發(fā)布時(shí)間：2020-06-18 13:53

【摘要】：研究背景及意義:腦卒中是一種多因素疾病,環(huán)境因素和遺傳因素的交互作用在腦卒中發(fā)病中具有重要的作用。全球每年約有1500萬腦卒中病人,其中20%是致死的,50%以上的病人失去了生活自理能力。缺血性腦卒中約占腦卒中的85%以上,在中國其所占比例逐年增加,并且出現(xiàn)年輕化的趨勢(shì)。單核苷酸多態(tài)性是最常見的遺傳變異類型,分子遺傳學(xué)的最新進(jìn)展使人們意識(shí)到單核苷酸多態(tài)性與腦卒中存在密切的關(guān)聯(lián)。超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是唯一已知的直接清除自由基的酶,是保護(hù)細(xì)胞的必需的抗氧化酶。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明SOD與腦卒中存在密切關(guān)聯(lián)。蛋白脫乙�；�9(Histone Deacetylase,HDAC9)基因通過染色質(zhì)結(jié)構(gòu)修飾對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控,但不改變DNA序列,HDAC9被鑒定為迄今為止大血管卒中的最強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)基因。然而研究基因SOD2(rs2842960)、SOD3(rs7655372)、HDAC9(rs723296)位點(diǎn)多態(tài)性與腦卒中之間的相關(guān)性尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)為了解大理州居民腦卒中的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素破譯其基本機(jī)制、促進(jìn)新治療靶點(diǎn)的識(shí)別和優(yōu)化預(yù)防策略提供科學(xué)依據(jù)。研究目的:研究基因SOD2(rs2842960)、SOD3(rs7655372)、HDAC9(rs723296)多態(tài)性與大理州腦卒中患者之間相關(guān)性。方法:實(shí)驗(yàn)采用病例-對(duì)照方法,隨機(jī)選取符合研究目的的漢族腦卒中患者155名及漢族健康者128名。實(shí)時(shí)PCR方法對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增,改良型Taqman熒光定量技術(shù)對(duì)每個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。采用t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)、Logistics回歸統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)腦卒中傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素進(jìn)行分析;利用哈迪-溫伯格平衡定律對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行遺傳平衡檢測(cè),Logistics回歸分析校正傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素分析各SNP位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)腦卒中易感性影響;直線回歸分析rs723296多態(tài)性與血脂水平的關(guān)聯(lián)。多因子降維方法分析基因-基因交互作用對(duì)腦卒中的影響。結(jié)果:⑴傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素:空腹血糖(p=0.00 OR=2.885,95%CI 1.86-4.41),膽固醇(p=0.00 OR=2.378,95%CI 1.55-3.66),甘油三酯(p=0.013 OR=1.657,95%CI1.11-2.47),低密度脂蛋白(p=0.013 OR=1.641,95%CI 1.11-2.42),白細(xì)胞(p=0.00 OR=1.515,95%CI 1.27-1.81),收縮壓(p=0.03 OR=1.017,95%CI 1.00-1.03),紅細(xì)胞(p=0.007 OR=0.477,95%CI 0.28-0.82),p均小于0.05。⑵基因SOD2(rs2842960)顯性模型中基因型中CC/(CT+TT):p=0.383,OR=0.767,95%CI:0.423-1.392。⑶基因SOD3(rs7655372)加性模型中GG/GA:p=0.028,OR=3.188,95%CI:1.134-8.962。⑷基因HDAC9(rs723296)加性模型中TC/TT:p=0.021,OR=2.669,95%CI:1.046-4.923。⑸基因HDAC9(rs723296)與血脂在實(shí)驗(yàn)組中:低密度脂蛋白(β=0.171,p=0.456),膽固醇(β=-0.141,p=0.502),甘油三酯(β=0.035,p=0.865);在對(duì)照組中:低密度脂蛋白(β=0.364,p=0.301),膽固醇(β=-0.573,p=0.083),甘油三酯(β=0.340,p=0.337),p均大于0.05,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑹基因SOD2(rs2842960)、SOD3(rs7655372)、HDAC9(rs723296)之間有較強(qiáng)的交互作用(交叉一致性為10),但對(duì)腦卒中發(fā)病并無顯著影響(p㧐0.05)。結(jié)論:基因SOD3(rs7655372)、HDAC9(rs723296)多態(tài)性增加了大理州居民腦卒中患病風(fēng)險(xiǎn),基因SOD2(rs2842960)多態(tài)性與腦卒中易感性無關(guān)。基因HDAC9(rs723296)位點(diǎn)多態(tài)性與血脂水平并無關(guān)聯(lián)。基因SOD2(rs2842960)、SOD3(rs7655372)、HDAC9(rs723296)基因-基因交互作用對(duì)腦卒中發(fā)病并無顯著影響。
【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R743.3
【圖文】：

大理大學(xué)碩士學(xué)位論文第十一節(jié) 改良型 TaqMan 熒光定量技術(shù)識(shí)別/檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性或突變的方法應(yīng)具有高度的特異性和方面，聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction ,PCR）為許多分子要的分析性能。本實(shí)驗(yàn)對(duì) SNP 檢測(cè)采用 TaqMan 熒光探針技術(shù)，在術(shù)基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針，對(duì) SNP 位點(diǎn)進(jìn)行快速準(zhǔn)確的分析。改熒光探針技術(shù)相比于傳統(tǒng)酶切電泳法有一下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：1、相比TaqMan 熒光定量技術(shù)檢測(cè)環(huán)境封閉，避免了擴(kuò)增產(chǎn)物人為因素污染性的產(chǎn)生；2、光譜技術(shù)提高了檢測(cè)的靈敏性；3、熒光探針雜交，特異性；4、此過程均為一體化，這使得 SNP 檢測(cè)更為簡單和快捷。

圖4 DNA樣本純度檢測(cè)（濃度為268.7ng/l，OD260/OD280為1.76）第三節(jié) DNA 完整性檢測(cè)凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果如圖 5 所示。9 號(hào)泳道加入 DNA marker，其余 1-17 號(hào)泳道加入為 DNA 樣本，其中 10、15號(hào)泳道出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象，說明次樣本 DNA完整性較差，舍棄重新提取。DNA marker 跑出條帶分子量大小由上到下依次為5000bp、3000bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp。1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 1750

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6 謝立移;樊e

本文編號(hào)：2719348