【摘要】：研究目的:聲動力治療作為一種新的腫瘤治療方法已引起越來越多的關注。然而,聲敏劑難于穿過血腦屏障、無法顱內(nèi)示蹤以及無影像引導的超聲激勵限制了其在腦腫瘤上的應用。研究表明,iRGD能協(xié)助藥物穿透血腦屏障并靶向腫瘤內(nèi)遞送:卟啉及其衍生物可以與金屬離子鰲合形成金屬卟啉。基于此,本次研究擬將聲敏劑華卟啉鈉與錳離子鰲合獲得錳-卟啉,進而構建iRGD靶向載錳-華卟啉脂質(zhì)體,利用iRGD的作用實現(xiàn)聲敏劑在腦膠質(zhì)瘤中的靶向滲透,借助磁共振成像觀察其在腫瘤中的聚集,并引導超聲定點激勵聲敏劑,以期達到精準聲動力治療腦膠質(zhì)瘤的目的。所獲得結論可為研究iRGD靶向載錳-華卟啉脂質(zhì)體磁共振影像引導聲動力治療顱內(nèi)瘤的效果、生物安全性及其相關機制提供相關思路,為聲動力治療腫瘤以及其他疾病提供新的思路和方法。研究方法及結果:第一部分:Mn-華卟啉鈉靶向脂質(zhì)體的制備與表征本研究利用DVDMS的化學結構中H離子可被Mn離子代替形成卟啉類金屬化合物的特性將其鰲合成DVDMS-Mn納米顆粒。并選擇標準PEG化脂質(zhì)體和iRGD化脂質(zhì)體作為DVDMS-Mn納米顆粒的載藥平臺。結果表明:①通過氮吹薄膜水化法制得粒徑為LP-DVDMS、LP、iRGDLP粒徑分別為:96±2.26 nm、106±2.32 nm、110±2.6nm。并通過透射電鏡、馬爾文Nano-ZS90型動態(tài)光散射粒徑分析儀、MRI對三種脂質(zhì)體進行表征分析。②在Lp、iRGDLP脂質(zhì)體最終脂質(zhì)體中DVDMS:Mn的比例約1:2。第二部分:計算Mn-華卟啉鈉靶向脂質(zhì)體包封率方法利用紫外分光光度法測定各種脂質(zhì)體中華卟啉鈉的載藥濃度,利用電感耦合等離子體光譜儀ICP測定脂質(zhì)體中Mn2+的濃度。兩者比例進行評估,判定脂質(zhì)體中DVDMS:Mn的真實鰲合比例。結果表明:①LP-DVDMS、LP、iRGDLP三者的包封率分別為:65%、73%、71%。②在Lp、iRGDLP脂質(zhì)體最終脂質(zhì)體中DVDMS-Mn 的比例為 1:1.98。第三部分:Mn-華卟啉鈉靶向脂質(zhì)體細胞內(nèi)的抗腫瘤效應研究將實驗分為六組:Control 組、US only 組、LP、iRGDLP、LP+US、iRGDLP+US。Control組不做處理;USonly組不做藥物孵育處理,僅以1W、10%占空比的聚焦探頭超聲作用1 min;LP組僅以2 μm的LP脂質(zhì)體與細胞孵育8小時,不做超聲處理;iRGDLP組以2 μm的iRGDLP脂質(zhì)體與細胞孵育8小時,不做超聲處理。LP+US組以2 μm的LP脂質(zhì)體與細胞孵育8小時,然后用1W、10%占空比的聚焦探頭超聲作用1 min;iRGDLP+US組以2 μm的iRGDLP脂質(zhì)體與細胞孵育8小時,然后用1W、10%占空比的聚焦探頭超聲作用1 min;建立細胞瘤球模型。然后得出:①LP、iRGDLP組分別為53 nm、102 nm。在相同時間內(nèi)其滲透深度是Lp組的1.84倍。②在有超聲作用時,LP、IRGDLP兩組均能產(chǎn)生ROS,且靶向肽iRGDLP組產(chǎn)生的熒光強度要比普通脂質(zhì)體LP組多,殺死細胞能力更強。第四部分:Mn-華卟啉鈉靶向脂質(zhì)體活體內(nèi)的抗腫瘤效應研究首先成功建立小鼠顱內(nèi)原位瘤模型,然后將荷瘤小鼠按照腫瘤大小平均分為六組每組 5 只:Control 組、US only 組、LP、iRGDLP、LP+US、iRGDLP+US。Control:每只老鼠僅注射生理鹽水200 μl;LP組:每只老鼠經(jīng)尾靜脈注射0.02 μmol LP脂質(zhì)體,不進行超聲治療;iRGDLP組:每只老鼠經(jīng)尾靜脈注射0.02 μmol iRGD-1P-DVDMS-Mn,不進行超聲治療;單純US組:每只老鼠僅注射生理鹽水200μl,在第2 h、8 h時進行超聲輻射,頻率為1 MHz,10%的duty,每次1min;LP+US組:每只老鼠經(jīng)尾靜脈注射0.02μmolLP-DVDMS-Mn,在藥物注射后僅第2h、8h時進行超聲輻射,頻率為1MHz,10%的duty,每次1min;iRGDLP+US組:每只老鼠經(jīng)尾靜脈注射0.02 μmol iRGD-LP-DVDMS-Mn,在藥物注射后僅第2 h、8 h時進行超聲輻射,頻率為1MHz,10%的duty,每次1min。結果顯示::①Control、LP、iRGDLP、US、LP+US、IRGDLP+US各組經(jīng)流式細胞儀檢測各組的凋亡比例分別為2.3%、7.1%、9.5%、3.7%、14.4%、20%。②顱內(nèi)熒光檢測在第17、20天時,iRGDLP+US組腫瘤大小約為Control的1/4-1/3大小。③超聲對腫瘤增長有所影響,超聲可以稍微減緩腫瘤的增長速率,iRGDLP+US組生存期超40天,對腫瘤生長抑制作用更強。研究結論:1、體外實驗:制備的iRGDLP具備DVDMS-Mn核,是一種具有聲敏性質(zhì)的既能磁共振成像效果又能具有T1增強的獨特優(yōu)勢。2、細胞層面,iRGDLP組能夠更多的聚集于腫瘤細胞中,且相比DVDMS有更高的安全性。iRGDLP+US組具有高度腫瘤殺傷作用。3、瘤球層面,iRGDLP組在瘤球模型中有絕對的靶向優(yōu)勢(平均浸潤深度:iRGDLP 組為 102 nm,LP 組為 53nm)。4、動物實驗中,iRGDLP+US組對顱內(nèi)腫瘤生長抑制作用更強(對照LP組、iRGDLP組、LP+US組)、iRGDLP+US組小鼠的生存期更長。5、不同處理組心、肝、脾、肺、腎的HE染色表示未進行超聲作用的部位,脂質(zhì)體對其損傷非常小。腫瘤部位流式細胞檢測顯示iRGDLP+US組的凋亡占比更高,腫瘤的殺傷作用更大。 【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41

【圖文】：

圖１．１邋ＬＰ－ＤＶＤＭＳ、ＬＰ、ｉＲＧＤＬＰ脂質(zhì)體粒徑分布圖逡逑

邐ＬＰ－ＤＶＤＭＳ－Ｍｎ邐ｉＲＧＤ－ＬＰ－ＤＶＤＭＳ－Ｍｎ逡逑圖１．１邋ＬＰ－ＤＶＤＭＳ、ＬＰ、ｉＲＧＤＬＰ脂質(zhì)體粒徑分布圖逡逑１．３．２脂質(zhì)體的表征逡逑１．３．２．１脂質(zhì)體的形態(tài)觀察逡逑如圖邋１．２，，從左到右依次為邋ＬＰ－ＤＶＤＭＳ、ＬＰ（ＬＰ－ＤＶＤＭＳ－Ｍｎ），ｉＲＧＤＬＰ（ｉＲＧＤ－逡逑Ｌｐ－ＤＶＤＭＳ－Ｍｎ），在不同放大倍數(shù)下，均呈形規(guī)則的圓形顆粒，分布均勻，脂質(zhì)逡逑體的粒徑在１００邋ｎｍ左右。逡逑＇：＇ｒ，ＩＨＨ逡逑—疆ｓ畫，：翁逡逑＝悘岕

本文編號：2711931