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Cys-C、miRNA-155及miRNA-21在無(wú)癥狀性腦梗死患者中的表達(dá)與診斷價(jià)值分析

發(fā)布時(shí)間:2020-06-10 18:46
【摘要】:背景與目的無(wú)癥狀性腦梗死(asymptomatic cerebral infarction,ACI)是腦梗死(cerebral infarction,CI)中的一種特殊類型。ACI是指臨床上無(wú)任何腦梗死病史、缺乏特異性神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征而由尸檢或影像學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)的腦梗死。雖然ACI患者僅表現(xiàn)為一過(guò)性或短暫的頭暈、頭痛或情緒低落,但已證實(shí)ACI患者發(fā)生癥狀性腦梗死(symptomatic cerebral infraction,SCI)、血管性癡呆(vascular dementia,VD)的概率顯著高于健康人群。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為,ACI是SCI與VD的前期階段。因此,盡早發(fā)現(xiàn)、診治ACI是預(yù)防缺血性腦部病變的關(guān)鍵。近年來(lái),隨著CT、MRI的應(yīng)用,ACI在人群中的檢出率,尤其在老年人群中的檢出率逐年升高,但由于影像學(xué)檢查費(fèi)用較高且有潛在的輻射、基層地區(qū)設(shè)備缺乏,因此仍急需新的生物標(biāo)志物用于鑒別診斷ACI,從而積極預(yù)防缺血性腦部病變。胱抑素C(cystatin-c,Cys-C)是一種半胱氨酸蛋白酶抑制劑。Cys-C在人體有核細(xì)胞中始終穩(wěn)定表達(dá),不受性別、年齡、飲食、代謝影響,臨床上常通過(guò)檢測(cè)Cys-C值用來(lái)反映腎小球?yàn)V過(guò)率。近年來(lái),不斷有研究發(fā)現(xiàn),血清Cys-C水平與顱內(nèi)外動(dòng)脈狹窄、腦梗死及腦梗死后認(rèn)知執(zhí)行功能密切相關(guān)。國(guó)外學(xué)者提出,Cys-C可以作為腦梗死的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性單鏈非編碼RNA,其長(zhǎng)度約為21-24個(gè)核苷酸,通過(guò)直接降解靶mRNA或抑制其轉(zhuǎn)錄后翻譯從而調(diào)控基因的表達(dá)。MiR-155作為一種經(jīng)典多功能基因,一直都受到廣泛的關(guān)注。以往研究表明,miR-155在腦梗死患者中表達(dá)水平高于健康人群。此外,miR-155的含量與神經(jīng)缺損程度呈正相關(guān)。臨床實(shí)驗(yàn)表明,miR-21不僅與腦膠質(zhì)瘤密切相關(guān),而且在CI患者中呈高表達(dá)狀態(tài)。綜上所述,Cys-C、miR-155、miR-21與CI存在一定相關(guān)性,但在ACI患者中具體表達(dá)情況尚未清楚,目前仍然缺乏診斷ACI的生物標(biāo)記物。因此,本研究通過(guò)檢測(cè)健康人群、ACI患者及SCI患者中Cys-C、miR-155、miR-21的表達(dá)水平,評(píng)估它們作為診斷ACI患者的臨床價(jià)值。方法1.研究對(duì)象:分別選取鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科確診的ACI患者80例、SCI患者80例作為ACI組、SCI組。同期收集與患者性別、年齡相匹配的健康體檢者50例作為健康對(duì)照(healthy control,HC)組。2.標(biāo)本收集及檢測(cè):抽取外周靜脈血4ml于黃色分離膠促凝管,離心分離血清后立即于Roche cobas 8000儀器上檢測(cè)Cys-C濃度。抽取外周靜脈血4ml于枸櫞酸鈉抗凝管,離心分離血漿,采用RNAiso Blood試劑(Takara公司,貨號(hào):9112,日本)提取血漿總RNA。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)各標(biāo)本miR-155、miR-21的表達(dá)水平。3.統(tǒng)計(jì)分析:使用SPSS 20.0及GraphPad Prism 5.0分別對(duì)三組Cys-C、miR-155、miR-21的表達(dá)情況進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,編輯受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線,根據(jù)ROC曲線下面積(area under the curve,AUC)、敏感度、特異度來(lái)評(píng)價(jià)Cys-C、miR-155、miR-21單獨(dú)或聯(lián)合對(duì)鑒別診斷ACI患者的臨床價(jià)值。4.靶基因預(yù)測(cè):選用TargetScan、miRDB、mirBase靶基因預(yù)測(cè)軟件分別對(duì)miR-155、miR-21進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),并應(yīng)用DAVID 6.7在線分析庫(kù)進(jìn)行GO分析和KEGG通路富集分析。結(jié)果1.ACI組與HC組相比,Cys-C、miR-155、miR-21表達(dá)水平升高(1.11±0.21vs.0.866±0.19,P0.001;0.085±0.047 vs.0.033±0.013,P0.001;0.071±0.022vs.0.045±0.018,P0.001);SCI組與ACI組相比,Cys-C、miR-155、miR-21表達(dá)水平升高(1.42±0.26 vs.1.11±0.21,P0.001;0.183±0.098 vs.0.085±0.047,P0.001;0.103±0.032 vs.0.071±0.022,P0.001)。結(jié)果顯示,ACI組Cys-C、miR-155、miR-21表達(dá)水平與HC組、SCI組比較有明顯差異(P0.001)。2.Cys-C鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別為0.798、0.833,靈敏度分別為73.75%、80.00%,特異度分別為76.00%、73.75%。結(jié)果顯示,Cys-C對(duì)鑒別ACI患者與健康人群、SCI患者具有一定臨床價(jià)值。3.MiR-155鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別為0.880、0.821,靈敏度分別為75.00%、70.00%,特異度分別為85.42%、90.00%。結(jié)果顯示,miR-155對(duì)鑒別ACI患者與健康人群、SCI患者具有一定臨床價(jià)值。4.MiR-21鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別為0.810、0.785,靈敏度分別為64.20%、78.75%,特異度分別為92.00%、72.84%。結(jié)果顯示,miR-21對(duì)鑒別ACI患者與健康人群、SCI患者具有一定臨床價(jià)值。5.Cys-C聯(lián)合miR-155鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別是0.915、0.835,靈敏度分別是96.25%、80.00%,特異度分別是78.00%、73.85%。Cys-C聯(lián)合miR-21鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別是0.897、0.870,靈敏度分別是97.50%、71.25%,特異度分別是76.00%、96.25%。miR-155聯(lián)合miR-21鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別是0.881、0.953,靈敏度分別是63.75%、100.00%,特異度分別是94.00%、87.50%。Cys-C、miR-155聯(lián)合miR-21鑒別ACI組與HC組、SCI組的AUC分別是0.913、0.869,靈敏度分別是95.00%、86.25%,特異度分別是78.00%、78.57%。結(jié)果顯示,Cys-C聯(lián)合miR-155在診斷ACI患者和健康人群中的效果優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)及其他聯(lián)合指標(biāo),對(duì)鑒別ACI和健康人群具有較高臨床價(jià)值。miR-155聯(lián)合miR-21在診斷ACI患者和SCI患者中的效果優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)及其他聯(lián)合指標(biāo),對(duì)預(yù)測(cè)ACI發(fā)展為SCI具有較高臨床價(jià)值。6.DAVID 6.7生物學(xué)分析結(jié)果顯示:miR-155預(yù)測(cè)靶基因的功能包括細(xì)胞凋亡、后腦發(fā)育、血管生成等生物學(xué)過(guò)程;富集通路包括MAPK信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路等。miR-21預(yù)測(cè)靶基因的功能包括血管重塑、神經(jīng)元凋亡、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞遷移等生物學(xué)過(guò)程;富集通路包括MAPK信號(hào)通路、TGF-β信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路等。結(jié)論1.Cys-C聯(lián)合miR-155在診斷ACI患者和健康人群中的效果優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)及其他聯(lián)合指標(biāo),對(duì)鑒別ACI和健康人群具有較高臨床價(jià)值。2.MiR-155聯(lián)合miR-21在診斷ACI患者和SCI患者中的效果優(yōu)于單個(gè)指標(biāo)及其他聯(lián)合指標(biāo),對(duì)預(yù)測(cè)ACI發(fā)展為SCI具有較高臨床價(jià)值。
【圖文】:

表達(dá)水平,純度,濃度


圖 1 Cys-C 在 HC 和 ACI 與 SCI 組中的表達(dá)水平RNA 的濃度及純度檢測(cè)NA 的 OD 260/280 值在 1.8-2.0 之間,,純度符合要

表達(dá)水平


miR-155在HC和ACI與SCI組中的表達(dá)水平
【學(xué)位授予單位】:鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2019
【分類號(hào)】:R743.3

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本文編號(hào):2706703

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