【摘要】：目的:探索時間序列下神經(jīng)病理性疼痛大鼠模型中的關(guān)鍵差異表達基因;探究腺相關(guān)病毒工具在該類疼痛中過表達神經(jīng)肽Y等關(guān)鍵基因效應(yīng),研究其對痛閾改善效應(yīng)。方法:1.分析神經(jīng)病理性疼痛造模后不同時點大鼠基因芯片,獲得關(guān)鍵基因,分析關(guān)鍵基因表達聚類及相關(guān)功能,構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò);在其他數(shù)據(jù)集中檢驗關(guān)鍵基因表達差異。2.成年SD(Sprague-Dawley)大鼠隨機分4組。前三組分別脊髓內(nèi)注射轉(zhuǎn)載神經(jīng)肽Y過表達基因工具腺相關(guān)病毒、陰性對照病毒及生理鹽水,后均選擇性結(jié)扎坐骨神經(jīng);空白對照假手術(shù)組僅切開后縫合。所有動物行特定時點BBB評分(Basso Beattie Bresnahan Score)及機械痛閾測定,測定完成后取L5段脊髓,免疫組化測定神經(jīng)肽Y表達。結(jié)果:共篩檢出神經(jīng)肽Y等738個時間序列下關(guān)鍵差異表達基因;采用腺相關(guān)病毒工具實現(xiàn)神經(jīng)肽Y在腺相關(guān)病毒組大鼠的過表達,14d后仍能檢測到神經(jīng)肽Y免疫活性;所獲神經(jīng)肽Y過表達大鼠機械痛閾升高(P0.05)。結(jié)論:1.神經(jīng)肽Y等700余個基因是神經(jīng)病理性疼痛不同時點下的關(guān)鍵調(diào)控基因;2.腺相關(guān)病毒介導(dǎo)下,神經(jīng)肽Y在大鼠脊髓組織中過表達可持續(xù)至造模后14日;3.腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的神經(jīng)肽Y在大鼠脊髓組織中的過表達與大鼠行為學(xué)和機械痛閾的改善具有一定相關(guān)性。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R741
【圖文】：

目的基因序列為在人和大鼠間共保守表達（最終表達產(chǎn)物氨基PY（NM_000905），采用載體為 GV388，元件順序 CMVbGlLAG-WPRE-hGHpolyA，該載體含有一個增強型綠色熒光標記Fluorescent Protein; GFP）�？寺∥稽c為 BamHI / BamHI。實驗的圖譜見圖 2-1。為保證實驗的可比性，采用 CON336 病毒為。 目 的 基 因 片 段 引 物 共 兩 段 ， TAGTGGAATGGATCCCGCCACCATGCTAGGTAACAAGCGACCATGGTGGCGGGATCCCACATTGCAGGGTCTTCAAGC-產(chǎn)包裝過程包括將上述該目的片段克隆入重組質(zhì)粒，AAV-293，觀察出毒、純化與病毒滴度質(zhì)量控制。實驗所用腺相關(guān)病毒化學(xué)技術(shù)有限公司包裝；最終測得實驗用到待測腺相關(guān)病毒病1012。動物飼養(yǎng)與分組圖 2-1 腺相關(guān)病毒載體圖譜

GsE3o691表達量箱線圖

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本文編號：2718428