3%(10/33),膠質(zhì)母細(xì)胞瘤33.3%(10/30),髓母細(xì)胞瘤48.3%(14/29),總陽性率37.0%(34/92);在不同類型的腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a的表達(dá)情況不存在差異(P0.05);(6)在不同性別患者的腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a剪接異構(gòu)體的表達(dá)無明顯差異(P0.05);在高年齡組與低年齡組患者的腦腫瘤組織中,V5a剪接異構(gòu)體的表達(dá)無明顯差異(P0.05);在KPS評分≥70和KPS評分70患者的腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a剪接異構(gòu)體的表達(dá)無明顯差異(P0.05);高級別與低級別腦腫瘤組織中ACRBP-V5a的表達(dá)無明顯差異(P0.05);(7)在不同等級和不同類型的ACRBP-V5a陽性腦腫瘤組織中,ACRBP-V5a剪接變體的相對表達(dá)水平在年齡、腫瘤分級和腫瘤類型中存在統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),而在性別和卡氏功能狀態(tài)評分標(biāo)準(zhǔn)(KPS)等方面沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:ACRBP-V5a為一種新型的選擇性剪接異構(gòu)體,可表達(dá)于多種類型的人類腦腫瘤和肝癌中。該剪接異構(gòu)體的表達(dá)與腦腫瘤類型及其發(fā)生、發(fā)展可能有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41
【圖文】：

圖 1 ACRBP-V5a PCR 產(chǎn)物電泳圖Figure 1ACRBP-V5a PCR products electrophoresisRBPE5-8/ACRBP-V5a 在陽性樣本中的相對表達(dá)水平星形膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和髓母細(xì)胞瘤患者 ACRBP-V5a 陽性，ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 相對表達(dá)水平（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）分別為胞瘤 107.3±160.3、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 50.3±23.0、髓母細(xì)胞瘤 3.2±3.2（采用 Mann-Whitney U-檢驗,對星形細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和髓母細(xì)樣本，按照腫瘤類型進(jìn)行兩兩分類比較，其中星形細(xì)胞瘤和膠質(zhì)之間 ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 的表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）胞瘤和髓母細(xì)胞瘤之間 ACRBPE5-8/ACRBP-V5a 的表達(dá)水平有統(tǒng)計（P<0.01）,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和髓母細(xì)胞瘤之間 ACRBPE5-8/ACRBP-V

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本文編號：2725946